微量注射氯沙坦对慢性心衰大鼠下丘脑室旁核肾侧及心率、血压和肾

微量注射氯沙坦对慢性心衰大鼠下丘脑室旁核肾侧及心率、血压和肾？

越来越多的研究表明，交感神经系统过度激活可以导致许多心血管疾病，包括慢性心力衰竭。临床上慢性心衰的主要特征包括慢性水钠潴留和血浆血管紧张素Ⅱ(AngII)增高,同时伴有交感神经系统的过度激活。阻断血管紧张素Ⅱ的合成或阻滞血管紧张素Ⅱ的AT1受体可导致慢性心衰的交感神经兴奋性显著降低,血浆去甲肾上腺素和肾上腺素浓度下降。室旁核(paraventricularnucleus,PVN)是调节自主神经系统的重要中枢,本研究制作大鼠慢性心衰模型,利用AT1受体阻滞剂氯沙坦作用于下丘脑室旁核,记录心率、血压和肾交感神经的变化,探讨慢性心衰的中枢调控机制。1材料和方法1.1动物饲养及分组选用8～12周龄,体重(200±20)g健康雄性SD大鼠[南通大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(苏)2003-0002]。动物喂以颗粒型大鼠饲料,自由饮水,动物房温度维持在18～26℃,光暗周期12:12h(7:00-19:00),实验前在上述条件下喂养3d。SD大鼠随机分为手术组、假手术组,每组5只。8周后采用stoelting大鼠脑立体定位仪进行定位,POWERLAB/8SP(Adinstrument公司)系统采集、分析心率、血压和肾交感神经放电信号。1.2试剂氯沙坦购自Sigma公司,将用生理盐水溶解、配制为20nmol/μL溶液,-20℃冻存备用。1.3左心肌梗死前降支手术组10%水合氯醛腹腔麻醉,行开胸术,打开心包,结扎左冠状动脉前降支。假手术组同样开胸打开心包,但仅在相同部位穿线并不结扎,术后肌肉注射20万U青霉素钠预防感染,喂养8周后,射血分数(EF)<45%为造模成功。1.4动脉血压监测2%戊巴比妥钠50mg/kg腹腔麻醉后,将大鼠仰卧固定于手术台上,气管插管,分离颈外静脉并插管,用于补液及追加麻醉药;分离左侧股动脉并插管,导管接压力换能器,与桥式放大器相连,POWERLAB/8SP系统采集信号,持续监测动脉血压、平均动脉压和心率;然后动物取俯卧位,利用门齿钩、双侧耳棒将大鼠头部固定于脑立体定向仪上,接着动物取右侧卧位,经腰部纵行切口沿腹膜后路径暴露左侧肾脏、肾动脉和肾神经,分离肾交感神经,浸入温石蜡油中,安放银丝电极,接生物电放大器,POWERLAB/8SP系统采集信号,记录肾交感神经活动(RSNA)。1.5心脏超声指标手术组和假手术组8周后进行超声心动图测量,在左心长轴切面上测量并记录大鼠心脏的左室内径(LV)、室间隔厚度(IVS)、左室后壁厚度(LVPW)、EF和左室内径缩短率(FS)。1.6pvn定位及开颅体定位大鼠固定在脑立体定位仪上,沿正中矢状线切开头皮,暴露颅骨,调整前囟和后囟至同一水平。PVN定位:前囟后1.8mm,中线旁开0.4mm,深度7.9mm(Paxinos&Watson大鼠立体定位图谱);电钻钻开颅骨,微量加样器插入到PVN内。动物状态稳定30min后,双侧PVN注射50nL氯沙坦。1.7kcl大鼠srna噪声测定实验结束后,微量注射部位注入5%的膀胺天蓝50nL,10%KCl静脉注射处死大鼠,记录RSNA的噪声值。取出脑组织,4%多聚甲醛固定,24h后用振动切片机切片,厚100μm,切6片。根据图谱在显微镜下微量注射点位置,定位不准确者不列入统计。1.8统计处理spss软件进行统计分析,数据用(ˉx±s)表示,根据资料选择配对或成组t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1两组大鼠的行为指标的比较超声心动图显示手术组较假手术组LV增加(P<0.01),EF和FS降低(P<0.01,P<0.05,表1)。2.2血压和心率PVN注射氯沙坦后,手术组和假手术组的血压和RSNA有降低,手术组较假手术组降低更为明显(P<0.05),血压和心率两组无统计学差异(图1,表2)。3对慢性心力衰竭患者的情感兴震性的作用本研究已经显示在慢性心衰大鼠中,AT1受体抑制剂氯沙坦作用于PVN,导致交感神经活性降低,提示PVN调节交感神经活性的神经元在慢性心衰中起重要作用。在本实验中应用冠状动脉结扎的方法制作慢性心衰模型,此方法是一种成熟的实验方法,已被广泛应用。超声心动图显示手术组较假手术组的EF和左室缩短率降低,LV增加,提示手术组心功能降低,造模成功。交感神经系统活动过度增强是心衰的特征,在心衰的发生、发展中起重要作用。交感神经系统的激活,在心力衰竭早期时有一定程度的代偿作用,但长期持续激活则加重心脏的负担,使病情进一步恶化,形成恶性循环,心衰时交感神经系统活动过度增强是加速病情恶化并使存活期缩短的关键因素。已有证据表明慢性心衰发展过程中交感神经兴奋性的增高与血管紧张素Ⅱ作用于交感神经系统相关。氯沙坦是血管紧张素II受体(AT1型)拮抗剂,可以阻断内源性及外源性的血管紧张素II所产生的各种药理作用。本研究应用氯沙坦,降低了交感神经活性,对慢性心衰的治疗有重要意义。PVN是调节交感神经活动和动脉血压的一个重要中枢,PVN神经元细胞与头端延髓腹外侧区、孤束核和脊髓交感神经节前神经元直接联系,一些脊髓神经元可以接受血压和化学物质的刺激而将信息传递到PVN。PVN核团接受很多神经递质的调节,包括肾上腺素能、乙酰胆碱能、谷氨酸、血管紧张素能递质。在离体实验中已经证明一些神经递质,如γ-氨基丁酸、谷氨酸、一氧化氮和血管紧张素Ⅱ可以影响PVN神经元的兴奋性。在冠状动脉结扎所导致的大鼠心衰模型中,PVN神经元对交感神经活性的增高有重要作用。研究证明大鼠心衰状态下血管紧张素受体在PVN中有增加,因此推测PVN中血管紧张素受体介导的血管紧张素反应在交感神经活性的调节