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文档简介

实验十三不发酵革兰阴性杆菌的检验(二)目的要求：1.熟悉不发酵革兰阴性菌的分离鉴定程序及临床意义；2.掌握不发酵革兰阴性菌的形态、生化反应特点和数值鉴定方法；3.掌握鉴定不发酵革兰阴性菌生化反应试验的操作方法和结果分析。实验内容：0.细菌普通培养基划线接种（2天前已做）1.菌落形态观察；（每人作）2.培养物涂片革兰染色镜检观察（每人作）；3.培养物氧化酶试验、接种OF培养基、接种微量生化管（2人一组，小组作）；菌落形态观察：

细菌名称

菌落特征铜绿假单胞菌

专性需氧菌，营养要求不高，生长温度范围是20℃-42℃，最适生长温度35℃，4℃不生长而42℃生长是该菌的鉴别点之一。普通平板形成大小不一、边缘不齐、扁平、常融合菌落，蓝绿色；血平板见扁平、灰/蓝绿色菌落可见金属光泽；麦康凯平板呈微小、棕绿色菌落。嗜麦芽窄食单胞菌

专性需氧菌，营养要求不高，生长温度范围是20℃-42℃，最适生长温度35℃。普通琼脂平板上形成中等大小、圆形、黄色或棕黄色不透明的菌落，有氨气味；在血平板上菌落不溶血，淡黄色菌落；SS上不生长。细菌形态、染色观察（G’S）：

革兰阴性杆菌，长短不一，呈球杆状或长丝状，单个、呈双或短链状排列；无芽胞，有荚膜，一端有1-3根鞭毛，运动活泼，临床分离株常有菌毛。铜绿假单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌：

革兰阴性菌杆菌，菌体小，无荚膜无芽胞，一端鞭毛1-8根。氧化酶试验（滤纸法，P30）【原理】：氧化氧化氧化酶细胞色素C盐酸二甲基对苯二胺（显色）【步骤】

取白色洁净滤纸沾取菌落。加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深。如用盐酸四甲基对苯二胺为蓝色铜绿假单胞菌氧化酶试验（+）鲍曼不动杆菌氧化酶试验（-）嗜麦芽寡养单孢菌氧化酶试验（-）微量生化管（接种，2人一套）空白：蓝/绿无淡绿蓝黄蓝蓝无色绿黄方法：

1.穿刺接种细菌。

2.氨基酸及对照管滴加液体石蜡封闭。

3.35度孵育。

4.24-48h观察颜色变化判断阳性结果和数字编码鉴定。OF培养基接种（半固体）：成分：正常为草绿色细菌营养成分—蛋白胨，氯化钠，琼脂，KH2PO4

酸碱指示剂—如0.2%溴麝香酚兰(pH6.0黄～7.6蓝)

糖—葡萄糖,和/或麦芽糖,和/或木糖……接种方法：

1.细菌穿刺接种18-24h幼龄细菌。

2.接种纯种细菌开管1支、闭管1支（1:1无菌凡士林液体石蜡封闭,隔绝空气）

3.培养基35°C培养24小时。培养基变黄示分解糖。结果判断：

培养基变黄示分解糖产酸；培养基不变黄示不分解糖产酸，O/F试验结果为-

仅开管变黄为氧化性产酸，

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