N-芴甲氧羰基-蛋氨酸

1N-芴甲氧羰基-蛋氨酸范围本文件规定了N-芴甲氧羰基-蛋氨酸的技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存、有效期。本文件适用于多肽药物固相合成中使用的N-芴甲氧羰基-蛋氨酸。分子式：C20H21NO4S结构式：相对分子量：371.45（按2019年国际相对原子质量）2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志《药品生产质量管理规范》3术语和定义本文件无术语和定义。4技术要求应符合表1的要求。2表1技术要求要求外观白色至类白色粉末溶解性1mmol在2mlDMF中溶解后应澄清透明鉴别（IR）供试品的红外光吸收图谱应与结构式一致纯度（HPLC）≥99.0%有关物质（HPLC）Fmoc-Met（O）-OH≤0.2%Fmoc-OH≤0.2%Fmoc-β-Ala-OH≤0.2%Fmoc-β-Ala-Met-OH≤0.2%Fmoc-Met-Met-OH≤0.2%Fmoc-Osu≤0.2%未知杂质≤0.2%游离氨基酸(TLC)异构体(Fmoc-D-Met-OH)（HPLC）水分（KF)≤1.0%比旋光度[20/D]-30.0°±3.0°（c=1，DMF）含量（滴定）≥98.0%残留溶剂乙酸乙酯（HS-GC）≤5000ppm丙酮（HS-GC）≤5000ppm乙醇（HS-GC）≤5000ppm醋酸（IC）≤200ppm5试验方法本试验所用试剂和水除特殊注明外，均为分析纯试剂和纯化水。5.1外观采用目视法测定。5.2溶解性35.2.1仪器50ml具塞比色管。5.2.2试剂DMF。5.2.3操作方法称取本品约3.7g，置于一个干燥洁净的50ml具塞比色管中，加DMF20ml，超声溶解后应澄清透5.3鉴别（IR）5.3.1仪器红外光谱仪、电子天平。5.3.2测定方法取供试品适量，按照红外光谱仪操作规程进行测定，本品的红外光吸收图谱应与结构式一致。5.4纯度（HPLC）5.4.1仪器高效液相色谱仪、电子天平。5.4.2试剂乙腈（色谱级）、甲醇（色谱级）、三氟醋酸、高纯水。5.4.3色谱条件色谱条件应符合表2的要求。4表2色谱条件设定参数设定值色谱柱型号：EclipsePlusC18（或等效的色谱柱）规格：4.6mm*100mm，3.5um流动相A：0.1%三氟醋酸-水（v/v）B：0.1%三氟醋酸-乙腈（v/v）洗脱方式梯度流速1.0ml/min进样体积20μl柱温30℃检测波长220nm运行时间35min稀释剂梯度洗脱方案应符合表3要求。表3梯度洗脱方案时间（min）流动相A（%）流动相B（%）075253059530留时间应参考表4。5表4保留时间保留时间（min)相对保留备注Fmoc-Met（O）-OH7.469杂质Fmoc-OH10.448杂质Fmoc-β-Ala-OH10.628杂质Fmoc-β-Ala-Met-OH11.313杂质Fmoc-Met-OH13.872主峰Fmoc-Met-Met-OH14.450杂质Fmoc-Osu14.852杂质5.4.4试验步骤供试品溶液的配制取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀。测定分别进稀释剂空白和供试品溶液各1针，按照5.4.3的色谱条件进行测定。5.4.5定量方法以峰面积归一化法计算纯度和杂质。5.5游离氨基酸(TLC)5.5.1仪器硅胶G薄层板、层析缸。5.5.2试剂正丁醇、冰醋酸、甲醇、茚三酮、0.5%茚三酮乙醇溶液。5.5.3分析步骤对照品溶液的配制取L-甲硫氨酸约0.01g，精密称定，置于100ml容量瓶中，加适量水溶解后定容至刻度，摇匀，做为对照品溶液。浓度：0.1mg/ml。供试品溶液的配制6取本品约1.0g，精密称定，置于10ml容量瓶中，加适量甲醇溶解后定容至刻度，摇匀，做为供试品溶液。浓度：100mg/ml。点板精密吸取上述2种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用用正丁醇：冰醋酸：水(4：1：3）（v/v/v)为展开剂，展开，晾干。显色喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105℃烘烤加热至斑点出现，立即检视。结果判定对照品溶液应显一个清晰的斑点，供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。5.6异构体(HPLC)5.6.1仪器高效液相色谱仪、电子天平。5.6.2试剂乙腈、甲醇（色谱级）、醋酸、醋酸铵。5.6.3色谱条件色谱条件应符合表5的要求。7表5色谱条件设定参数设定值色谱柱型号：PhenomenexLux5umCellulose-1规格：4.6mm*25cm，5um流动相0.1%TFA-水：乙腈=40：60(v/v)洗脱方式等度流速1.0ml/min进样体积5μl柱温30℃检测波长254nm运行时间稀释剂保留时间应参考下列要求：——Fmoc-L-Met-OH：12.0min——Fmoc-D-Met-OH：10.6min5.6.4试验步骤对照品溶液的配制取消旋体约（Fmoc-DL-Met-OH）50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀。供试品溶液的配制取本品约50mg，精密称定，置于100ml的容量瓶中，用适量稀释剂溶解后定容至刻度，摇匀。测定取稀释剂溶液、供试品溶液和对照品溶液各进1针，按照5.6.3的色谱条件进行测定。5.6.5定量方法以峰面积归一化法计算异构体（Fmoc-D-Met-OH）的含量。5.7水分（KF)5.7.1仪器分析天平、自动水分测定仪。85.7.2试剂卡尔费休氏试剂、无水甲醇。5.7.3操作方法取本品约0.2~0.5g，按照水分测定仪操作规程进行测定。5.8比旋光度5.8.1仪器旋光仪、电子天平。5.8.2试剂DMF。5.8.3操作方法称取本品约1.0g，精密称定，置于100ml的容量瓶中，加适量DMF溶解后定容至刻度，摇匀。按照旋光测定仪操作规程进行测定。5.8.4计算公式比旋度[20/D]=---------------式中:α——为测得的旋光度；l——为测定管的长度，dm；c——为100ml溶液中含有被测物质的重量，g/100ml。5.9含量（滴定）5.9.1试剂和溶液应包含下列试剂和溶液：——中性甲醇：取甲醇500ml，加入2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显淡红色，保持30s不褪。——氢氧化钠标准溶液（0.1mol/L)——酚酞指示剂5.9.2操作方法取本品约0.7g，精密称定，置于一个干燥洁净的150ml锥形瓶中，加入50ml中性甲醇，振摇使供9试品溶解后加2滴酚酞指示剂，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至溶液显粉红色，并保持30秒钟不褪色；记录消耗标准溶液的体积。5.9.3计算公式c×V×0.37145含量%=-------------------------×100m式中：c——为氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；V——为供试品消耗氢氧化钠标准溶液的体积，ml；0.37145——为1.00ml氢氧化钠标准溶液（0.1000mol/L]相当于Fmoc-Cys(Trt)-OH的质量；m——为供试品的重量，g。5.9.4允许误差取两次平行实验结果的平均值为测定结果，两次平行实验结果之间的RSD不得大于0.3%。6检验规则6.1检验分类产品的检验分为出厂检验和型式检验。6.2组批以相同材料、相同生产工艺、连续生产或同一班次生产的同一规格的产品为一批，每批产品不应超过150t。6.3抽样6.3.1固体产品按《药品生产质量管理规范》执行。6.3.2将采样品置于干燥清洁，取固体样品1000g,分别装于2个洁净、干燥的容器瓶中，密封并贴上标签，注明生产厂名称、产品名称、批量、取样日期等，一份检测使用，一份用于留样。6.4出厂检验6.4.1产品应经本公司质检部门按本标准要求进行检验，检验合格后方可出厂。6.4.2出厂检验项目为感官要求、溶解性、鉴别、纯度、游离氨基酸、异构体、水分、比旋光度、含量（滴定）。6.5型式检验6.5.1每年进行一次型式检验，有下列情况之一时，亦须进行型式检验：——更换主要设备或主要工艺；——长期停产再恢复生产时；——出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时;——国家质量监督机构进行抽查时。6.5.2型式检验项目为要求中的全部项目。6.6判定规则6.6.1出厂检验时，检验结果应符合本标准规定。如有不合格项，允许加倍抽样对不合格项进行复验，若仍不合格，则判定产品为不合格，产品不得出厂。6.6.2型式检验时，若有2项不合格，判为不合格；若有1项不合格，允许加倍抽样进行复验。复验合格，判定为合格；若加倍检验中仍有一项不合格，则判定该批产品不合格。7标志、包装、运输、贮存、有效期7.1标志7.1.1销售包装上应至少标有以下内容：——产品名称；——产品批号；——商品责任单位名称及地址；——产品净重；——产品生产日期和复检期；——执行标准号；——产品合格标识。7.1.2包装箱上的包装储运图示标志按GB/T191的规定选择使用。7.1.3标志应清晰