外周血改良微核检测在白血病诊断中的应用

外周血改良微核检测在白血病诊断中的应用

随着现代药理学和分子诊断的深入，结果表明，血液疾病和肿瘤的发生和发展与人类遗传物质的变化密切相关，尤其是染色体断裂、重排、重组、基因位点突变等遗传物质结构的变化。微核是染色体畸变在细胞中的一种表现形式,染色体无着丝粒断片或者因纺锤体受损而丢失,这种染色体在细胞分裂的后期,如果仍留在子细胞质内,形成一个或几个规则的次核,就称为微核。微核在细胞中的出现率与染色体畸变有较好的相关性,它在一定程度上反映了机体染色体的损伤程度。70年代初Schmid等首先将微核试验用于药物研究,近年来微核试验在肿瘤及血液病方面的研究日益增多。本文对326例白血病患者进行了外周血淋巴细胞微核四项检测指标的测定、观察及统计分析。1材料和方法1.1材料表面1.1.1病例选择选择错误(1)白血病组:326例,急性髓系白血病(AML)252例,其中M151例、M251例、M352例、M430例、M536例、M633例;急性淋巴细胞白血病(ALL)93例,其中L137例、L2331例、L325例;男176例,女150例;年龄2~78岁,平均48岁。(2)对照组:健康献血者180例,男90例,女90例;年龄20~70岁,平均45岁。上述所有病例均为2001-01/2006-07到大连大学附属新华医院门诊就诊患者或住院病人,未经任何治疗,经临床及实验室细胞化学、免疫表型分析、穿刺细胞病理学及组织病理学等检查确诊。诊断符合FAB分类诊断分型标准及国际诊断标准。1.1.2试剂和设备(1)试剂:肝素钠;外周血促凝剂(明胶);改良瑞-姬氏染色液;(2)器材:恒温水浴箱;低速离心机;双孔显微镜(日本OLYMPUS)。1.2方法1.2.1自然沉降注射片制备与1/2量的3%明胶加入离心管中,加盖混匀,垂直置于37℃水浴中自然沉降40min左右。吸取上清液,注入离心管中,1000rpm/5min,弃上清,获得沉淀物并推片制成玻片标本。风干后,甲醇固定1分钟,瑞-姬氏染色10min。1.2.2微核检测指标每例在油镜下观察清晰完整的1000个淋巴细胞,按Countryman等的标准确定微核,即微核大小为主核的1/20~1/3,与主核核膜完全分离,形态较规正,圆形或椭圆形,染色性与主核相似或稍淡,无明显折光性。然后进行微核细胞率、微核率、微核细胞阳性检出率和微核人员出现率等四项指标的检测。微核检测各项指标检测标准如下:(1)微核细胞率:每观察1000个淋巴细胞中所含微核的淋巴细胞数;(2)微核率:每观察1000个淋巴细胞内所含的微核数;(3)微核细胞阳性检出率:超出微核正常值上限的人数占该组总检人数的百分率,正常微核细胞阳性检出率小于等于1.0%;(4)微核人员出现率:出现淋巴细胞微核的人员占该组总检人数的百分率。对以上各指标进行统计分析,计算出5种疾病中上述指标的均值及标准差,及各项指标在疾病之间的相互变化关系。1.2.3检验和方差分析q检验应用SPSS(Statisticpackageforsocialscience8.0软件,进行χ2检验和方差分析q检验,P<0.05为有显著性差别。2结果2.1如表1所示，血液疾病组的四种特定颜色的检测指标显著增加2.2各组的四个检测指标与p1、l2和l3进行了比较的各项指标均低于其他组,且三者呈递增趋势,而AML各组中无显著差异;见图1。2.3以下分析了四种类型的抗病性检验指标2.3.1微核细胞率l3与其他8组的对照组相比显著增加p.0.01。p1和其他8组的基本相同p.0.01，其他组的差异显著p2.3.2微核率p1与其他8组的比例显著增加p.0.01。p1和其他8组的比例显著降低p.0.01，其他组的比例显著低于pp2.3.3微核细胞的阳性检出率和微核人员的发病率显著降低p0.01，其他组的差异显著p-0.053外周血微核测试法本文白血病各实验组的微核细胞率、微核率、微核人员阳性检出率及微核人员出现率都显著高于健康人(P<0.01),提示白血病的外周血淋巴细胞增多,与文献报道一致,说明白血病患者存在严重的染色体断裂、丢失,是染色体极不稳定的表现,从而使断裂点的同位或邻位的癌基因激活或抗癌基因失活,最终导致白血病的发生。微核形成是在细胞分裂末期,与染色体断裂或纺锤体损伤有关,它较有规律地出现在各种良恶性肿瘤及血液病患者的外周血淋巴细胞胞浆中,因此外周血微核测试法是研究染色体畸变及细胞损伤的简便而敏感的指标之一。白血病患者外周血淋巴细胞微核的增高,提示机体处于不正常状态,在出现恶性体征之前,微核大量增多,可考虑微核是恶变的先兆之一,先于癌细胞出现,更早于临床症状或自觉症状之前。因此通过外周血淋巴细胞微核检测可预测早期白血病发生,较一般传统方法早0.5a~5a,并且此法快速、简便、经济,只需外周血1滴,受检者无痛苦,无损伤,可反复多次进行。综上所述,外周血淋巴细胞微核各项检测指标通过实验结果证明可广泛应用于各类型白血病的早期诊断及鉴别诊断,成为目前较敏感、准确可靠的白血病