多糖化学修饰方法

试剂吡啶-三氧化硫复合物吡啶

>92.0%分析纯

西陇化工股份改进型RPMI1640培育基细胞培育基 美国赛莫飞公司高糖型DMEM培育基 细胞培育基 美国MediatechInc〔中国〕公司硫酸链霉素青霉素钠胰蛋白酶三偏磷酸钠碳酸氢钠钼酸铵抗坏血酸〔VC〕浓硫酸〔H2SO4〕〔KH2PO4〕浓硝酸硫酸钾〔K2SO4〕三氯乙酸明胶

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Ruibio公司Ruibio公司瑞士阿达玛斯试剂公司上海展云化工汕头西陇化工厂上海中试化工总公司汕头西陇化工厂天津市光复精细化工争论所焦性没食子酸〔邻苯三酚〕分析纯 成都市科龙化工试剂厂丙酮水杨酸PS修饰LEP-2b衍生物的制备

上海中试化工总公司天津市博迪化工参考孙雪等的方法[103]8.57g1.43g三偏磷酸钠混合后和9.0，80°C恒温水浴，5.0h95%24h。离心，〔截留分子量为13,000Da，d、1dPLEP-2b。90mL250mL三颈瓶中，用电磁加热搅拌器搅拌，同时缓慢参加三氧化硫-吡啶7.5~9.0g。加热至90°C，再参加1.5g1h3mol·L-1NaOH溶液调整95%24h后离心，将SLEP-2b。LEP-2b衍生物中取代基的取代度的测定PLEP-2b中磷酸基含量的测定[103]磷酸基标准曲线绘制：称取3.6g三羟甲基氨基甲烷〔Tris〕和120mgMgCl2·6H2O300mL双蒸水中，1mol·L-1HClpH=7Tris1.0000gKH2PO4100.001000.1mg·mL-1的磷酸基标准液。00.501.001.502.002.503.003.504.004.50、5.00mL，分别移入比色管中，蒸馏水补充至5.00mL，参加Tris缓冲溶液处测定吸光值，以磷酸根浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。0.1g1mL浓硫酸1mL6mol·L-1的盐酸并加热使酸彻底分解，转移并定容至50mL。取5mL〔0.01g多糖〕上述溶液，依据上述标准曲线操作方法测定其吸光度，依据标准曲线回归方程计算磷酸基含量。SLEP-2b硫酸基含量的测定105°C枯燥至恒重的K2SO4108.75mg，以mg·mL-1。准确吸取硫酸根标准贮备液0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mL，均以HCl溶液补至0.20mL，同时以0.20mLHCl3%三氯乙酸3.8化钡-明胶溶液重复上述操作，测吸光度A2，以硫酸根毫克数为横坐标，吸光度差值〔A1A2〕为纵坐标，绘制标准曲线。硫酸基含量测定：准确称取SLEP-2b3mg，溶于3mL1mol·L-1HCl溶液，100°C沸水浴1h，吸取样品液0.2mL，按标准曲线的制作方法，测吸取度差值1–2取代度〔DS〕的计算：取代基〔Substituent〕含量C可表示为MSub·DS/[162 –DS+MSub]，所以DS=[162C+MSuC]/[MSub+C] (Eq.1)MSub：取代基的摩尔质量；MSub1=M(-PO3H2)=81；MSub2=M(-SO3H)81。LEP-2b衍生物的紫外与红外吸取光谱-UV-2450进展全波段紫外光谱分析，扫描波长范围为190~400nmLEP-2b、PLEP-2bSLEP-2b1.5mgKBr研磨后压4,000~400cm-1。1 硫酸化酯化修饰LEP-1硫酸酯化修饰杜湛湛参考Wang等〔2023〕方法[23]，分别量取肯定量的浓硫酸、正丁醇，置于带枯燥管和搅拌装置的三颈瓶中，搅拌，冰浴冷却至-5℃，缓慢参加LEP-1粉末1.5g。反响温度对于以浓硫酸为酯化剂的酯化反响很重要，超过0℃，则多糖的酸水解作用明显。试验中保持反响-NaO24参加95%的乙醇，静置后离心，收集沉淀物，将沉淀物溶解于水，再透析24h，透析液经冷冻枯燥后得SLEP-1。硫酸基含量的测定硫酸基含量标准曲线的绘制：承受氯化钡浊度法测定硫酸基含量[24。称取105℃枯燥108.75mg1mol/L100mL0.6mg/mL的硫酸基标准溶液；同时配制30g/L明胶溶液〔氯化钡10g/，明胶5g/。分别0.08,0.16,0.24.0.320.40mLHCl0.40mL，以0.40mLHCl溶液作为空白；向上述各管中分别参加三氯乙酸7.6mL和氯化钡-明胶溶液mL15min360nm处测定吸光度A15g/L明360nm处测定吸光值A2对硫酸基含量〔y〕做标准曲线。SLEP-1250mg，溶于250mL盐酸〔1mol/L〕中，100℃水浴3h，按上述方法，在波长360nm处测定吸光值A1和A2，然后依据硫酸基含量的线性回归方程，计算SLEP-1中硫酸基含量。取代度〔DS〕的计算公式为：式中，S为样品中硫酸基的百分含量。LEP-2a的硫酸化修饰及取代度测定王玉芬LEP-2a的硫酸化修饰硫酸盐化剂，20mLHClSO3100mL吡啶中，在冰水浴中冷却下即获得三氧化硫-吡啶络合物。LEP-2a〔200mg〕参加到84mL吡啶中，并将该混合物在60◦C30分钟使充分溶解。然后参加16mL的三氧化硫·4小时反响后，将混合物用冰水浴5MNaOH595%24h，离心，将沉淀复溶于水，分别用自来水和蒸馏水透析2d和1d，浓缩后冷冻枯燥，制得硫酸化多糖，命名SLEP-2a。SLEP-2a硫酸基取代度确实定承受Heetal.,(2023)方法，绘制硫酸根标准曲线。硫酸基含量测定〔明胶法3mgSLEP-13mL1mol·L-1HCl溶液，100◦C1h0.2mL，按标准曲线的制作方法，测定A1A2，依据标准曲线回归方程计算硫酸基含量。多糖硫酸基含量C可表示为MSub·DS/[162-DS+MSub]，所以硫酸取代度计算公式为：DS=[162·C﹢MSub·C]/[MSub﹢C]其中，162：一个单糖残基的相对分子质量；MSub：=M(-SO3H)=81。LEP-2a的羧甲基化修饰及取代度测定〔1〕LEP-2a的羧甲基化修饰王玉芬0.5gLEP-2a置于三颈瓶中，参加10mL异丙醇，搅拌30min20%NaOH溶液2mL，连续搅拌碱化50min。然后参加15mg的氯乙酸，升温至60℃，醚化3h，反响完毕5mol/LpH7.0。最终将混合液置于透析袋中透析3d，浓缩后用95%乙醇沉淀多糖，所得沉淀枯燥后得到羧甲基化多糖CMLEP-2a[28]。CMLEP-2a羧甲基取代度的测定:10mg羧甲基化多糖放入l00mL烧杯中,4mL0.2mol/L的盐酸溶液(70%的甲醇溶液配制),搅拌反响3h。用80%的甲醇溶液洗涤固体至溶液中无Cl-为止。样品用0.01mol/L的NaOH标准溶液溶解,微热条件下使溶液呈透亮后,0.01mol/L标准盐酸溶液反滴定,记录参加VHClpH[28]。取代度按下式计算:B=(C ×V

—C ×V

)/WNaOH

NaOH

HCl

HClDS=0.162B/(10.058B)w为样品质量(g)，B为每克样品消耗的NaOH的毫摩尔数(mmol/g)。LEP-2a衍生物的制备及化学分析 徐平LEP-2a的乙酰化Zhang等人的方法[9]LEP-2a进展乙酰化。将LEP-2a〔0.2g〕8mL甲酰胺F80℃下搅拌30mi5mL醋酐和1%NNB〕〔5mgNBS5mL醋酐606h10mL蒸馏水终止反响，冷却85%乙醇沉淀。滤出沉淀，并使用乙醇清洗3100mL蒸馏水。1M的氢氧化钠溶液中和该溶液，并使用截留分子量为14000Da的透析袋对自来水透析48，对蒸馏水透析24。将产物浓缩并冻干得到产品乙酰化LEP-2ALEP-2。承受改良的羟胺-三氯化铁法测定ALEP-2a中乙酰基含量。LEP-2a的苯甲酰化Zhang等人的方法[9]LEP-2a进展苯甲酰化。简洁地说，将LEP-2a〔0.2g〕和甲酰胺〔8mL〕8030min4-二甲氨基吡啶〔DMAP〕10m、对甲苯磺酰氯p-TsC0.7g〕和邻苯二甲酸酐3.6g。在60℃下反响6h85%乙醇沉淀。滤出沉淀，并使用乙醇清洗3次，然后溶于100mL蒸馏水。使用透析袋〔截留分子量为14000Da〕48h24h。将产物浓缩并冻干得到产品苯甲酰化LEP-2〔BLEP-2。承受Wang等人的方法[10]测定BLEP-2a中邻苯二甲酰基含量。取代度〔DS〕的测定承受改进的羟胺-三氯化铁法测定ALEP-2a中乙酰基含量；承受Wang等人的方法[10]测BLEP-2a中邻苯二甲酰基含量。取代度〔DS〕的计算公式如下：DS=(162+MSub)C/(MSub+C) (1)162：一个单糖残基的相对分子质量；M ：乙酰基的摩尔质量；C

：乙酰基的含量；Sub1 1M M Sub2 2荆莲艳硫酸化磷酸化多糖方法：参考He等[75]方法，并略作修改。将8.57g三聚磷酸钠与1.43g5.0g100mL1.0gLEP-2b2%NaHCO3pH9.0，80°C5.0h513,000Da，下同1dPLEP-2b。方法[116]制备硒化多糖，100mg多糖参加20mL5%HNO30.1gBaCl2。多糖NaS23〔N2Se231:1，搅拌反响，5h，60°C。pH7-8。适量的Ba2+，并最终通过离心分别除去。上清液承受14,000Da蒸36hNa2Se2O3，直至不含Na2Se2O[67]。SLEP-2b。3多糖衍生物取代度测定SeLEP-2a中硒含量[66]。-PLEP-2aSeLEP-2a中硒含量[66]。162：一个单糖残基的相代基含量。LEP-2a及其衍生物红外光谱4000-400cm-1。参考表征HLE的分子构造，分析其活性与其构造的关系HLE〔鉴定然后分析黑色素活性与构造的②利用元素检测其C、N、H、O、S等元素百分含量；③利用质谱等〕、热解-GC-MS等技术提醒黑色素的构造及相关官能团〔碎片〕构造信息；⑤分析黑色素活性与构造的关系。HLEAHLE基于上阶段对HLE氨酸等20种常见氨基酸对以上不同活性HLE进展分子修饰，观看其在蒸馏水中的溶解度；②比较氨基酸-黑色素〔AHLE〕的水溶性，确定修饰物〔氨基酸〕，每种HLE可能被一至多种氨基酸修饰；③针对每种HLE，选择2-3个不同〔高、中、低〕水溶性的AHLE进展质谱、红外光谱等分析验证，以确定AHLE的构造特征。AHLE〔如其一为精氨酸，其二为组氨酸〕，其氨基