乳房炎的细菌分离鉴定及药敏试验

乳房炎的细菌分离鉴定及药敏试验

乳房炎是奶牛最常见的疾病之一，也是制约奶牛育种发展的最重要疾病之一。因其能致使奶牛减少产奶量、降低牛奶的品质,甚至导致病牛淘汰,造成严重的经济损失,所以乳房炎防治问题一直为人们所关注。微生物感染是引起奶牛乳房炎的主要原因,而目前治疗奶牛乳房炎仍主要依靠抗生素,但抗生素的长期、大量使用,会导致病原菌产生严重的耐药性,给临床治疗乳房炎带来巨大困难。本试验对新疆铁门关地区乳房炎患牛乳样进行了细菌的分离鉴定和药敏试验,筛选出有效抗菌药,提高了乳房炎的治愈率,缩短了其疗程。1材料和方法1.1材料表面1.1.1.乳房炎患牛样检测以新疆铁门关地区部分奶牛场和散养户为对象,选取未经治疗的96份临床型乳房炎患牛奶样、70份隐性乳房炎患牛(LMT检测阳性)奶样。..1.1.2.培养基和药物试剂5%绵羊鲜血琼脂、营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝(EMB).琼脂、SS琼脂、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐琼脂、却蒲曼琼脂、三糖铁斜面、沙堡琼脂、Dunham蛋白胨水、Ehrlich氏试剂、甲基红试剂和VP试剂,细菌生化微量鉴定培养基,糖发酵管,0.1%马栗苷,1%马尿酸钠,0.1%美蓝脱脂奶,pH9.6肉汤,40%牛胆汁琼脂,0.3%淀粉,水杨苷,山梨醇,3%双氧水、肉汤、MH琼脂(按常规方法配置),药敏纸片(按徐叔云的方法制备)。1.1.3.氟苯尼考的药物及药物青霉素、头孢曲松钠、氨苄西林、头孢噻呋钠、头孢哌酮、头孢唑啉钠、链霉素、庆大霉素、克林霉素、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、红霉素、磺胺嘧啶钠、氟苯尼考。1.2方法1.2.1.菌落形态检测将无菌采集的乳样以3.000r/min离心10min后取沉淀物,接种于普通琼脂培养基、鲜血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基,同时接种于肉汤培养基,37℃恒温培养箱培养24~48h,观察菌落生长情况及形态特征,挑取典型单个菌落涂片,革兰氏染色,镜检。根据菌落形态特征、溶血与否、染色特性及菌体形态初步判定细菌类属,参考各种细菌的生化特性,根据染色、镜检结果对分离的菌株有选择地进行生化试验。1.2.2.抑菌圈测定采用K-B纸片法,将主要病原菌接种于营养肉汤(链球菌接于绵羊血清肉汤),37℃培养18h,所得菌液用麦氏浊法进行比浊,用生理盐水稀释菌液使其含菌量为109个/mL。吸取菌液0.1mL均匀涂在MH平板琼脂表面,然后贴上药敏纸片,每种西药做3个重复,置于.37℃温箱中培养18~24h,游标卡尺测定抑菌圈直径,以3孔的平均值表示该种药的抑菌圈大小。按表1的判断标准判断药敏试验结果。2结果2.1细菌检出情况从166份乳样中共分离出12种267株细菌,其中主要病原菌:金黄色葡萄球菌86株,检出率32.2%;大肠杆菌68株,检出率25.5%;停乳链球菌33株,检出率12.4%;无乳链球菌25株,检出率9.4%;其余是表皮葡萄球菌、乳房链球菌、粪链球菌、化脓链球菌、真菌、绿脓杆菌、克雷伯菌、志贺杆菌(表2)。有2份隐性乳房炎乳样未检出细菌。从所采乳样分离得到的病原菌来看,临床型乳房炎主要是由2~3种病原菌混合感染,混合感染的感染率达到61.4%(43/70),隐性乳房炎多数由1种病原菌引起,单独感染的感染率达到88.5%(85/96)。2.2对药物敏感的药物试验结果显示,对金黄色葡萄球菌敏感的药物为头孢曲松钠、头孢噻呋钠、头孢哌酮、克林霉素、左氧氟沙星、环丙沙星、红霉素、氟苯尼考;对大肠杆菌敏感的药物为头孢哌酮、头孢曲松钠、头孢噻呋钠、环丙沙星、左氧氟沙星、克林霉素;对停乳链球菌敏感的药物为头孢曲松钠、头孢哌酮、克林霉素、氟苯尼考;对无乳链球菌敏感的药物是头孢曲松钠、头孢哌酮、克林霉素、左氧氟沙星、氟苯尼考。具体结果见表3。3细菌混合和药敏试验本试验从166份乳样中共分离出12种267株细菌,金黄色葡萄球菌检出率最高(32.2%),其他依次为大肠杆菌(25.5%)、停乳链球菌(12.4%)、无乳链球菌(9.4%),这4种细菌占整个检出细菌的79.5%,是导致铁门关地区奶牛乳房炎的主要病原菌。葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌占整个检出率的93.3%,这和伍义行、刘燕的结果大体一致。结果显示,61.4%的临床型乳房炎为2~3种细菌混合感染,88.5%隐性乳房炎为单独感染。临床型乳房炎混合感染的原因可能是由于牛场的消毒管理不严所致。有2份隐性乳房炎乳样未检出细菌,其原因可能为该乳房炎由病原微生物以外的原因引起或者是由未分离到的病原微生物感染引起。药敏试验中,4种主要病原菌对头孢曲松钠、头孢哌酮、克林霉素、氟苯尼考都敏感(其中大肠杆菌对氟苯尼考是中敏),对青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠和四环素已经完全耐药(和王桂琴报道大体一致),对其他药物也有不同程度的耐药。可见病原菌对常用的抗生素已产生不同程度耐药性,而对不常用的抗生素则敏感。因此,笔者建议应根据不同