微波提取槐米中芦丁的研究

微波提取槐米中芦丁的研究

中药蝗虫是指干燥的花蕾和花。夏季花开放或花蕾形成时采收,及时干燥,除去枝、梗及杂质。前者习称“槐花”,后者习称“槐米”。槐花中主要成分为芦丁(Rutin),又名芸香苷(Rutioside),是中药槐花米中止血的有效成分,临床上主要用于治疗高血压及毛细血管出血。2005版《中国药典》规定,芦丁含量在槐米中不得少于20.0%,槐花中不得少于8.0%,因此人们常以槐花米为原料提取芦丁。芦丁是由槲皮素C3位上的羟基和芸香糖结合而形成的双糖苷,在热水、热醇中均有较大的溶解度;分子中含多个酚羟基,呈弱酸性,易溶于碱。常用的提取溶剂有水、醇、冷碱、热碱;提取方式有水煮法、连续回流法、热碱提取法等。水煎煮法简单易行,造价低,但芦丁的收率低;连续回流法要大量有机溶剂,生产成本高;热碱提取法因碱提时需加热和保湿过滤,故在生产时需特殊设备。也有采用微波法和超声法提取槐花米中芦丁的报道,其微波法为辅助碱溶酸沉提取、连续回流等,需特殊装置,操作较麻烦;而超声法的提取条件文献报道不一。本实验采用家用简单微波炉装置加热法和不同时间段的超声提取槐花米中的芦丁,并与2005年版《中国药典》规定的回流法对比,研究各法的优缺点,以便合适的条件下推广应用。1实验部分1.1药物和机器1.1.1特效药槐花米(市售),芦丁对照品(100080-200306,中国药品生物制品检定所),其他试剂均为分析纯。1.1.2紫外/可见分光光度计、kq-25d型微波清洗器、kq-25d型微波清洗器、kq-25d型微波清洗器、kq-25d电子分析天平BT25S(日本岛津),HH数显恒温水浴锅(金坛市金城国胜实验仪器厂),UV-VIS8500双光束紫外/可见分光光度计(无锡科达仪器厂),GalanzWD800型微波炉(佛山市顺德区格兰仕微波炉电器有限公司),KQ-250DE型数控超声波清洗器(功率:250W,工作频率:40kHZ;昆山市超声仪器有限公司)。1.2实验方法1.2.1测定了石膏含量1.2.1.加甲醇溶液精密称取芦丁对照品200mg,置50mL量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度。精密量取5mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(每1mL中含无水芦丁0.2mg)。1.2.1.测定方法-可见分光光度法精密量取对照品溶液1、2、3、4、5、6mL,分别置25mL量瓶中,各加水至6.0mL,加5%亚硝酸钠溶液1mL,混匀,放置6min,加10%硝酸铝溶液1mL,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液10mL,再加水至刻度,摇匀,放詈15min,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(2005年版《中国药典》附录VA),在500nm的波长处测定吸光度,绘制A-C标准曲线。1.2.2提取液用量的确定精密称取本品粗粉1g(平行操作做3份),置索氏提取器中,加乙醚适量,加热回流至提取液无色,放冷,弃去乙醚液。再加甲醇90mL,加热回流至提取液无色,移置100mL量瓶中,用甲醇少量洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。精密量取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取3mL,置25mL量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6mL”起依法测定吸光度。1.2.3标准曲线测定精密称取本品粗粉3g(3份),置250mL三角烧瓶中,加30mL双蒸水浸泡10min,置微波炉低中功率(40%火力)加热1min,趁热过滤,滤渣再提取次2次(即重复加30mL水,微波加热1min,趁热过滤)合并3次滤液,移置100mL量瓶中,加甲醇10mL,加水至刻度,摇匀。精密量取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至6mL”起依法测定吸光度。同时做微波炉加热时间为2、3、4、5min提取芦丁。1.2.4滤渣的提取精密称取本品粗粉3g(3份),置150mL三角烧瓶中,加30mL70%乙醇溶液,于室温超声提取10min,滤渣再提取2次(即再重复加70%乙醇30mL,室温超声提取10min,过滤)合并3次滤液,移置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取10mL,置100mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照标准曲线法测定吸光度。同时做20、30、40、50min超声提取芦丁。1.2.5加标回收率的测定微波法回收率实验:精密称取本品粗粉0.1g(6份),置150mL三角烧瓶中,其中三份分别精密加入芦丁6mg,加10mL双蒸水浸泡10min,置微波炉低中功率(40%火力)加热4min,趁热过滤,滤渣再提取2次合并3次滤液,移置50mL量瓶中,加甲醇0.5mL,加水至刻度,摇匀。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,测定吸光度,计算回收率。超声法回收率实验:精密称取本品粗粉0.1g(6份),置150mL三角烧瓶中,其中三份分别精密加入芦丁6mg,加10mL70%乙醇溶液,于室温超声提取30min,滤渣再提取2次合并3次滤液,移置50mL量瓶中,加水至刻度,摇匀。精密量取1mL,置25mL量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,测定吸光度,计算回收率。2结果与讨论2.1干扰物质的测定芦丁为黄酮类化合物对紫外光区有两个区域的特征吸收。芦丁与Al(NO3)3显色剂反应,可引起相应吸收带红移,从而排除具有相同吸收杂质的干扰,用于含量测定。芦丁光谱扫描(200～600nm)结果表明,芦丁与Al(NO3)3生成的络合物在500nm有吸收峰,可用于定量分析。芦丁标准系列在500nm的波长处测定,以吸光度为纵坐标,浓度C(mg/25mL)为横坐标,绘制标准曲线,以浓度对吸收度的回归方程为:C=1.9540A,r=0.9997。2.2菊花米中芦丁的提取按中国药典(2005)规定的方法,以甲醇为溶剂回流法提取7～8h,提取液基本无色,测定3份槐花米中芦丁的结果见表1,供试品中芦丁的平均含量为12.77%,RSD为1.60%。2.3微波加热时间及温度微波是频率介于300MHz～300GHz之间的电磁波,微波加热升温快,植物细胞内的极性物质吸收微波能,细胞内温度迅速上升,使细胞内物质释放出来。微波加热方式为选择性加热,水对微波吸收能力大,因此实验选用水为溶剂。由于微波加热,升温太快,易出现沸腾溢出,故实验选用40%火力,且加热时间不能太长,并用较大容积的三角烧瓶。微波加热时间与收率的关系的实验结果见表2。2.4超声时间的影响超声提取药物主要源于超声波的空化作用,即一定频率的超声波作用于溶液时,液体中尺寸适宜的小气泡发生共振现象,强烈的冲击波使细胞壁破裂,有效成分溶出,但整个系统的温度并未升高许多,有效成分不会被破坏,提取可在室温下进行。超声时间长,理论上应获得更高的提取率,但长时间的超声,原料会被粉碎成较细的颗粒而透过滤纸,影响含量测定。超声时间与收率的关系的实验结果见表3。2.5返回率实验在槐花米供试品中,加入芦丁对照品,测得的结果见表4,两方法的回收率范围为95%～103%,RSD在3%以内。2.6微波法和超声法提取菊花米2005年版《中国药典》规定用索氏提取器连续热回流提取槐花米中芦丁为国家标准方法,该法测定的结果准确、稳定性好,我们在实验室里同时采用微波法和超声法提取槐花米中芦丁,实验结果如表5所示,由表可见,微波法用双蒸水作溶剂提取12min和超声法用70%乙醇作溶剂提取90min相当于连续热回流法用甲醇作溶剂提取时间为7～