当归散对先兆流产大鼠模型的安胎作用

当归散对先兆流产大鼠模型的安胎作用

当归散是中医治疗妊娠恐怖的传统方剂。它由五种中药组成：当归、黄药、芍药、川药和白术。用该方为基本方加减治疗先兆流产已多有临床报道,但相关实验研究很少。为阐明当归散治疗先兆流产的作用及其部分机制,我们进行了一系列研究探索。本文就当归散对先兆流产大鼠模型的治疗作用实验报告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1米索前种酯片当归、黄芩、芍药、川芎、炒白术均购于云南鸿翔中草药有限公司;米非司酮片,25mg/片,产品批号:43090801,北京紫竹药业有限公司;米索前列醇,0.2mg/片,产品批号:43091101,北京紫竹药业有限公司;黄体酮注射液,20mg/mL,产品批号:090209,浙江仙琚制药股份有限公司。1.1.2po麻黄的1.3电子分析天平,生产厂家:OhausCorporation(美国奥豪斯公司),型号:AR2140;台式高速离心机,生产厂家:长沙湘仪离心机仪器有限公司,型号:TGL-20M。1.1.3动物SD大鼠,成年未孕雌性48只,成年雄性12只,许可证号:SCXK(川)2008-24,合格证号:0013194。1.2方法1.2.1瞳石汁提取水提:取当归散复方2.25kg(当归、黄芩、白芍、炒白术、川芎按1∶1∶1∶1∶0.5比例),加8倍量水煮提0.5h,滤过,再用6倍量水煮提0.5h,合并两次提取液,沉淀取上清液浓缩得浸膏501.2g。按照给药量折算配制成合适的浓度。1.2.2大鼠分组及给药将选取的大鼠置于20℃～25℃动物房中喂养,适应性饲养1周后,雌雄按照4∶1合笼,自由摄食饮水,12h筛选1次,阴道涂片检查,以光学显微镜下发现有精子者为妊娠第一天。将受孕雌性大鼠随机分为6组,即空白对照组、模型对照组、当归散低剂量组、当归散中剂量组、当归散高剂量组、黄体酮对照组。大鼠在妊娠5～11天,当归散低剂量组按生药剂量12.15g/kg/d(相当于以人与大鼠折算剂量所得大鼠用药量的2倍)灌服;当归散中剂量组按生药剂量24.3g/kg/d灌服;当归散高剂量组按生药剂量36.45g/kg/d灌服;黄体酮对照组分别于妊娠5、7、9、11天按6mg/kg/d注射黄体酮;空白对照组和模型对照组灌服生理盐水15mL/kg/d。1.2.3大鼠阴道出血情况借鉴王晓东等灌胃米非司酮加米索前列醇的方法建立先兆流产的模型,根据预实验结果,本实验于受孕第7天,灌胃米非司酮4.2mg/kg(9:00)和米索前列醇50ug/kg(19:00),观察大鼠阴道出血情况,于受孕第17天麻醉处死,解剖观察各组大鼠的胎仔数、胎仔重量、子宫重、胎盘重量等情况,了解胚胎生长和发育情况。1.2.4动物血清绑缚血清学各组大鼠于受孕第17天,采用20%乌拉坦溶液腹腔注射5mL/kg,在大鼠解剖台上绑缚四肢后腹主动脉采血,静置30min,2500r/min,离心10min,取血清分装,-26℃保存待用。1.2.5血清中含有妊娠酮和雌性二醇的量方法:放射免疫分析法。分析药盒:深圳拉尔文生物工程技术有限公司。检测单位:昆明医学院第一附属医院核医学科。1.2.6统计方法两组间比较用组间t检验,SPSS分析软件处理。2结果2.1胎仔重量和体质量结果见表1。模型组与正常组比较,平均胎仔数无明显变化,胎仔总重和平均每胎重量明显减轻(P<0.05),子宫重量和胎盘重量明显减轻(P<0.05),差异有显著性意义;模型组胎仔总数中约计20.02%出现瘀血,约计17.62%是畸形或死胎。当归散和黄体酮对以上情况有所逆转。2.2不同黄体酮和散组的减量见表2,该造模方式有效模拟了临床先兆流产的阴道出血症状,出血时间较长,全部长达52h以上,当归散组和黄体酮组分别有一定程度的减轻。依据黄体酮组治疗效果尚不满意判断,可能造模剂量偏大,在进一步的实验中应该减轻造模强度,减少米非司酮和米索前列醇用量。2.3怀孕17天，大鼠畸形或死胎和出血见表3。当归散低、中剂量组的胎仔出现畸形和瘀血的比例比模型对照组少,当归散高剂量组与黄体酮对照组,胎仔均未出现畸形和瘀血。2.417岁。怀孕时，测定了大鼠血清酮和雌性二醇的水平结果见表4,大鼠孕第17d,各组血清孕酮、雌二醇水平差异无显著性意义。3米非司酮合米索自由基因子e对妊娠的治疗妊娠一旦开始,孕妇孕酮随之增加,孕酮可以降低子宫的兴奋性,使肌纤维松弛,可影响子宫平滑肌细胞的通透性,使细胞内钾离子浓度降低,同时降低妊娠子宫对缩宫素的敏感性,从而减少子宫收缩,有利于受精卵在子宫内生长发育。如果孕酮较低,则不能维持正常的妊娠,所以需外源给予补充黄体酮以维持早孕。在流产的病因筛查及诊断中,有报道,孕酮单一指标测定预测宫内胎儿存活的敏感性和特异性均为88%。在早孕生理情况下,孕酮(P)和雌二醇(E2)以一种适当的比例存在,它们的共同作用使妊娠得以维持。但受其他实验观察项目(观察胚胎发育状况)和取血量限制,本实验测定两种激素的时间选择在孕第17天,鉴于模型对照组的自愈倾向,该指标检测意义如果选择在造模期间则更具指导价值。在以后实验中应予注意。通过模型组与正常组比较,该造模方式有效的模拟了临床上先兆流产的阴道出血症状,造模相对接近临床先兆流产的诊断,即妊娠物尚留宫腔内,但出现流产的临床症状,阴道出血不多,呈鲜红色,腹痛可有可无,程度较轻,经安胎处理可继续妊娠。但模型组与正常组比较平均胎仔数无明显变化,说明该造模方式不影响受精、着床。模型组与正常组比较,胎仔总重、平均每胎重量、子宫重量和胎盘重量明显减轻,模型组胎仔总数中20.02%出现瘀血,17.62%是畸形或死胎,说明本实验剂量下的米非司酮合米索前列醇在造模先兆流产时,影响了胚胎的发育和子宫胎盘营养状况,当归散和黄体酮能够增加胎仔体重,子宫重,胎盘重,不同程度上改善了胚胎发育和子宫胎盘营养供应。药物米非司酮与孕酮受体竞争性结合,抑制孕酮维持蜕膜发育的作用,续用米索前列醇可诱发子宫自发收缩的频率和幅度,促使囊胚从蜕膜