冬虫夏草抗炎作用的电镜观察

冬虫夏草抗炎作用的电镜观察

据报道，佛法对大鼠耳部炎、大鼠血清足肿胀和棉球骨肿的抗炎作用明显。在这项工作中，我们还分析了牧草抗炎作用的机制。结果如下。实验动物及方法冬虫夏草为青海省玉树州昂久县出产,用蒸馏水80℃±2℃提取2次,再煮沸提取一次,合并3次滤液,减压过滤,在80℃下浓缩至1g/ml。瑞士种小鼠体重29—30g,雄性,36只随机分成两组,虫草组按10g/kg灌胄,每天一次,连续7天,对照组给同体积蒸馏水,第8天取血,分离血浆供测定血浆皮质醇与醛固酮。HilltopSprague-Dowley大鼠(简称SD大鼠)购自上海医科大学实验动物中心,体重253—297g,雄性,14只随机分成两组,虫草组按3.0g/kg皮下注射,每天一次,连续9天,对照组给同体积生理盐水,第10天股动脉放血,处死动物,取出肾上腺称重,右侧肾上腺供作组织学检查、电镜标本制备,左侧肾上腺供肾上腺内胆固醇含量测定(改良Zak法)。血浆皮质醇与醛固酮用北京化工厂放射免疫测定药盒按放射免疫法测定,透射电镜标本按前文方法制备,在JEM—200CX透射电镜下观察摄片。为了比较激素合成运转及分泌有关的脂滴、线粒体的体积改变,本实验采用立体计量分析法,即将有规则的点、格(我们采用正方形的格子)叠加在束状带皮质细胞的电镜照片上,计数落在线粒体上的点数(Pm)和落在细胞质上的总点数(Pc),最后按下列公式计算出细胞质内线粒体的体积密度Vm,。重复适当数量的电镜照片,即可获得比较真实的体积密度.用于实验的照片,实验组20张,对照组14张,用此法分别计算出线粒体的体积密度Vm和脂滴的体积密度V1。结果一、冬季生长对肾上腺重量和肾上腺胆固醇含量的影响实验表明冬虫夏草组动物的肾上腺重量及肾上腺内胆固醇含量均较对照组明显增加(表1)。二、干预昆虫血浆皮质醇和氯仿的含量实验结果表明冬虫夏草能使小鼠血浆皮质醇、醛固酮含量明显升高(表2)。三、核型细胞的发育对照组肾上腺体积较小,外有结缔组织被膜,肾上腺由皮质和髓质两部分构成,皮质厚度约550-720um,可分为三个带:球状带、束状带和网状带。球状带较薄,细胞较小,呈球状团块排列,腺细胞核染色深,胞质略呈嗜酸性,其中含少量脂滴。束状带系由多边形细胞排列成行状,有时可见双核细胞,胞质呈泡沫样,内含较多的脂滴。网状带细胞交叉吻合成网状,可见明暗两种细胞。冬虫夏草组的肾上腺体积较大,肾上腺皮质厚度较对照组增厚,约650—820um,其中以束状带增厚较为明显,不仅细胞层增多,且细胞体积也较大,胞质内含有较多的脂滴,球状带和网状带也有轻度增厚。四、细胞吐el1.球状带:对照组球状带宽约50—70um,由不规则排列的细胞组成,细胞聚集成团,体积小呈低柱状或多角形,胞核呈圆形或卵圆形,密度深,细胞表面微绒毛稀疏短小,细胞质内充满线粒体、光面内质网、少量球形脂滴、高尔基复合体和核蛋白体。线粒体为卵园形或长杆状,嵴呈管状,系线粒体内膜向内的指状突起。与其长轴相垂直,基质致密。常见线粒体环绕大形脂滴周围,两者隔以狭缝。脂滴为卵圆形,由40埃厚的单膜所包围,大小不等,密度不一。光面内质网呈泡状或扁平短囊,分散在胞质中。冬虫夏草组球状带宽约70—90um,细胞数量和体积均较对照组增多、增大,细胞表面有较多的扁而短的微绒毛,胞质内线粒体、脂滴及光面内质网均较对照组丰富。2.束状带:对照组束状带宽约400—500um,细胞为多角形,比球状带细胞大,其微细结构与球状带细胞相似,唯线粒体数量较多,线粒体嵴呈小泡状,切面上可见圆形小泡漂浮在线粒体基质内。光面内质网较多,常在线粒体和脂滴周围排列成层,在切经细胞中部的平面上约有40—60个脂滴。冬虫夏草组束状带宽约520—640um,细胞数量和体积较对照组为多、增大,线粒体数量多且扩大,脂滴增多,光面内质网膜泡丰富,溶酶体密集,光面内质网与脂滴紧密相贴。3.网状带:对照组网状带宽约100—150um,细胞体积较束状带细胞小。外形不规则,呈多边形,核小,线粒体细长,嵴的形状多变,呈小管状或小泡状。光面内质网以网状带最丰富,分布形式与束状带相似。脂滴数目少而恒定,密度较大,溶酶体较多,有单位膜包围,形状不规则,内有异质性物质,糖原丰富。冬虫夏草组网状带宽约120—170nm,细胞体积较对照组大,线粒体、光面内质网、脂滴数量均较对照组增多。4.细胞分泌物的排出:皮质激素最终在线粒体合成而分泌,沿胞膜下排列的线粒体,可见基质内边缘小泡突出,伸入胞质,最后脱离线粒体形成密度较浅的球形分泌小泡,小泡聚集于胞膜下,逐渐向游离面移行,小泡界膜与胞膜相接、融合、破裂,分泌物排入细胞间隙,此即胞吐方式。此外,分泌小泡内容物还可以扩散方式渗透入胞质。激素合成的条件一般认为在肾上腺皮质细胞内,脂滴、线粒体、光面内质网与类固醇激素的生物合成有密切关系。脂滴内含有激素的前身物——80%胆固醇酯和20%游离胆固醇,脂滴内胆固醇酯经光面内质网酯酶水解后,输入线粒体,受分裂酶作用转化为妊烯醇酮,最终在线粒体合成皮质酮及醛固酮。从本文研究可看出:首先,冬虫夏草能明显增加肾上腺的重量和肾上腺内的胆固醇含量,这为合成皮质激素提供了充分的原料和前提物。其次,从肾上腺皮质超微结构的形态和位置观察发现,冬虫夏草组束状带明显增宽,细胞数量增多,细胞体积增大,胞浆中线粒体、光面内质网及脂滴明显增加,表明有利于皮质激素合成,同时还见到线粒体、光面内质网直接与脂滴贴近,提示它们皆参与激素合成过程,并主要以胞吐方式将激