藤茶中主要活性成分降血脂作用研究

藤茶中主要活性成分降血脂作用研究

随着现代生活水平的提高，人们不再吃高脂肪和蛋白质等食物，而是在中老年人中增加了高脂肪患者。而高血脂极易导致各种心脑血管疾病的发生,严重威胁着人们的身心健康。现有的降血脂药物大多有副作用,不宜长期饮用。因而,寻求从天然植物中提取具调节血脂的活性成分越来越得到人们的关注。藤茶属葡萄科蛇葡萄属显齿蛇葡萄(Ampelopsisgrossedentata),主要分布在我国湖北、湖南、广西、江西、福建等地,为民间茶用、药用植物,其茎叶常用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎等症,已有数百年的使用历史。已有研究表明,藤茶安全无毒,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗高血压、降血糖、保肝护肝及增强免疫等作用[3~7]。杨新跃研究表明,藤茶和荷叶水提物对大鼠具降脂减肥作用。陈玉琼、刘翠娥、李玉山等研究表明藤茶水提液对高血脂大鼠有预防作用。陈晓军等研究表明,显齿蛇葡萄黄酮对蛋黄型高脂血症小鼠血清TC、TG有降低作用。为进一步探讨藤茶降血脂的功能及其作用的功能成分,本文研究了藤茶中的主要活性成分黄酮及二氢杨梅素降血脂效果及机理,为藤茶的开发应用提供理论基础。1材料和方法1.1仪器和试剂盒751型紫外可见分光光度计(上海棱光技术科技有限公司);冷冻干燥仪(America,Labconco);高速冷冻离心机(EppendorfCentrifuge5810R:Germany)。TC、TG、HDL-C试剂盒(上海科欣生物技术研究所);SOD、MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)。其它试剂均为分析纯。1.2油醚的提取藤茶黄酮(HT):藤茶(来源于恩施州凤鸣藤茶有限公司)经粉碎过40目,用石油醚回流去脂后,挥干石油醚。用70%的含水乙醇80℃条件下回流提取100min,提取液45℃真空浓缩至少量,然后冷冻干燥。二氢杨梅素(DMY):上述黄酮经大孔树脂初步纯化,再用水反复重结晶即得样品,经鉴定为二氢杨梅素,含量98%以上。1.3动物测试1.3.1实验动物动物SPF级雌性KM小鼠90只,体重20±2g,由湖北预防医学科学院动物中心提供,实验动物生产许可证号为SCXK(鄂)2003-0005。实验温度22~24℃,湿度65%~80%。1.3.2血脂康剂量及黄酮高剂量dmy高脂饲料配方(%):基础饲料88.7,猪油10.0,胆固醇1.0,脱氧胆酸盐0.3。设9组:正常对照(NC);高脂模型(HFC);药物对照(XZK)(血脂康剂量10mg/kg·bw);黄酮低剂量(FL)(300mg/kg·bw);黄酮中剂量(FM)(600mg/kg·bw);黄酮高剂量(FH)(900mg/kgbw);DMY低剂量(DL)(100mg/kgbw);DMY中剂量(DM)(300mg/kgbw);DMY高剂量(DH)(500mg/kgbw)。灌胃量0.25ml/20g·bw,正常对照组、模型组以等剂量的蒸馏水灌胃。1.3.3动物的血清学分离将动物适应性喂养3d后,随机分为9组,每组10只。正常对照组喂以普通基础饲料,其余组喂高脂饲料。动物自由进食和饮水,为期42d,每周称体重一次,于实验第42d停食不停水8h,称重后眼眶采血,血浆2000r/min5℃离心10min,立即分离出血清,5℃冷藏待用。实验末处死动物,并解剖小鼠,肉眼观察小鼠体内脂肪沉着情况及脏器变化情况。1.4白hdl-c、血清sod、血清mda、mda的测定血清总胆固醇(TC)、血清甘油三脂(TG)、血清高密度脂蛋白(HDL-C)、血清SOD、血清MDA的测定:用相应的试剂盒。血清低密度脂蛋白(Friedewald公式计算):LDL=TC-HDL-TG/5动脉硬化指数:AI=(TC-HDL)/HDL1.5肝脏病理观察肝系数测定:小鼠取血处死后,及时解剖,取出肝脏称重并观察记载病变情况。肝脏系数=脏器重/体重×100肝脏病理观察:处死后的小鼠解剖后,取各组小鼠同一叶肝脏0.5g左右于10%的中性福尔马林液中固定,并不时摇动,使肝脏固定完全、充分。石蜡包埋切片,HE染色,光学显微镜下观察组织变化,用Olympus万用显微镜摄影记录实验结果。1.6处理数据用SPSS软件作Ttest显著性分析。2结果分析2.1dmy对小鼠体重的影响藤茶黄酮及二氢杨梅素对小鼠体重的影响见表1。表1表明,各组始重较模型组都无显著差异,但实验结束时,DMY高剂量组小鼠体重接近正常对照组小鼠体重,都显著低于模型对照组小鼠体重。说明,高剂量的DMY剂量有降低小鼠体重的作用。2.2对小鼠血清tc、tg、ldl-c含量的影响藤茶黄酮及二氢杨梅素对小鼠血脂的影响见表2。由表中可以看出,正常对照组小鼠血清TC值极显著低于模型组,说明模型成功。与模型组比较,DMY中剂量能显著降低小鼠血清TC值;阳性对照药,DMY中、高剂量,黄酮低、中剂量能显著降低血清TG含量;DMY、黄酮高剂量能极显著提高小鼠血清HDL-C的含量;DMY中剂量能显著降低血清LDL-C含量。动脉硬化指数AI除正常对照组极显著低于模型组外,其余各组与模型组差异不明显。2.3黄酮、二氢杨树素对小鼠血清sod活性的影响小鼠血清抗氧化指标SOD、MDA测定结果如表3所示。结果表明,与模型组比较,黄酮、二氢杨梅素各剂量能显著提高小鼠血清SOD的活性,降低小鼠血清MDA的含量;血脂康对小鼠血清SOD、MDA影响不明显。2.4各剂量对肝脏组织病理学观察小鼠肝脏系数测定结果表明(表4),各剂量组肝脏系数都极显著低于模型组。小鼠经解剖,肉眼观察发现正常组小鼠肝呈暗红色,色泽均匀,形态正常。模型组肝脏肿大较严重,肝呈褐黄色,各剂量组肝色泽较模型色泽有所改善。进一步作肝脏显微形态学观察表明(图1~图5),正常对照组肝细胞的肝小叶、中央静脉、肝细胞索、肝窦清楚,肝细胞大小较一致,细胞核、胞浆清晰。模型组肝小叶界限不清,肝细胞肿胀,胞浆呈空泡状,核淡染。肝窦变窄至消失。药物组肝细胞随剂量的增加,肝细胞水泡的细胞数量减少,肝细胞变性、肿胀的程度降低,细胞间界限较清晰。因此,藤茶黄酮及二氢杨梅素对高脂饲养的小鼠肝脏有一定的保护作用。3氧化石墨烯对血清hl-c、sod的氧化作用利用高脂饲料诱导大鼠高脂血症模型的研究表明,一定剂量的藤茶黄酮及二氢杨梅素能显著降低小鼠血清TC、TG、LDL含量,升高血清中HDL-C的含量。研究表明,胆固醇的LD是致动脉粥样硬化的重