临床微生物质量控制专家讲座

临床微生物质量控制湖南省肿瘤医院检验科黄宏君

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临床微生物质量控制第1页内容二、临床微生物质量控制三、标本采集和运输四、细菌判定基本步骤五、细菌药品敏感试验六、试验室质量确保和汇报规范化七、工作中常见问题和处理方法八、目标一、临床微生物试验室主要性临床微生物质量控制第2页一、临床微生物试验室主要性人类面临着微生物挑战，要打赢这场战争不但需要有经验医生，还需要一支优异临床微生物检验队伍。与过去10年或20年相比，临床微生物试验室规模和发展速度已经发生了巨大改变。当前，我们离CLSI(临床试验室标准化研究所)标准化文件要求还相差很远，我们应进行规范操作，才可能应对微生物向人类挑战，才能适应临床需要。临床微生物检验，在感染性疾病及相关病患诊疗治疗预防及研究工作中起着越来越主要作用，为了保障检验结果准确性和可靠性，日常工作中要注意开展质量控制。临床微生物质量控制第3页一、临床微生物试验室主要性临床微生物检验目标和意义提供感染性疾病诊疗病原学依据为医院感染流行病学调查提供依据为感染性疾病治疗提供用药依据细菌耐药性监测需要为合理使用抗菌药品提供依据为生物安全、医院感染管理和监控预防提供科学依据临床微生物质量控制第4页分析后质量控制范围分析前分析中二、临床微生物质量控制质量保持连续改进临床微生物质量控制第5页临床微生物检验质量控制相关概念为了确保质量控制，我们需注意：标本质量（数量、体积、可接收合格标本、运输方式等）试验方法有效性（依据临床症状、诊疗和其它临床资料，采取适当检测方法）试验操作方法和步骤、试剂、培养基、仪器、环境、人员等。有临床意义结果汇报（汇报准确、清楚、及时和完整）二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第6页

临床微生物质量控制依据标准卫生部医政司颁布《全国临床检验操作规程》，美国临床试验标准化委员会（CLSI）主要颁布最新质量控制和评议方案。检验方法学、操作手册应不停更新，开展循诊医学，不停淘汰无价值试验，增加新有临床价值试验。二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第7页临床微生物制度制订程序性文件（可参考ISO15189认可准则中应用说明要求）SOP操作手册仪器性能验证等二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第8页临床微生物试验室基本装备孵育箱、CO2培养箱、高压器生物安全柜或安全罩试剂、染液、质控菌株、培养基冰箱、酒精灯、接种环、游标卡尺、温度计等二、临床微生物质量控制光学显微镜临床微生物质量控制第9页室内质控室内质控内容包含对各种试验条件及试验过程进行监督监督对象有仪器设备、培养基、判定系统及操作全过程二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第10页临床微生物室需建立室内质控

11234常规试验室内质控培养基质控药敏试验质控自动化设备质控：判定和药敏、血培养系统二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第11页ATCC：美国经典菌株保留中心-主要起源NCTC：英国国家经典菌株保留中试验中用标准方法判定，判定值>95％经典菌株，并经屡次传代，特征衡定菌株质控菌株

参考菌株临床分离菌二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第12页质控必备菌株细菌名称菌号用途金黄色葡萄球菌ATCC25923纸片扩散质控金黄色葡萄球菌ATCC29213MIC测定质控大肠杆菌ATCC25922纸片和MIC绿脓假单胞菌ATCC27853纸片和MIC粪肠球菌ATCC29212胸腺嘧啶含量测定淋病奈瑟菌ATCC49226淋球菌药敏流感嗜血杆菌ATCC49247嗜血杆菌药敏肺炎克雷伯菌ATCC700603ESBL阳性菌二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第13页低温速冻苛养细菌冷冻干燥长久保留菌株参考菌株保留方法高层琼脂非苛养菌二、临床微生物质量控制琼脂斜面现用菌株临床微生物质量控制第14页室间质评—样本检测操作程序1.测试环境、仪器、试剂要求室温：20～25℃湿度：<80%试剂：所用试剂或试条均为仪器配套产品质控品：为仪器配套产品，并在使用效期内，同时无变质或污染。仪器：仪器必须有质量控制确保。2.质评样品准备按测定日期从冰箱中取出参评物，放置至室温(约30min)。依据标本种类，质控菌株分到各组进行培养分离判定。3.质评样品测定质控菌株用小牛血清或肉汤溶解，按标本种类接种各种选择培养基，放适当环境培养。培养分离病原菌，依据病原菌种类进行判定和耐药表型检测，并依据质控要求，病原菌进行药敏试验(重复2次)。4.填写报表或网上回报填写报表时应按要求逐项填写，字迹清楚整齐。填写完后再次查对，以防笔误、样本号次序错误等。然后则测定者、室责任人签字。5.结果存档填写完后复印或将网页另存，一份寄出，一份存档，以备核查。二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第15页室间质评评价方法1.单项PT值评分标准每一批号每一项目结果在允许范围内时，测定结果合格，得分为100%，若在允许范围外时，测定结果不合格，得分为0%。单个项目标得分计算公式为：(该项目标合格结果数÷该项目标总测定样本数)×100%。合格：该项目标测定成绩≥80%

不合格：该项目标测定成绩≤80%2.总项目标PT值评分标准总项目标计算公式为：

(总项目标合格结果数÷总项目标总测定样本数)×100%

合格：总项目标测定总分≥80%

不合格：总项目标测定总分≤80%3.部临检中心给参加试验室发证书要求合格证书：每年每个专业参加2次或3次以上，不得缺席，每次有五个调查样本。每次总项目标测定总分≥80%；颁发合格证书。参加证书：不符合合格证书要求和标准均颁发参加证书。

注意：若失控，应将调查全部失控原因及相关纠正办法，并做好统计，上报科质量控制小组和科主任，由科主任签字后，质控结果归档保留。二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第16页试验室前质量控制患者准备标本采集标本保留与送检验收和登记标本正确评定

二、临床微生物质量控制临床微生物质量控制第17页标本质量控制采集标准：捕捉病原菌并保留其活性，以提升检出率，尽可能防止非病原菌污染和干扰。标本采前集准备：向临床提供标本采集手册，对搜集和运输标本容器控制，无菌、不易碎、足够大，防止用木质棉拭子（因为棉中所含脂肪酸以及从木棒中渗出树脂和甲醛对细菌有抑制作用）对细菌有毒害。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第18页正确运输和保留方式需进行细菌学检测全部标本，最好在搜集后2h内送到试验室。量少标本在采集后15-30分钟内送检。对环境敏感细菌包含志贺氏菌、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌和流感嗜血杆菌（对低温敏感）等均应马上处理。通惯用于细菌学检验标本在4°C存放不超出24h，而病毒检测标本可于4°C存放2-3天。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第19页标本验收仔细查对，标本标识是否与申请单一致和唯一，对不合格标本要拒收。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第20页标本拒收标准错误标签标本泄露，标本显著被污染拭子上标签干掉或者标本量不够标本不适合所要求试验运输标本时间过长或所用运输培养基不适当三、标本采集和运输临床微生物质量控制第21页标本评定—有可靠标本质量评价方法痰标本中>10个上皮细胞/LP、<25个WBC/LP为不合格标本有培养价值粪便标本：涂片镜检WBC>5个/HP，未经抗菌药品治疗连续性腹泻患者粪便伤口标本：如出现上皮细胞，提醒标本已受皮肤菌群污染，高倍视野中超出5个鳞状上皮细胞伤口标本不适合做厌氧培养三、标本采集和运输临床微生物质量控制第22页血液细菌培养

临床上疑为败血症、脓毒血症或其它血流感染患者，需做血液细菌培养以明确病原。及时、准确地从患者血液中分离出病原菌，才能正确实施有效地抗菌治疗，从而有利于提升治愈率和降低医疗费用。

1.采血时机应在用抗菌素治疗前,最好在患者发冷发烧前半小时采血为宜。2.采血次数与间隔急性感染患者：从两臂分别采2份血样（两套）。感染性心内膜炎患者：24h内采血3次,每次间隔不少于30分钟。发烧原因不明患者：24～48h后可再采血2次,间隔不少于60分钟。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第23页呼吸道标本细菌培养标本留取质量好坏直接影响到对下呼吸道病原学诊疗标本采集要尽可能降低上呼吸道正常菌群干扰应在用药前或停药1天后留取标本。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第24页痰采集方法自然咳痰：必须用清水漱口3次，应包含咽喉部，马上用力咳出痰，于灭菌容器中或输送培养基中；支气管镜或支气管毛刷:由医生采集，提议直接种入输送培养基处理痰首先用灭菌生理盐水将痰液洗3次，然后将痰块打坏，或加入等量10g/L胰蛋白酶将痰块消化后再接种。合格标本

外观为脓痰、粘液、血，涂片镜检<10个上皮细胞/LP、>25个WBC/LP为合格标本。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第25页泌尿道标本细菌培养应在用药前或停药5天后留取标本,并使尿液在膀胱内停留6～8h以上。尽可能防止或降低尿道口正常菌群干扰。清洁中段尿、导尿导管尿、经耻骨上皮肤穿刺采集膀胱内尿液，送检标本以晨起第一次尿液为佳尿量不宜太多，试管塞子与尿液不应直接接触留取导尿管尿要排空导尿管内陈旧尿液，倘留置尿管超出三天应防止采取。标本采集后马上送检，不能马上送检者，可暂存4℃冰箱，但保留不超出8h三、标本采集和运输临床微生物质量控制第26页粪便标本培养应在发病早期而且尽可能在用抗生素治疗前采集，稀便不少于1ml，固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子采集标本。要挑取含脓、黏液、血等病理改变或水样粪便送检。直肠拭子采样量要足够，拭子上肉眼应可见粪便。注意事项：⑴即使粪便标本本身含很多细菌但也要用无菌容器。⑵厌氧细菌（难辩梭菌）培养标本应尽可能降低与空气接触。⑶注意挑取脓血便或粘液便做培养⑷要进行分区划线。如图所表示。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第27页分泌物培养1.对开放性病灶采集：如眼结膜脓性分泌物、扁桃体、外耳道、手术后切口、导管治疗感染、瘘管内脓液、生殖道分泌物等均属于开放性病灶。应先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌，去除旧分泌物，用灭菌拭子采集病灶深部分泌物，也可取感染部位下组织送检。2.闭锁性脓肿：如淋巴脓肿、肺脓肿、肝脓肿、腹腔脓肿、盆腔脓肿等，对封闭脓肿常采取穿刺或引流方法采样，应在用药前采集，应注意脓液气味、性状、颜色注意厌氧菌存在可能。不能及时送检应应用输送培养基。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第28页脓液标本要尽可能防止病灶表面细菌污染。开放性脓肿，采样前无菌盐水冲洗伤口，拭去表面污染脓液，挑取病灶深部脓液；封闭性脓液，严格病灶皮肤或黏膜表面消毒后用无菌干燥注射器穿刺抽取，置无菌试管内送检，或切开排脓时用无菌拭子采集深部脓液。三、标本采集和运输临床微生物质量控制第29页厌氧菌和伤口标本厌氧菌标本隔绝空气-氧对厌氧菌有毒性作用液状标本应用注射器抽取密封送检分泌物标本最好床边采集床边接种；另置厌氧环境送检（输送培养基）伤口标本在伤口切开排脓时留取标本不能在伤口消毒清洗后留取标本尽可能采集伤口深部脓汁送检三、标本采集和运输临床微生物质量控制第30页脑脊液标本直接观察：革兰染色、抗酸染色、印度墨汁染色无菌采集技术：防止标本污染及患者被感染病毒培养标本：置4℃保留分枝杆菌培养标本：2mL以上，置4℃保留细菌培养标本置35℃保留三、标本采集和运输临床微生物质量控制第31页微生物试验分析中质量控制种类和步骤多（细菌判定、药敏、培养基、生化管、仪器、稀释液）包括知识面广复杂性高需要强烈责任感三、标本采集和运输临床微生物质量控制第32页常规试验质量控制-天天做（质控菌株）触酶试验：3％H2O2每三天更换一次血浆凝固酶试验：人血浆或商品乳胶试剂氧化酶试验：1％盐酸四甲基对苯胺水溶液浸泡厚滤纸，室温吹干压成小纸片，置含干燥剂容器－20℃保留，或买商品制剂β－内酰胺酶：头孢硝噻吩(Nitrocefin)为底物，适于测试嗜血杆菌、淋球菌、卡他莫拉菌、肠球菌革兰染色：革兰阳性菌染成红色；革兰阴性菌染成紫色；另涂片厚度、染色和脱色时间、染料沉渣等也影响染色质量四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第33页培养基质量控制普通性状：①外观：透明、清亮、无混浊、无沉淀，颜色符合要求，表面湿润但无水汽、平整、光洁无凹坑和气泡。整块平板厚薄均匀。②厚度：普通厚度在3mm，但MH平板厚度≥4mm。斜面长度≤试管长度2/3。③pH是细菌生长主要条件之一，合格培养基pH应在要求值上下0.2范围内。无菌试验：新制备或新买培养基在使用前要随机抽取一定数量样品作无菌试验。购置培养基要有质量确保如合格证实等文件；若无质量确保需检测对应性能。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第34页培养基质量控制细菌生长试验：全部培养基在使用前还必须做细菌生长试验以测定培养基性能是否符合要求。标准菌株分2种：一个是已知可在某种培养基上生长并产生经典生物学性状，对培养基中某种物质产生阳性反应菌株；另一个是用已知不能在某种培养基上生长或对培养基中某种物质产生阴性生化反应菌株。如血琼脂平板：乙型溶血性链球菌生长，β溶血；甲型链球菌，a溶血；巧克力琼脂平板：流感嗜血杆菌生长良好；中国蓝琼脂平板和SS琼脂平板：革兰阴性菌生长，革兰阳性菌不生长。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第35页试剂质控

临床微生物试验室惯用试剂包含染色液、诊疗血清以及各种生化反应试剂等。染色液及染色方法质量控制：购置或配置染色液，每次需做好相关统计，如操作者和开瓶日期等；还要进行染色步骤质控，如革兰染色在一张玻片上同时涂有金葡菌和大肠杆菌，以确保染色性判断准确无误。惯用生化试剂质控：伴随细菌判定仪和快速微量生化判定板条普及，临床微生物检验惯用生化试剂种类日趋降低，应注意在用试剂在贮存时避光、冷藏等要求，确保试剂稳定性。不要使用过期试剂。诊疗血清质控：诊疗血清是一个主要细菌判定试剂，应从有资质生产单位购置。验收时必须看清生产批号、血清效价、透明度与色泽。试验中应注意无菌操作，防止细菌污染。要经常检验贮存在4℃冰箱中各种血清，若发觉混浊，出现絮状，应停顿使用。为确保血清凝集反应结果准确，应每3个月对血清进行一次质控。不要使用过期血清。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第36页纸片药敏试验室内质控基础质控：连续做30天，如失控超出3次还需继续，如失控低于3次可改为每七天1次纠控：每七天质控中发生失控应纠控，方法：连续5天，天天1次，每次重复5个纸片，如找到明确失控原因，可马上改为每七天1次，否者继续4℃冰箱保留一周用量药品敏感试验是临床微生物检验主要步骤之一，其结果正确是否包括治疗效果好坏。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第37页仪器质量控制按仪器说明要求用标准菌株定时对不一样批号试剂进行质控对冰箱、二氧化碳孵箱、普通孵箱、水浴箱等基本设备每日温度、气体浓度监控统计；显微镜、细菌判定仪等仪器使用、保养、维修统计。以保障试验室各种设备、仪器正常运转。对仪器进行性能验证，若有两台以上仪器则要进行仪器比对四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第38页细菌判定基本步骤标本分离培养（这关系到整个结果可靠性）培养结果观察（致病菌选择）细菌分纯、判定（天地人判定系统、ATB半自动微生物判定、VITEK系统、MicroScan自动微生物分析系统、Sensititre全自动微生物判定系统，我们肿瘤医院用是前两种判定系统）四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第39页惯用培养基种类和用途血平板—普通细菌用巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、脑膜炎球菌和淋球菌用中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用M-H平板—细菌药敏用TCBS平板—弧菌科细菌用真菌显色平板—真菌培养用罗氏培养基—分枝杆菌用四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第40页常见标本细菌培养基选择痰-血平板、巧克力平板、（中国蓝/麦康凯）放CO2环境，能分离肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌尿-血平板、（中国蓝/麦康凯）定量培养粪便-中国蓝/麦康凯平板、SS平板等能分离沙门菌、志贺菌等，汇报“未检出XXX菌”脑脊液-血平板、巧克力平板CO2环境，能分离常见苛养菌（脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、单核细胞李斯特菌等），常规进行革兰染色、墨汁染色胸腹水：血平板、巧克力、肉汤胃液、胆汁：血平板、中国兰、肉汤真菌培养：沙氏培养基厌氧培养：厌氧血平板、中国兰、肉汤、涂片阴拭子、脓、分泌物：血平板、中国兰、肉汤咽、眼、耳拭子：血平板、巧克力平板、中国兰、肉汤；TB培养：罗氏鸡蛋培养注：血平板和巧克力平板放置CO2培养箱或烛缸培养，其它放置普通培养环境四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第41页培养结果观察（致病菌选择）观察培养基上是否有细菌生长观察生长情况（是单一个细菌还是各种细菌）观察生长细菌是否含有一些经典特征排除污染细菌对于无菌部位所采集标本（CSF、胸水、腹水、关节液、血液、骨髓、各器官穿刺液等等），只要培养出细菌（排除污染）一律都视为致病菌。对于有菌部位或易被正常菌群污染标本，培养出细菌后，要依据标本不一样，排除正常菌群后，再挑选致病菌（请看下列图）。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第42页无菌部位标本四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第43页涂片染色涂片染色：应具备最基本两种染色技术，即革兰氏染色和抗酸染色。1

革兰染色：革兰染色汇报必须包含染色反应或微生物种类和类别，描述物种形态或结构。如革兰染色见到革兰阳性球菌，呈葡萄状排列；又如革兰染色见到真菌小分生孢子及菌丝。2.抗酸染色：抗酸染色汇报应显示找到或未找到或可疑抗酸杆菌三种结果，汇报中应以加号表达标本中抗酸杆菌存在量。如找到抗酸杆菌++；见到染色不经典抗酸杆菌+，提议再送标本；不能汇报找到结核杆菌但可汇报未找到结核杆菌。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第44页四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第45页细菌判定四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第46页血清学试验肠道致病菌生化特征符合前提下必须有血清学试验作最终确认，基层细菌室应具备1-3项血清试剂。1.志贺氏菌多价和单价凝集血清：2.沙门氏菌多价和单价凝集血清3.致病性大肠杆菌多价和单价凝结血清4.

耶尔森氏菌凝集血清四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第47页真菌判定1．每一基层试验室必须开展真菌涂片，汇报临床是否找到真菌；是否见到真菌菌丝；从形态区分常见丝状真菌;区分曲菌或毛霉菌。2．开展酵母样真菌分离培养，应具备最基本沙氏培养基或用显色培养基，判别白念和非白念，隐球菌等。3.有条件试验室应开展非培养判定方法，如

-D葡聚糖检测。四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第48页四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第49页四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第50页四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第51页四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第52页四、细菌判定基本步骤临床微生物质量控制第53页五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第54页抗菌药品敏感性试验-惯用方法扩散试验diffusiontest：纸片扩散法(抑菌圈直径)稀释试验dilutiontest：肉汤稀释法、琼脂稀释法、最小抑菌浓度minimuminhibitoryconcentration，MICE试验E-test自动化仪器检测五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第55页

纸片扩散法操作步骤制备接种物（0.5麦氏单位）M-H琼脂平板上（15分钟内接种，涂抹均匀）在接种好琼脂平板上贴加纸片

孵育（15分钟内反转平板，35°C空气孵育）

苛养菌5％CO2孵育判度结果和解释结果五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第56页纸片扩散法判读结果将游标卡尺置于反转平板后面，测量到最靠近整数毫米数。平板应距离一个黑色不反光背景数英寸，并用反射光照明。假如是加血琼脂培养基，则应在透射光照射下，打开培养皿盖，从上表面测量抑菌圈。假如被测菌是葡萄球菌或肠球菌，则应孵育24小时，再在透射光下分别观察苯唑西林或万古霉素透明抑菌圈内有没有耐甲氧西林或耐万古霉素菌落微弱生长，遇不敏感结果需用稀释法测定MIC法确变形杆菌(迁移生长)以及磺胺类药品纸片法药敏忽略薄纱样蔓延生长，微弱生长（20%或更少），克林霉素对葡萄球菌抑菌圈内如有薄雾状菌苔应汇报细菌对克林霉素耐药,不论其是否显示“D”抑菌圈五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第57页五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第58页药敏结果结果审核S-敏感（Susceptible）：用常规用量治疗有效，常规用药时到达平均血药浓度超出细菌MIC5倍以上。R-耐药（Resistance）：用常规用量治疗不能抑制细菌生长，MIC高于药品在血、体液中可能到达浓度。I-中介(Intermediate)：MIC靠近血、体液中药品浓度，治疗反应率低于敏感株，药品生理浓集部位有效(泌尿道)，加大用药剂量可能有效。五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第59页ESBL初步筛选试验头孢泊肟10ugor头孢他啶30ug氨曲南30ugor头孢噻肟30ug头孢曲松30ug药敏纸片头孢泊肟抑菌圈<=17mm*头孢他啶抑菌圈<=22mm氨曲南抑菌圈<=27mm头孢噻肟抑菌圈<=27mm头孢曲松抑菌圈<=25mm结果判读M-H琼脂培养基初步筛选试验方法五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第60页ESBL确认试验五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第61页ESBL质控频率筛选试验和表型确证试验均可每日进行或每七天进行，所选择菌株为肺克700603或大肠埃希菌25922。应该注意是：肺克700603ESBL基因在质粒上，应将其冻存于-60℃或以下。奇异变形杆菌ESBL监测试验不适用不适用Ceftriaxone>1

27Cefotaxime

NANAAztreonam>1

22Ceftazidime>1*

22*Cefpodoxime稀释法

(µg/ml)纸片扩散法(mm)Drug五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第62页可诱导克林霉素耐药(erm-介导)常规D－试验:阳性

15

g红霉素纸片及2

g克林霉素之间距离为15-26.“DTest”–阳性反应

五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第63页常见细菌耐药问题肺炎链球菌—PRSP肠球菌—、VRE葡萄球菌—MRSA、VRSA肠杆菌属—AmpC超级细菌—NDM-1（Ⅰ型新德里金属－β－内酰胺酶）以上耐药问题都为当前全球最关注细菌耐药问题，也是我们在工作中要尤其注意问题五、细菌药敏试验临床微生物质量控制第64页质量控制规范化为了确保微生物试验室质量，我们应做到质量控制规范化1．药品敏感试验质量控制：应包含30天初始质量稳定测试；每七天一次常规质量控制；5天纠控程序。2．判定试剂质量控制：购入新试剂；在更换批号；更换生产厂家；结果发生异常等情况时均应进行质量控制。3．染色液质量控制：天天临床标本染色前应包含染色结果阳性和阴性对照物及染色液污染质量检验。4．分离培养基：如血琼脂和巧克力，用肺炎链球菌、B-溶血和草绿色溶血链球菌、流感嗜血杆菌、等苛养细菌标准菌株或经标准化试剂已证实结果正确菌株进行测试，判断其分离能力。六、试验室质量确保和汇报规范化临床微生物质量控制第65页质量控制规范化5.培养箱温度质量控制：天天第一个开箱和最终离开试验室均应对培养箱温度作统计；CO2培养箱还应统计CO2含量。6．冰箱温度统计：按每一冰箱存放物品不一样设置不一样质控范围，尤其对低温冰箱；天天统计一次。7．自动化设备：按厂家提供SOP文件进行质控；在设备软件升级或修改版本时均应进行质量控制程序。8.每一有权向临床发汇报试验室都应参加全国或省或市级质量控制活动。六、试验室质量确保和汇报规范化临床微生物质量控制第66页

临床微生物试验室汇报制度规范临床微生物试验室应对不一样细菌检验汇报时间和内容应有对应要求，并告诉临床各科，依此可预防不明原因汇报延迟。应分两种汇报形式：危重感染汇报:常规汇报:六、试验室质量确保和汇报规范化临床微生物质量控制第67页汇报规范化1.涂片汇报革兰染色：危重汇报30－60分钟汇报。汇报内容应包含染色反应、是细菌或真菌、细菌形态。有没有细胞内吞嗜现象，有没有菌丝。抗酸染色：汇报抗酸染色阳性或阴性；菌量以加号表示。常规汇报24h,危重汇报1h－2ｈ。2.血液和无菌体液培养汇报制度实施三级汇报制度：第一级：培养液直接涂片结果；第二级：初