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文档简介

农事学实践教程

〔3〕北京农学院植物科学技术系其次十三讲作物籽粒粗蛋白含量测定一、实践目的学习和把握商品粮食、油料中粗蛋白质含量的测定方法。二、实践操作1、配制试剂

(1)硼酸-指示剂混合液配制：溴甲酚绿0.5g、甲基红0.1g分别溶于95%乙醇中，混合后稀释至100ml。将混合指示剂与2%硼酸溶液按1：100比例混合，用稀酸或碱调整pH值为4.5，使呈灰紫色。(2)加速剂：分析纯五水合硫酸铜10g，分析纯硫酸钾100g，在研钵中研磨，认真混匀，过40目筛。(3)30%过氧化氢-硫酸混合液(简称混液)

配制：30%过氧化氢、硫酸、水的比例为3：2：1，即在100ml蒸馏水中渐渐参与200ml浓硫酸，待冷却后，将其参与300ml30%过氧化氢，混匀。2、试样的选取和制备选取有代表性的种子(带壳种子需脱壳)挑拣洁净，按四分法缩减取样，取样量不得少于20g。将种子放于60～65℃烘箱中枯燥8h以上，用粉碎机磨碎，95%通过40目筛，装入磨口瓶备用。称取0.1g试样2份(含氮1～7mg)，准确至0.0001g，同时测定试样的水分含量。3、消煮(1)将试样置于25ml凯氏瓶中，参与加速剂粉末。除水稻为1g外，其他均为2g。然后加3ml浓硫酸，轻轻摇动凯氏瓶，使试样被硫酸潮湿。将凯氏瓶倾斜置于电炉上加热，开头小火，待泡沫停顿后加大火力，保持凯氏瓶中的液体连续沸腾，沸酸在瓶颈中部冷凝回流。待溶液消煮到无微小的碳粒并呈透亮的蓝绿色时，谷类连续消煮30min，豆类连续消煮60min。(2)将试样置于50ml凯氏瓶中，参与0.5g加速剂和3ml混液，在凯氏瓶上放一曲颈小漏斗，倾斜置于电炉上加热。开头小火，保持凯氏瓶中液体呈微沸状态，5min后加大火力，保持凯氏瓶中的液体连续沸腾。消煮总时间，水稻、高梁为30min，其他均为45min。4、蒸馏、消煮液稍冷后加少量蒸馏水，轻振摇匀。移入半微量蒸馏装置的反映室中，用适量蒸馏水冲洗凯氏瓶4～5次。蒸馏时将冷凝管末凋端插到盛有10ml硼酸-指示剂混合液的锥形瓶中，向反响室中参与40%Na2OH溶液15ml，然后通蒸气蒸馏。当馏出液体积约达50ml时，降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，连续蒸馏1～2min。用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶中。5、滴定：谷类以0.02mol/L、豆类以0.05mol/L盐酸或硫酸标准溶液，滴定至锥形瓶内的溶液由蓝绿色变成灰紫色为终点。用0.1g蔗糖代替样品作空白测定，消耗酸标准溶液的体积不得超过0.3ml。6、测定结果的计算粗蛋白质%(干基)＝140[(V2-V1)×N×K]]/[W×(100-X)]式中：V2滴定试样时消耗酸标准溶液的体积(ml)；V1滴定空白时消耗酸标准溶液的体积(ml)；N酸标准溶液的摩尔浓度(mol/L)；K氮换算成粗蛋白质的

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