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文档简介

单克隆抗体的制备主讲人：****医学院医学检验系

单克隆抗体是由单一克隆杂交瘤细胞产生的只识别某一特定抗原表位的同源抗体。回顾理化性状高度均一纯度高特异性强易于实验标准化和大量制备单克隆抗体回顾杂交瘤技术的基本原理单克隆抗体制备过程单克隆抗体的制备杂交瘤获得杂交瘤细胞筛选大量制备MyelomacellsBcellsHybridoma体内培养体外培养McAb腹水提取从培养液提取杂交瘤技术的原理细胞融合单克隆抗体的制备抗原免疫脾细胞—B细胞聚集的场所BcellsAntigenMouse缺乏HGPRT稳定，易培养自身不能分泌免疫球蛋白或细胞因子融合效率高Myelomacells

分泌特异性抗体无限繁殖PEG诱导MyelomacellsBcellsHybridoma？？？杂交瘤细胞的筛选B-瘤细胞细胞多聚体形式未融合瘤细胞B-B细胞瘤-瘤细胞未融合B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞未融合瘤细胞HAT培养基杂交瘤细胞的第一次筛选

次黄嘌呤（H）氨基蝶呤（A）胸腺嘧啶核苷（T）HAT培养基

HAT的作用HAT培养基核酸生物合成的主要途径和补偿途径氨基蝶呤RNADNA主要生物合成途径次黄嘌呤TK补偿途径

HGPRT胸腺嘧啶B-瘤细胞细胞多聚体形式未融合瘤细胞B-B细胞瘤-瘤细胞未融合B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞未融合瘤细胞HAT培养基B-瘤细胞杂交瘤细胞的第二次筛选有限稀释法——多倍稀释使用商品化骨髓瘤细胞（Sp2ab）杂交瘤细胞的第二次筛选有限稀释法——多倍稀释将杂交瘤细胞进行多倍稀释接种在多孔细胞培养板上，使每孔细胞不超过一个检测各孔上清液中细胞分泌的抗体是否可与特定抗原结合商品化骨髓瘤细胞（Sp2ab）杂交瘤细胞抗体——分泌到细胞外——膜抗体流式细胞仪或磁珠分选液氮中冷冻保存，定期检查染色体数目及抗体能力。单克隆抗体的大量制备动物体内诱生法体外细胞培养法

体内培养体外培养McAb腹水提取从培养液提取杂交瘤技术的基本原理

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