半滑舌的人工催产和人工授精

半滑舌的人工催产和人工授精

半津舌是中国特有的经济海水鱼类。它属于嗜水性的底鱼类，通常分布在中国沿海地区。它主要属于开目、舌科和舌科。具有生长速度快、适应性好、营养成分低、口感清新优美、口感细腻、营养丰富、市场价值高等特点。这是理想的增加育种对象。近年来,我国科技人员对半滑舌鳎人工繁殖和生殖调控进行了大量研究,并对自然海区半滑舌鳎的生殖习性和繁殖生态进行调查,于1993年首次突破半滑舌鳎人工育苗技术,随后进行了半滑舌鳎人工养殖和生殖调控技术的研究,建立了半滑舌鳎亲鱼培育、采卵技术和半滑舌鳎苗种生产技术,同时还进行了半滑舌鳎染色体分析和温度对性别分化的影响等研究工作.另外和苗种生产相关的研究工作还有温度对胚胎发育方面的影响、早期发育、饥饿对苗种发育影响以及耗氧率和窒息点方面的研究.但目前的半滑舌鳎苗种生产,基本是以人工控温、控光等人工条件下进行自然产卵为主,附以捕捞极少部分为野生苗.这种生产模式的可操控性差,亲鱼产卵率低,不利于有计划的安排生产,也严重影响了半滑舌鳎苗种的推广及养殖产业的形成.采用激素诱导鱼类卵母细胞最终成熟和排卵是获得鱼类未受精卵的有效技术,这项技术在淡水鱼类上用得比较多,也很成功,但在海水鲆鲽鱼类上,用得比较少,特别是在半滑舌鳎上,由于半滑舌鳎鱼性格暴躁、抗应激能力差、不耐人工操作,而半滑舌鳎怀卵亲鱼更是娇嫩,只要挤压腹部几次,亲鱼就会死亡,因此,半滑舌鳎亲鱼的人工催产和人工授精操作难度很大,目前尚未见成功报道.1材料和方法1.1半滑舌亲鱼的人工催产.利用莱州市明波水产有限公司人工培育的半滑舌鳎雌性亲鱼100尾,雄性亲鱼约1000尾,经过生殖调控达到性成熟并达到可以催产程度进行人工催产.半滑舌鳎亲鱼雌性亲鱼应选择体质健壮、体表无损伤、体重在1.5㎏以上个体.雄性亲鱼要求体重在100g以上,活力较强即可.在催产前两个月进行控温控光,按每平方米一雌二雄的密度室内循环水养殖,盐度不低于30‰,并投喂优质高蛋白全价配合饵料和沙蚕等新鲜活饵料.当水温升到23℃后维持此温度,雌鱼的性腺明显发育后可准备进行人工催产.1.2两种激素组合的单因素试验结果HCG:雌鱼50-150IU/㎏,雄鱼300-500IU/㎏;LRH-A2:雌鱼0.5-2.5μg/㎏,雄鱼3-6μg/㎏;LRH-A3:雌鱼0.4-2.0μg/㎏,雄鱼2-5μg/㎏;另外,几种激素组合也有很好的效果:HCG+LRH-A3:雌鱼HCG40-60IU+LRH-A30.4-1.5μg/㎏;LRH-A3+DOM:雌鱼LRH-A30.4-2.0μg/㎏+DOM1-2mg/㎏.1.3人工生产和人工产品的培养1.3.1产亲鱼的选择1.3.2麻醉、直接注射选好亲鱼后,按以上催产剂量进行注射催产激素.催产亲鱼数量比例按雌:雄=1:4进行.注射时可以用MS-222进行麻醉或直接注射,直接注射时要在桌上铺一层厚度>4cm的海绵,在海绵上铺上一块海水浸湿的大毛巾,亲鱼从水中捞起后,迅速用大毛巾包住,以防其受伤.注射时要注意,总注射量雌鱼不要超过1ml,雄鱼不要超过0.2ml,注射部位为侧线上方头部后方的肌肉较厚部分,进针角度不要超过45°,雄鱼注射时还要注意进针深度,不要穿透鱼体.1.3.3成虫的操作和孵化到达效应时间以后,要每30min检查一次,当雌鱼性腺由硬明显变软,并感觉性腺内的卵有明显的流动感,即可进行挤卵和人工授精.挤卵时的操作和注射催产激素时一样进行.当雌鱼从水中捞起后,要注意用手按住生殖孔部位,以防卵流出或喷出并迅速用毛巾包好鱼体,生殖孔一侧露在外侧并擦去海水.用手在上下两侧从后到前轻压性腺部位,即可将卵挤出,接在烧杯中.雄鱼可以握住其头部,直接将精液挤到有卵的烧杯中即可.每雌鱼的卵用2-3条雄鱼的精液即可.将精卵混均匀,加入海水,20min后冲去过多的精液即可转入孵化系统进行孵化.1.3.4数据统计与分析同批次鱼按柳学周等的方法采取部分自然产卵进行对照.人工授精2h后在有目微尺的显微镜下测量卵径,在原肠中期计算受精率(约受精后12h),孵化前期计算出卵率(孵化前浮卵量占人工授精后浮卵的百分比,约受精后34h),孵化后计算孵化率.试验所得数据用平均值±标准误表示,用SPSSforWindows统计软件进行单因素方差分析(One-WayANOVE),S-N-K法进行多重比较,差异显著性水平设置为α=0.05,极显著水平设为α=0.01.2结果2.1不同浓度hcg的效应时间效应时间和水温之间关系极为密切,本研究是在水温23±0.5℃下进行,发现除单独使用HCG的效应时间稍长,在45-52h之间,其他激素,无论单独使用还是混合使用,效应时间均在40h左右,但各组试验的效应时间之间均差异不显著(图1).2.2人工催卵径及自然产卵卵径经对5个批次的人工催产卵的卵径进行测量,发现人工催产卵径为1.02±0.13mm,明显低于自然产卵的卵径,自然产卵卵径为1.11±0.08mm.2.3综合茧率、茧率和孵化率统计10次自然产卵和人工催产卵的受精率、出卵率和孵化率发现和对照组差异不明显.但受精率变化幅度较大.2.4多次催产效果10尾雌鱼用不同激素催产结果见表1.总浮卵率89.4%,总受精率65.3%,总孵化率为44.8%.共收孵化前卵1060ml,孵化鱼苗约83万尾.综合比较多次催产的结果,其中以LRH-A3+DOM的效果稍好,除上浮卵率稍高外,效应时间相对准确.3亲鱼和激素用量过大时导致亲鱼死亡通过人工催产可以使半滑舌鳎的苗种繁育工作有计划的进行,提高半滑舌鳎苗种产量,并可提前2-3个月进行苗种的生产.特别适合人工控温控光技术不是很成熟的情况下,也可稳定获得苗种.对这种鱼的养殖推广有重要意义和应用价值.在催产过程中,发现半滑舌鳎的人工催产的难度还是很大的,主要表现在以下的几个方面:一是操作难度,亲鱼很容易受伤并引起死亡;二是这种鱼对激素过于敏感,一定要严格按体重以适当的剂量催产,激素剂量稍大就会引起亲鱼死亡;三是雄鱼取精难度较大,由于雄鱼个体一般较小,虽然注射催产激素,但精液量仍然很少,人工授精存在一定的难度.另外在研究中还发现,半滑舌鳎尽管对催产激素十分敏感,但对激素几乎没有选择性,催产的成功取决于雌性亲鱼的成熟度上.雌鱼性腺发育的过于饱满和发育程度过低几乎可以100%的引起催产鱼的死亡,因此关于如何更准确的判断何种发育程度可以进行催产还需进一步的研究.通过反复的试验发现,半滑舌鳎对各种催产激素均十分敏感,各种激素均能用于催产生产.但是,各种激素的催产剂量范围较小,稍高的剂量即可引起亲鱼