基因工程-4-受体

第四章基因工程的受体系统

1、大肠杆菌受体系统①基因复制原核细胞2、芽孢杆菌受体系统扩增场所受体系统3、其他细菌受体系统②外源基因表达场所1、酵母菌受体系统真核细胞2、哺乳动物细胞受体系统受体系统3、植物细胞受体系统受体(宿主)Host:能支持质粒,病毒进行复制的生物体。受体系统一、E.coli受体系统大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的1、E.coli受体系统的特点

①

遗传背景清楚—利于研究

②

繁殖快—易于获得大量基因产物

③

含有质粒—利于基因转移

④

表达非E.coli基因，其潜力几乎是无限的2、E.coli受体系统的优点

①

遗传背景清楚—利于研究

②

繁殖快—易于获得大量基因产物

③

含有质粒—利于基因转移

④

表达非E.coli基因，其潜力几乎是无限的3、E.coli受体系统的缺点

①

高水平表达的基因产物易发生沉淀，凝聚，不易折叠，无生物活性②

基因产物纯化工艺复杂（大海捞针）③

基因产物受污染（内毒素）④

基因产物对受体菌有毒害作用⑤

基因产物易被水解⑥

从安全角度—并不理想⑦

缺乏基因产物表达后加工机制

基因型：endA1gyrA96(nalR)thi-1recA1relA1lacglnV44F‘[Tn10proAB+lacIqΔ(lacZ)M15]hsdR17(rK-mK+)。

特点：具有四环素抗性和萘啶酮酸抗性。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

用途：分子克隆和质粒提取。

Xl1-Blue菌株endA1=eliminationofnon-specificdigestionbyEndonucleaseIrecA1=ForreducedoccurrenceofunwantedrecombinationinclonedDNA

基因型：F–ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3[lacIlacUV5-T7gene1ind1sam7nin5])。

特点：该菌株用于以T7RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。

用途：蛋白质表达。

BL21(DE3)菌株ompT=mutationinoutermembraneproteinproteaseVII,reducingproteolysisofexpressedproteins

基因型：F-ompTgaldcmlonhsdSB(rB-mB-)λ(DE3)pLysS(cmR)。

特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基

因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。

用途：蛋白质表达

BL21(DE3)ply菌株

基因型：F-endA1glnV44thi-1recA1relA1gyrA96deoRnupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169,hsdR17(rK-,λ–特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。DH5α菌株

基因型：endA1glnV44thi-1relA1gyrA96recA1mcrB+Δ(lac-proAB)e14-[F‘traD36proAB+lacIqlacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。JM109菌株

基因型：F-，mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)，φ80，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU，galK，rps，(Strr)endA1，nupG

用途：高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。

TOP10菌株第三节基因工程的受体系统

1、大肠杆菌受体系统原核细胞2、芽孢杆菌受体系统

受体系统3、其他细菌受体系统

1、酵母菌受体系统真核细胞2、哺乳动物细胞受体系统受体系统3、植物细胞受体系统受体系统二、枯草杆菌受体系统

芽抱杆菌是一类耐高温、高压及低pH值的有益微生物1、枯草杆菌（Bacillussubtilis）受体系统特点

①

最大优点：外分泌

②

高水平表达，基因产物不发生沉淀

③