雄黄的炮制原理及药效学研究

雄黄的炮制原理及药效学研究

雄黄是黄氏家族的一种氧化物。主要含有2-羟基二硫酸（as2s2）和少量三氧化二硫酸（as2o3）等杂质。雄黄性味为辛,温;有毒。具有解毒杀虫、燥湿祛痰、截疟的功效。临床上内服治疗惊痫肿痛,外用治疗疥癣、恶疮、毒蛇螫伤。近年来有关报道还表明,雄黄对急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性粒细胞白血病(CUL)、骨髓增生异常综合征(MDS)等恶性血液系统疾病均有显著疗效。由于雄黄有毒,《中国药典》规定雄黄中As2S2的含量不得低于90%;雄黄入丸、散用时,用量仅为0.05~0.1g。而且,雄黄入药时一般都要经加工炮制和限量使用。雄黄入药炮制始于《神农本草经》,历代沿用的制法有干研法、水飞法、煮法、熬法、油煎法、复制法、火飞法等,其中使用历史较久的当属创于汉代的干研法和始于宋代的水飞法。《中国药典》规定的炮制方法是水飞法。这些炮制方法的目的主要在于净化、制粉、减毒和改变功效。近年来,大量药学工作者以雄黄中As2S2、As2O3及微量元素的含量为化学指标,并结合毒理学实验和药效学实验,探讨了传统炮制方法的原理,并对这些方法进行了考察对比研究,结果表明:(1)雄黄有微毒,毒性成分为As2O3,雄黄使用不当易引起中毒,甚至导致死亡。雄黄入药炮制的主要目的是减毒、制粉、净制。(2)雄黄炮制降毒的原理为:(1)As2O3能溶于水、醇、酸及碱类,100g水能溶解0.1~1gAs2O3,用水或酸液处理能将其溶除;(2)As2O3具有升华性,高温加热可使其升华逸出而被除去。1雄黄传统制备毒毒法的研究1.1干研法的安全传统的干研法制粉效率较高,但不能减少雄黄中As2O3的含量,因此从降低毒性、保证用药安全方面考虑,干研法不宜作为雄黄的法定炮制方法。水飞法的用水量和水温对降低雄黄成品中As2O3的效果有直接影响。在其他条件一致的情况下,增加用水量和提高用水温度,可提高降低As2O3含量工艺的效率。水飞法可起到净制作用,使成品中As2S2的含量显著高于原药材。1.2醋煮品对雄黄as2o3含量的影响原思通等用干研法将雄黄制成极细粉后,用50%醋液加热煮沸雄黄制备醋煮品。结果表明,醋煮法能显著降低雄黄样品中As2O3含量,使As2O3含量降低约80%以上;而在总用液量相同或稍大的条件下,水飞法能使雄黄样品中As2O3含量降低约30%~50%。此外,水飞法与醋煮法均能提高雄黄样品中As2S2含量。但毒理学实验表明,醋煮品的毒性显著低于水飞品。这是因为As2O3在酸性及加热条件下,溶解度提高,易于被洗除[2~4]。1.3不同途径感染雄黄的效果文献记载的蒙药炮制方法主要有“浓盐水飞去毒用”、“研粉脱脂酸牛奶浸后清水洗即可”、“酒浸两日用”等。现代中药炮制学研究表明,蒙药炮制法不会使雄黄中As2S2含量显著损失仅酒浸晶损失率达07左右脱脂酸牛奶浸制可使雄黄中As2O3含量降低约80%左右;2%盐水水飞法也可使其降低约35%,与纯水水飞法比较无显著性差异(P>0.10);酒浸法对雄黄中As2O3含量影响甚微(P>0.10),去毒效果不可靠,表明As2O3几乎不溶于乙醇。张亚敏等进一步考察了采用酸牛奶,按水飞法操作炮制雄黄的降毒作用。实验结果表明,在相同工艺条件下,酸奶飞法的降毒作用比水飞法好,与脱脂酸牛奶浸制法相近。雄黄经酸奶炮制后对小鼠的急性毒性显著降低;对大鼠血红蛋白(Hb)、血清谷丙转氨酶(SGPT)含量、脏器(心、肝、脾、肺、肾、胸腺)指数的影响均显著低于雄黄生品,对大鼠的血象及尿液中白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、尿蛋白的含量均无影响,对心、脾、肾、胃肠均无影响。但雄黄炮制前后,对肝脏都有一定影响,表明雄黄炮制后毒性显著降低,但仍有一定的毒副作用。1.4雄黄的存在是以as2o3为原料张亚敏等考察了文火闷煅、武火闷煅、马福炉煅、香油熬化对雄黄中As2O3含量的影响。结果表明,大多数用火炮制品的含砷量都较生品高,推测可能是雄黄在高温缺氧条件下仍会与少量氧发生反应生成As2O3;但香油熬化品中As2O3的含量比生品和《中国药典》规定的水飞品都少,其原因是在与氧气隔绝的条件下,雄黄既不会反应生成As2O3,且其中所含As2O3在加热过程中升华逸出而被分离除去。另外,X射线分析报告提示雄黄与香油在加热过程中会生成一些有机化合物,从而使可溶性砷的含量降低。此外,文火闷煅的雄黄含砷量虽超过了生品,但差别很小,说明若能控制好炮制条件即缺氧的条件,是可以控制As2O3生成的。因此,笔者认为“香油熬化”、“文火闷煅”法若条件控制得好,对去毒仍是可行的,应对“雄黄忌火煅”、“雄黄见火毒如砒”之说重新审视。2雄黄新制剂防水解毒法的研究2.1黄加氢球磨和预处理王允兴等对加水球磨法的工艺进行了改进研究,提示雄黄加水球磨,水洗后在较低的温度下干燥,既可保证较细的粒度,又可保证较低的可溶性砷含量。此法与传统水飞法相近,且易于大规模生产,似可代替水飞法。2.2相同工艺条件下水飞品中as2o3含量的变化陈青莲等用稀醋酸、稀盐酸代替食用水,按水飞法操作炮制雄黄。结果表明,在相同工艺条件下,50%稀醋酸和1%稀盐酸制备的成品中的As2O3含量仅为水飞品的一半;且醋飞法能显著增高As2S2的含量。酸飞法的去毒效果与酸液浓度成正比。2.3水洗法与传统水飞法比较原思通等对雄黄用干研法制成极细粉,用水搅拌洗涤除可溶性砷的炮制新工艺进行了探索性研究。结果表明:(1)在总用水量相同的条件下,水洗法除可溶性砷效果与传统水飞法相近。二法均能提高As2S2的含量,但均不显著;(2)在总用水量不变的情况下,增加水洗涤的次数或减小雄黄粉粒度,是提高洗除As2O3效果的有效措施之一;(3)急性毒性实验表明,水洗品的毒性均低于干研品和水飞品,约为干研品的1/3左右。2.4雄黄洗涤剂的制备方法原思通等比较研究了水飞法、水洗法、酸洗法的去毒作用,并对酸洗法的工艺条件进行了摸索和探讨。结果表明:(1)降低可溶性砷效果为:稀醋酸洗法>稀盐酸洗法>水洗法>水飞法;(2)水飞法、水洗法、酸洗法均可提高雄黄成品中As2S2的含量,其中以稀盐酸洗涤法提高幅度较大;(3)水飞法、水洗法、酸洗法对雄黄样品中微量元素含量均有不同程度的影响,尤以稀盐酸洗法可使样品中多数元素大幅度下降;醋洗可使雄黄所含的铅、汞、镉等对人体危害较大的几种重金属元素含量有不同程度的下降;(4)炮制品的毒性为:稀醋酸洗品<稀盐酸洗品<水洗品<水飞品;(5)在酸液总用量不变的条件下,增加酸液浓度、洗涤次数和减小雄黄粉粒度,可提高洗除As2O3的效果。有人提出雄黄在粉碎条件下以水飞法为佳,洗涤时以酸洗法为佳,干燥时以晾干为佳。但考虑到水飞法在工业生产中难以实施,实际生产中采用了将雄黄粉碎成极细粉,加10倍量稀盐酸搅拌洗涤30min,抽滤,水洗至中性,晾干的工艺。该法可使雄黄中As2O3含量从11.6mg·g-1降至1.59mg·g-1。2.5雄黄粉添加量和碱洗次数对as2o3含量的影响铁步荣等根据As2S2不易溶于稀酸、稀碱,而As2O3为两性偏酸,更易溶于碱液的性质,考察了碱洗法对As2S2和As2O3含量的影响。结果表明,碱洗法可显著降低雄黄中As2O3含量,显著优于干研法和酸洗法,且成品中As2O3的含量低于《中国药典》规定的限量标准;碱洗和酸洗雄黄的失重一致;雄黄样品中As2O3的含量在其他条件一致的情况下,随碱液浓度的增高、碱洗次数的增加而减少,其中以3%氢氧化钠(NaOH)碱洗效果最佳;随着雄黄粉粒度减小,碱洗法洗除As2O3的效果越好,以120目最佳。但雄黄粉粒度若太小,则成品中As2O3的含量反而升高。裴月梅等综合比较了水洗法、酸洗法、碱洗法的去毒效果,结果是酸洗法较好。3雄黄的降毒方法雄黄炮制降毒的原理及方法改进研究表明:(1)高温加热炮制雄黄的方法不宜采取,雄黄加工过程中温度应控制在60℃。从历代有关雄黄炮制研究的文献资料记载中,也可看出高温加热法使用历史均不长。(2)干研法不具有降毒作用,而水飞法具有净制、去毒作用,因此干研法不可代替水飞法。在目前,宜选用水飞法,停用干研法,以保证临床用药安全。(3)《中国药典》规定的雄黄水飞法并非是减少As2O3含量的最佳炮制方法。为将雄黄中的有毒成分严格控制在安全范围内,《中国药典》应考虑选择更好的雄黄炮制方法。(4)水洗法、酸洗法和碱洗法等方法,既简化了传统水飞法、酸奶飞法的操作工艺,又遵循了水飞法的炮制原理,使其具有与传统炮制法相近的去毒、净制作用。综合比较雄黄新降毒方法的研究结果,一致认为稀盐酸洗法较佳,可考虑代替水飞法。现代药理学研究和临床用药经验证明,雄黄中的As2S2为主要有效成分,具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤等作用。现代毒理学实验显示,雄黄西黄耆胶混悬液的半数致死量(LD50)为3.207g·kg-1,灌胃后可立即死亡,使肝肺充血。按矿物药急性毒性分级,雄黄为低毒矿物药;质佳的湖南石门雄黄LD50>10g·kg-1(灌胃),较长时间内服用对体重及血清尿素氮含量均有影响,肾间质有充血及炎细胞浸润,停药后则有一定程度恢复;As2O3的LD50为12mg·g-1,为高毒矿物药,口服As2O3的中毒剂量为5~50mg,致死量为70~180mg(对70kg的人,约为0.76~1.95mg·kg-1)。由此可见,雄黄中的主要毒性成分为23符合中国药典要求的雄黄在正常用法用量下对人体无严重毒副作用,若超量使用则易引起中毒。因此,降低雄黄毒性即指采用适当的炮制方法纯化雄黄,使成品中的毒性杂质含量低于法定限量标准。人们对雄黄内服用量的具体限定要求有争议。1977年版《中国药典》规定雄黄的内服用量为0.3~1.0g;1995年版《中国药典》将其内服用量降为0.05~0.1g,但其收载的23个含雄黄中成药中,约11个制剂中雄黄用量超过法定要求,有的甚至超量达5倍以上,这表明有时为达到较好的治疗效果会超量使用雄黄。因此,有人提出现行《中国药典》中规定雄黄的内服限量太低,应考虑提高此限量要求。由于近年来有报道表明,As2O3也具有抗肿瘤活性,尤其在治疗APL等恶性血液性疾病方面有独特疗效,所以在研究雄黄的最佳炮制工艺时,不能单方面地追求降低As2O3,而应结合药效学、毒理学实验筛选确定最佳的降毒方法,将成品中As2O3的含量控制在安全而又合理的范围内,满足临床治疗需求。对As2O3的限量范围进行具体研究,为《中国药典》确定雄黄用量和规定As2O3限量提供实验依据,也是筛选雄黄最佳炮制工艺所必须做的工作。4常用制作工艺的比较,主要有以下几种综上所述,在除去雄黄中剧毒成分As2O3的方法中,水飞法不如醋煮法、酸牛奶浸制法和酸奶飞法、酸飞法、酸洗法、碱洗法好;酸飞法比酸奶飞法好;水洗法与水飞法相近,但水飞法能显著提高雄黄中As2S2的含量;酸洗法、碱洗法可大大降低As2O3含量,显著优于水洗法和水飞法,但净化作用略差于水飞法;酸飞法比酸洗法好,但差异不显著,因酸飞法还具有较强的净制作用,所以若原药材含杂质较多,酸洗法不如酸飞法好。此外,油煮和煅制法需高温加热,操作条件难控制,