健脾为主中药胃肠安对人胃癌裸小鼠肿瘤生长、转移和红细胞免疫功能的影响

健脾为主中药胃肠安对人胃癌裸小鼠肿瘤生长、转移和红细胞免疫功能的影响

中国是肠球菌病最发病率和死亡率最高的国家之一。其中，癌症最常见，五年生存率不到30%。邱佳信等依据中医学理论及多年的临床实践,提出消化道恶性肿瘤“脾虚贯穿疾病的始终,治瘤应从健脾着手”的观点,创制了健脾为主方剂“胃肠安”。我们通过人胃癌SGC-7901裸小鼠移植瘤模型,观察胃肠安对胃癌移植瘤生长转移的抑制作用和红细胞免疫功能的影响,探讨胃肠安方剂治疗胃癌的可能机制。1材料和方法1.1单位小体质,红气质,红气质6～8周龄裸小鼠(BALB/C)32只,雌雄兼用,体质量18～20g,SPF级,由上海市肿瘤研究所提供。人胃癌SGC-7901细胞株裸小鼠移植瘤第34代,由上海市肿瘤研究所提供。1.2脾包膜下穿刺组采用脾包膜下移植瘤模型,每只裸小鼠用氯胺酮腹腔内注射麻醉,仰卧固定,常规消毒左中腹部皮肤,打开腹腔,暴露脾脏,用套管针将0.3cm左右的瘤种于脾包膜下穿刺接种,然后用无损伤缝线全层缝合。1.3藤本粉用量太子参30g,炒白术12g,茯苓12g,陈皮6g,青皮6g,白扁豆30g,半夏6g,红藤30g,藤梨根3g,生牡蛎30g等。1.4实验分组与管理将32只造模后的裸小鼠随机分为3组,中药组与西药组每组10只,对照组12只,分笼按SPF级动物实验要求饲养与管理。接种后第2天,中药组每只裸小鼠每天予中药胃肠安灌胃,0.5mL/d,含生药3g/mL;西药组每只裸小鼠每周予5-FU1mg腹腔注射;对照组每只裸小鼠予生理盐水0.5mL/d灌胃,共治疗12周。3组动物均给予饲料饼,自由饮用消毒水。1.5肿瘤组织的测定濒死小鼠及时处死解剖,其他小鼠均于接种后12周眼球采血后处死。处死后打开腹腔,立即取出脾脏肿瘤,置于天平上称质量,并用游标卡尺测量瘤块的长径(a)与短径(b),然后取小块组织立刻-80℃保存,余肿瘤组织经4%甲醛溶液固定,常规病理切片证实为肿瘤组织。1.6计算方法红细胞C3b受体花环率(RCR)和免疫复合物花环率(RICR)的检测和计算方法采用文献方法。1.7统计学方法使用PHStat2.2进行统计。计量资料采用非参数统计,其中两组比较采用Wilcoxon检验,3组比较采用Kruskal-Wallis检验,计数资料采用χ2检验。2结果2.1平均瘤质量中药组共9例,总瘤质量9.18g,平均瘤质量(x¯±s(x¯±s为1.02±0.47)g;西药组共9例总瘤质量7.23g,平均瘤质量(0.80±0.44)g;对照组共11例,总瘤质量16.84g,平均瘤质量(1.54±0.49)g。经Kruskal-Wallis检验,3组瘤质量差异有统计学意义,P=0.0097,经Wilcoxon两两检验,中药组、西药组的瘤质量与对照组差异有统计学意义(P=0.0367,0.0056),中药组与西药组间差异无统计学意义,P=0.2332。2.2cm3中药组共9例,瘤块体积(x¯±s)(x¯±s)为(1.22±0.49)cm3;西药组共9例,瘤块体积为(1.01±0.57)cm3;对照组11例,瘤块体积为(2.10±0.78)cm3。经Kruskal-Wallis检验,3组瘤块体积差异有统计学意义,P=0.0040,经Wilcoxon两两检验,中药组、西药组的瘤块体积与对照组差异有统计学意义(P=0.0070,0.0056),中药组与西药组间差异无统计学意义,P=0.2510。2.3对照组转移的情况中药组共9例,转移4例,其中3例见腹腔转移,1例见腹腔淋巴结转移,1例见横膈转移,2例见肝门淋巴结转移;西药组共9例,转移1例,为腹腔转移;对照组共11例,转移10例,其中9例见腹腔转移,1例见腹腔淋巴结转移,4例见横膈转移,4例见肝转移;1例见肝门淋巴结转移。经χ2检验,3组转移率差异有统计学意义(χ2=12.9,P=0.0016),经两两比较,中药组与西药组差异无统计学意义(χ2=2.4923,P=0.1144),中药组、西药组与对照组差异均有统计学意义(P=0.0241,0.0004)。2.4裸鼠rr和ric值的变化2.4.1两组rcr、ricr的比较采用Wilcoxon检验对3组裸小鼠治疗前后红细胞免疫功能进行比较,中药组RCR、RICR未发生显著变化(P=0.2510,0.6588),而西药组(P=0.0006,0.0118)和对照组(P=0.0001,0.0002)差异有统计学意义。2.4.2山工市,3.33.3经Kruskal-Wallis检验,3组裸小鼠RCR和RICR治疗前差异均无统计学意义(P=0.6324,0.5333)。处死前3组裸小鼠RCR和RICR差异有统计学意义(P=0.0247,0.0361),经Wilcoxon检验两两比较,中药组RCR和RICR均高于西药组(P=0.0152,0.0217)和对照组(P=0.0276,0.0334),而西药组和对照组差异无统计学意义(P=0.5184,0.6485),见表1。2.5两组患者治疗前后rcr比较临床疗效比较,见表1不同的治疗方法对于减低裸小鼠的瘤质量、瘤块体积和减少肿瘤转移的数量差异有统计学意义,治疗前后RCR的下降有利于瘤质量和瘤块体积的减低,低水平的RICR也可减少肿瘤转移的数量,见表2。3不同药物治疗对移植瘤裸小鼠红细胞免疫功能的影响成熟红细胞是人体血液循环-免疫系统中数量最多而又惟一不具备细胞核的细胞,在肿瘤的发生发展过程中机体的红细胞免疫功能起着非常重要的作用,过去的研究多只涉及白细胞免疫系统,而红细胞在其中所起的作用一直受到忽视,Siegel等于1981年提出了红细胞免疫系统的概念,认为红细胞通过其表面的Ⅰ型补体受体(CR1)与补体分子C3b发生免疫粘附作用,粘附于癌细胞,形成红细胞与癌细胞的聚合体,使其易被吞噬细胞捕获、吞噬。郭峰等也证明新鲜血细胞天然免疫反应中红细胞对癌细胞的快速天然免疫粘附反应占绝大多数。近20年来的研究显示,红细胞具有多种免疫物质如CR1、Ⅴ型补体受体(CR5)、CD8、CD59,促衰变因子(DAF)、过氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶等,还可释放NK细胞增强因子(NKEF)和特异性肿瘤坏死因子诱导因子(TNFIF)。肿瘤免疫中红细胞的作用包括促吞噬作用、清除循环免疫复合物、效应细胞样作用、以及红细胞对淋巴细胞和细胞因子的调控作用,红细胞的免疫功能在肿瘤的转移、患者的预后等方面起了重要的作用。我们以红细胞C3b受体花环率(RCR)和免疫复合物花环率(RICR)为观察指标,进行了胃肠安对移植瘤裸小鼠红细胞免疫影响的实验研究,并综合观察了裸小鼠肿瘤生长、转移的情况。结果表明:中药组不仅能够抑制肿瘤的生长和转移,同时能够改善红细胞免疫功能,使接种瘤种的裸小鼠的RCR和RICR的水平维持在接种前的水平,而且还具有改变肿瘤浸润生长特性的作用。而西药组的裸小鼠虽然有抑制肿瘤生长转移的表现,但接种瘤种后的红细胞免疫水平明显下降,在多元回归分析也表明瘤质量、瘤块体积和转移瘤数量与组别、RCR、RICR等有密切的相关性,经过药物治疗可以调整RCR与RICR的水平,从而减少瘤质量、瘤块体积和转移瘤数量。移植肿瘤细胞后,裸小鼠体内的免疫复合物(IC)增多,红细胞表面受体的免疫吸附能力下降,即C3b受体活性下降。而中药组RCR高于