气相色谱质谱联用法测定甲基苯丙胺咖啡因氯胺酮

气相色谱质谱联用法测定甲基苯丙胺咖啡因氯胺酮

近年来，从传统的石油麻醉药物转变为精神药物，如中枢神经抑制剂、致动剂、镇静剂和催眠药。你有各种各样的东西，你可以增加数量。为了提高药效、减少毒品的不良作用及降低成本,毒品制造者常将多种类别的药物掺加到一起。如有些“摇头丸”中,除了含有甲基苯丙胺、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺外,其他成分还有咖啡因、氯胺酮、非那西汀、安定等。最近出现的冰毒片剂“麻古”片中除了主要成分甲基苯丙胺外,还添加有咖啡因、氯胺酮、伪麻黄碱等。本实验考察了不同pH条件下甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮混合样品的提取回收率和经三氟乙酸酐衍生化的检测效果,建立了这三种药物混合滥用的GC/MS定性定量方法,可为甲基苯丙胺、咖啡因、氯胺酮混合滥用中毒的法医学鉴定及毒品鉴别等禁毒缉毒工作提供科学依据。1回收率试验1.1仪器与材料TRACEDSQ气相色谱/质谱联用仪(GC/MS,美国Finnigan公司);DL-5型低速大容量离心机(上海安亭科学仪器厂);华普达HY-3多功能振荡器(常州市华普达教学仪器有限公司);QL-901涡旋混合器(江苏海门市麟麒医用仪器厂)。甲基苯丙胺、咖啡因、氯胺酮标准品(购自北京公安部二所),分别配置成1mg/ml的乙醇标准溶液;乙醚,乙酸乙酯为分析纯。三氟乙酸酐(trifluoroaceticanhydrideTFA),购于Sigma公司。0.5%NaOH溶液。1.2方法1.2.1样品的制备和提取取1ml空白兔血置于10ml具塞离心试管中,加1ml蒸馏水稀释,分别添加甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮三种标准溶液各10μl,加0.5%NaOH溶液调至pH=9,pH=11及pH=13。乙醚5ml提取2次,振荡混匀,1500r/min离心15min,取有机层,合并两次乙醚萃取液,加入酸性甲醇液(MeOH∶HCl为20∶1)1滴,40℃水浴挥干。残渣加入乙酸乙酯和TFA各25μl,封口膜密封后微波60%火力衍生2min,80℃水浴挥干。残渣以20μl无水乙醇定容,取1μl进行气相色谱/质谱联用分析。以标准曲线法定量,每种条件行五样本分析,取均数比较。将测得值与实际值相比即可得绝对回收率。通过比较各种条件绝对回收率的高低,选出最合适的pH值。取1ml空白兔血置于10ml具塞离心试管中,加1ml蒸馏水稀释,分别添加不同浓度(5μg,10μg,20μg)的甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮标准溶液,加0.5%NaOH溶液调至上步选出的pH值。以标准曲线法定量,每种条件行五样本分析,取均数比较。将测得值与实际值相比即可得绝对回收率。1.2.2气相色谱/质谱条件和分析色谱柱:DB-5MS(0.25mm×30m×0.25μm)毛细管柱;载气为高纯氦气,流速1.2ml/min;进样口温度为250℃;柱温:80℃1min,以20℃/min速度升高到180℃,保持8min,以30℃/min速度升高到280℃,保持2min;传输线温度250℃;分流比为10∶1;电子轰击电离源(EI),电子能量70eV,离子源温度250℃。自动调谐方式,发射电流强度100μA。扫描起始时间4min,扫描范围50-650amu。以总离子流图中各组分保留时间初步定性,并将质谱图与谱库比较分析进行确证,选择离子扫描(SIM)和外标一点法定量分析。2结果2.1衍生化前后甲基苯丙胺和氯胺酮的色谱图和质谱图甲基苯丙胺、咖啡因、氯胺酮在选定的分析条件下分离良好。衍生化前甲基苯丙胺的保留时间为4.80min,咖啡因为13.76min,氯胺酮为14.08min;衍生化后甲基苯丙胺的保留时间为6.43min,咖啡因和氯胺酮的保留时间同衍生化前,且分别与各标准对照品的保留时间相同。甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮标准品的质谱图分别见图1-4。定量分析选择离子扫描时各组分的选择离子分别为:甲基苯丙胺(58,91);衍生化后甲基苯丙胺(118,154);咖啡因(109,194);氯胺酮(180,209)。2.2衍生化的峰面积甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮混合样品有机溶剂提取物衍生化前后峰面积值见表1。经SPSS11.5统计软件进行两独立样本均数比较的t检验,可以认为甲基苯丙胺衍生化前后峰面积有差别,衍生化后的峰面积远大于衍生化前的峰面积,还不能认为咖啡因和氯胺酮衍生化前后峰面积有差别(P<0.05)。2.3提取回收率研究血液中各组分的提取回收率见表2和表3。3讨论3.1提取回收率测定甲基苯丙胺属于弱碱性有机胺,原体易挥发,故在提取后的有机相中应滴加酸性甲醇使其成盐,以降低挥发损失。甲基苯丙胺、氯胺酮均为碱性物质,在碱性条件下提取回收率高;咖啡因为中性物质,在中性、酸性和碱性条件下均可提取出来。滥用“麻古”药片者体内可能同时存在甲基苯丙胺、氯胺酮和咖啡因这三种药物,为了在有限的检血中同时快速分析三种药物,本实验选择在碱性条件下进行提取,考察三种不同pH值条件下药物的提取回收率,选择三种药物回收率都较高的pH11为提取条件。3.2有机溶剂衍生化甲基苯丙胺分子中含有氨基,GC法测定时色谱行为不好,易脱尾,检测时通常采用衍生化的方法以改善其色谱行为,提高检测灵敏度。有机溶剂提取的混合药物残渣经三氟乙酸酐衍生化后,甲基苯丙胺的峰面积远大于衍生化以前的峰面积,而氯胺酮和咖啡因衍生化前后峰面积差别没有统计学意义。从本实验可以得出,甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮混合样品分析时,甲基苯丙胺的衍生化方法不影响氯胺酮和咖啡因的检测。3.3程序升温条件的确定甲基苯丙胺分子量小,极性较大,在弱极性的DB-5柱上保留时间短,故起始柱温不宜过高。咖啡因与氯胺酮保留时间相近,可能是由于其结构中都含有酮基,而且沸点相近也可能是其影响因素。本实验对几种程序升温条件进行了比较,建立了能达到最佳分离效果的色谱条件。由于咖啡因的沸点为178℃,在其附近180℃保留8min,直至咖啡因出峰,再快速升高温