医疗器械产品无菌检验操作规程

医疗器械产品无菌检验操作规程1

目的

通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。

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适用范围

适用于灭菌后医疗器械产品（列举）的无菌检验。

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检验依据本厂产品注册标准（编号）

EN1174-1996

医疗器械灭菌产品中微生物数量的评估

《中国药典》（2005年版）

GB14233.2-2005

医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法

GB15980-1995

一次性使用医疗用品卫生标准

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仪器、设备

百级层流超净工作台、电热干燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪（器）、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。

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无菌检验室的环境要求

5.1

无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。

5.2

缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。

5.3

无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。

5.4

无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。6

无菌检验前的准备6.1

器具灭菌、消毒

6.1.1

灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。

6.1.2

消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。

6.1.3

标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。

6.2

人员、物料进入无菌检验室6.2.1

开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min。

6.2.2

物料进入无菌检验室流程

6.2.2.1

脱包：进入无菌检验室的物品若有双重包装的，需将外包装在传递窗/缓冲间拆除后，传入试验室。

6.2.2.2

消毒：进入无菌操作室的所有培养基、供试品等的外表都应采用适用的方法进行消毒处理，以避免将外包装污染的微生物带入无菌检验室。

6.2.2.3

传递：查看所有进入无菌检验室的器具上的灭菌、消毒标识，是否在有效期内。符合要求的经传递窗传入无菌检验室。

6.2.3

人员进入无菌检验室流程

6.2.3.1

更鞋脱衣：在一更区脱去一般区工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服。

6.2.3.2

洗手：首先用肥皂或洗手液在手上揉擦出泡沫，再用流水连续冲洗20秒，洗净泡沫。

6.2.3.3

更衣：在二更区按照从上到下的顺序穿戴无菌工作服（包括衣、帽、口罩等），要求裤子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。

6.2.3.4

手消毒：用消毒液浸泡双手5秒以上或用浸过消毒液的棉球擦拭双手。消毒液可用洗必泰、新洁尔灭、碘伏、75%酒精等。

6.2.3.5

人员进入：经缓冲间进入无菌检验室。

6.2.4

人员进入无菌检验室后，进一步用消毒液擦拭工作台面，戴无菌手套。

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无菌检验操作要求

c)

实体类器具：实体类器具按表面及每10cm2加入浸提介质1ml，振摇数次。

收集上述冲洗液或浸提介质于无菌容器中。

12.2.3

接种

12.2.3.1

薄膜过滤法：优先采用封闭式薄膜过滤器（集菌器），也可使用开放式薄膜过滤器。滤膜孔经不大于0.45µｍ。滤器和滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌，或直接采用无菌集菌器。

a、如采用封闭式薄膜过滤器，取一副三联式集菌器，将供试液通过集菌仪过滤，使通过每只培养管的量基本均匀。然后通过集菌仪一只加120ml改良马丁培养基，另两只分别加入120ml硫乙醇酸盐培养基（其中一只做阳性对照，内加金黄色葡萄球菌液1ml）。另取一副二联集菌器，用同批的冲洗液或浸提介质120ml通过集菌仪过滤（每只约50ml），同法一只加硫乙醇酸盐培养基120ml，另一只加改良马丁培养基120ml分别作阴性对照。

b、如用一般薄膜过滤器，将供试液过滤后取出滤膜，将其剪成3等份，分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中两份作检验，一份作阳性对照。

12.2.3.2

直接接种法：适用于一次性使用注射针、一次性使用静脉输液针（包括输液器、输血器、注射器配套使用注射针）。

a、敷料供试品：取规定数量，每个包装以无菌操作拆开，于不同部位剪取约120mg或1cm×3cm的供试品，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。

b、无菌针头：直接投入含15ml以上硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中。

c、一次性使用的材料：拆散或切成小碎断，接种于各管足以浸没供试品的适量培养基中。

供试品按规定量分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作阳性对照。

每个容器中培养基的用量应符合：接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%，或培养基的装量足以浸没供试品。

每管培养基的最低用量——硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml，改良马丁培养基每管装量不少于10

ml.

12.2.4

培养、观察

上述含培养基的容器分别置规定温度的恒温培养箱中，除阳性对照管培养48～72小时外，其余管培养14天。培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。

如在加入供试品后、或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养14天后，不能从外观上判断有无微生物生产，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或划线接种于斜面培养基上，细菌培养2天，真菌培养3天，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。

12.2.5

结果判断

培养结束后，阳性对照管应有菌生长，阴性对管应澄清。否则，就判结果无效。

所有供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。

若供试品管中任何1管显浑浊并确证有菌生长判供试品不符合规定。

以一次检出为准，不得复试。

当符合下列至少一个条件时，可