丝裂霉素c对兔角膜准分子激光切削术后角膜雾状混淆的影响

丝裂霉素c对兔角膜准分子激光切削术后角膜雾状混淆的影响

对于患有畸形的患者，prk通常用于治疗后不久的副作用，但术后容易形成haze，影响术后视力的恢复。临床上常用糖皮质激素治疗,但长期应用可引起激素性青光眼等并发症。有些学者将丝裂霉素C(MMC)用于治疗Haze的研究,但是否有效尚存有争议。为此我们进行了进一步的研究。材料和方法一、实验材料和设备1.准分子激光仪器MMC,浙江海正药业股份公司生产。准分子激光治疗仪SVSApex,美国SummitTech公司产品。CMTF,日本Tomey公司产品。2.实验动物22只雄性新西兰大白兔,体重2～2.5kg,解放军总医院实验动物中心提供。3.家兔眼正常对照20只兔40眼,右眼为MMC治疗组(MMC组),左眼为平衡盐水(BSS)对照组(BSS组),另设2只兔4眼为正常对照。其中5只兔10眼用于连续进行CMTF观察,每组分别于术后0、1、2、4、8和12周取材进行常规组织病理观察,实验过程中有2眼因感染后瘢痕形成被淘汰。二、方法1.单眼bss液眼膏制备复方氯胺酮0.1mg/kg肌内注射全身麻醉,0.4%倍诺喜滴眼液表面麻醉,然后对40眼行PRK手术。矫正-9.0D,直径6.0mm,深度约为106μm,脉冲424。术后分别将直径7mm浸有MMC(0.04%)及BSS的滤纸片放置在右眼或左眼角膜中央切削区5min,然后立即用150mlBSS液冲洗,涂红霉素眼膏并遮盖双眼,待动物苏醒后去掉遮挡。术后0.5%庆大霉素眼液滴眼每日3次,红霉素眼膏涂眼每晚1次,连续4d。2.嘴唇公平检测观察上皮愈合情况,并用荧光素染色后摄片定量分析;于术后第1、2、4、8和12周采用FDA分级法进行角膜Haze的临床评级:0级:角膜完全透明;1级:可疑的角膜混浊,仅能通过裂隙灯仔细检查才能发现;2级:轻度的角膜混浊,比较容易通过裂隙灯检查发现;3级:中度的角膜混浊,影响观察前房与虹膜的结构;4级:明显的不透明。3.s-vhs实验复方氯胺酮0.1mg/kg肌内注射全身麻醉后,0.4%盐酸丁氧普鲁卡因眼膏表面麻醉,用固定托架使兔眼位正,在水浸式锥状物镜(achraplan,40/0.75)表面涂上眼用胶(vidisicGel),开启微机及录象系统后,调节镜头使其通过眼用胶与角膜接触,镜头与角膜上皮的距离为2mm,并通过镜头调节器调整其前后左右运动,角膜各层的扫描图象可以通过电脑显示器同步显示,同时也被S-VHS录象机记录,检查结束后选择有价值的较为清晰的图象存入电脑中。3组各时间点每组取5眼,每眼采集6～9个40倍镜下前后部角膜基质细胞、内皮细胞,利用微机内的分析系统对前部和后部角膜细胞数进行分析。三、统计学处理用SAS计算机软件对角膜前部、后部基质细胞数、内皮细胞数、Haze评分等数据进行统计学处理,结果用x¯±sx¯±s表示,2组资料的比较用配对t检验。结果一、晶体色散成像1.膜过渡尽管整个实验过程中2组动物均有荧光素钠染色阳性,所有的角膜均在术后4～6d上皮化,且2组角膜上皮愈合速度无差异。2.组haze程度比较MMC组在术后第3～4周为高峰期,BSS组在术后第2周为高峰期,此后2组Haze程度随时间逐渐减轻,2组具有一致性趋势。用t检验对2组进行统计学分析,结果P>0.05,说明2组Haze程度差异无显著性意义(图1)。二、一般非营利活动的显微镜观察1.质细胞数的比较前部:MMC组基质细胞数明显少于BSS组,术后第12周仍少于正常;2组基质细胞数比较差异有显著意义(P<0.05)(表1)。BSS组术后第2周基质有较多基质细胞分布,出现细胞聚集现象,术后第4周聚集现象显著,约术后第12周基质细胞逐渐恢复平静。后部:2组基质细胞数比较差异无显著意义(表2)。2.内皮细胞2组内皮细胞数比较差异无显著性意义(表3)。关于mmc的用药结果PRK术后Haze和屈光回退的发生机制目前尚无定论,可能与角膜基质成纤维细胞的激活增殖、过度合成分泌有密切关系。利用MMC可抑制成纤维细胞增生的药理特点,国内外学者进行了深入的动物实验研究。角膜上皮细胞和基质细胞对MMC的敏感度不同,当药物浓度为0.04%时并不影响上皮细胞的愈合,但对前部角膜基质细胞有较强的抑制作用。本实验结果表明,MMC组术区角膜上皮细胞愈合时间、内皮细胞密度及后部基质细胞数目均与对照组相比无明显差异,更加说明浓度为0.04%MMC在术中一次应用对角膜细胞无毒副作用。程振英等对兔眼进行-8.0D矫正,用药浓度为0.008%MMC,Xu等对兔眼进行-10.0D矫正,用药浓度为0.02%MMC,证实MMC可以减少角膜细胞数量和胶原合成及由其导致的Haze。而我们用的浓度0.04%MMC,为角膜应用的最大安全浓度,用后发现术区前基质内角膜细胞的生长明显受到抑制,细胞数目减少,角膜无毒性反应,但与对照组相比,Haze并没有减轻,说明0.04%MMC并不能通过抑制角膜细胞的生长来减轻Haze的形成,与Schipper等所报道的结果相同。治疗作用与用药浓度有密切关系,Haz