规模化蛋鸡场产蛋期鸡新城疫、禽流感免疫程序及效果评价

规模化蛋鸡场产蛋期鸡新城疫、禽流感免疫程序及效果评价

新城病（nd）是由新城病病毒引起的鸡和各种鸟类的急性、高度接触性感染的。强毒感染易感家禽常呈败血症经过,以呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、黏膜和浆膜出血等为特征。目前出现的鸡新城疫发病率一般在10%~25%,死亡率在15%~35%,产蛋率下降30%左右,是危害养禽业的一种主要传染病。禽流感(AI)则是由A型流感病毒引起的一种禽类急性、热性、败血性、高度接触性传染病,不仅给畜牧业造成了巨大的损失,而且给人民的身体健康带来严重威胁。我国政府将其列为一类动物疫病,家禽一旦感染高致病性禽流感病毒,死亡率为100%。2010年以来我国禽流感防控形势平稳,但局部地区仍有疑似低致病性禽流感(主要是H9亚型)和非典型禽流感出现。目前,疫苗免疫接种和严格的生物安全措施相结合是预防和控制新城疫、禽流感发病的主要措施。笔者通过对洛阳某规模化蛋鸡场产蛋期鸡群进行跟踪调查,定期进行新城疫、禽流感(H5、H9亚型)抗体水平检测,对免疫程序及效果进行分析评价,为新城疫、禽流感的防控提供参考。1材料表面1.1试验设备电子天平、注射器、离心机、高压锅蒸气灭菌锅、pH计、冰箱、各种量程的移液器、恒温箱、96孔V型反应板等。1.2测试鸡组挑选饲养管理规范、卫生条件良好的洛阳某规模化产蛋期鸡场饲养规模1万羽、品种为罗斯褐的健康鸡群。1.3lpbs液的配制3.8%柠檬酸钠,阿氏液及pH值为7.2的0.01mol/LPBS液均按说明书配制;禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原、阳性血清,禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原、阳性血清,新城疫血凝抑制试验抗原、阳性血清,均购自哈尔滨维科生物技术开发公司。1.4上清液及底层白砂糖的制备采集未免疫禽流感、新城疫等疫苗的3只健康公鸡血液,加到含有抗凝剂的灭菌试管内(按每毫升血液加入3.8%灭菌柠檬酸钠0.2mL做抗凝剂),迅速混匀。如果当时不用,可采血放入阿氏液内(阿氏液2份,血液1份)于4℃冰箱可保存2周。再用pH值7.2的0.01mol/LPBS液2000r/min离心10min,反复离心洗涤3次,每次去掉上清液及上层白细胞;最后用该PBS液配成浓度为1%的红细胞悬液,4℃保存备用。2方法2.1新城疫系和pcr的肌肉注射110~120日龄:新-支-减-流(新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感H9亚型)四联灭活疫苗肌肉注射,0.5mL/只;2倍量肌肉注射新城疫Ⅰ系;禽流感H5亚型肌肉注射,0.5mL/只。160日龄:新城疫Ⅳ系5倍量饮水;新-支-流(H9亚型)油苗肌肉注射,0.5mL/只;禽流感H5亚型肌肉注射,0.5mL/只。以后每隔40~50d用新城疫Ⅳ系5倍量饮水免疫1次;每隔2.5~3.0个月用新-支-流(H9亚型)油苗肌肉注射,0.5mL/只;禽流感H5亚型肌肉注射,0.5mL/只,加强免疫1次。2.2血清离心质的测定从2012年9月份鸡群20周龄开始,每周进行翅静脉采血,每次随机采集30份,将其编号,待样品凝固后自然析出血清或将血液样品2000~3000r/min离心10min,用移液器吸取血清加入灭菌的0.5mL离心管中。若需较长时间保存血清,可置于-20℃冰箱。2.3pbs液制备用pH值7.2的0.01mol/LPBS液2mL溶解抗原,溶解后用0.5mL离心管分装,-20℃冻存,随用随取,切勿反复冻融。2.4血清抗体水平禽流感病毒H5亚型和H9亚型HI抗体检测,按GB/T18936—2003高致病性禽流感诊断技术标准规定的方法进行血清抗体水平的测定;新城疫HI抗体检测按照GB/T16550—2008新城疫诊断技术标准规定的方法进行测定。2.5阳性对照孔效价以完全抑制4个血凝单位抗原的血清最高稀释倍数作为HI效价,只有阴性对照孔效价不大于2lb,阳性对照孔效价误差不超过1lb时,并且所有阴、阳血清都不发生自凝的情况下,HI试验结果才有效。按照农业部相关标准,禽流感HI效价≥4lb、新城疫HI效价≥5lb判为免疫合格。3结果与分析3.1抗体检测时间每次随机采集30份样品,每周定期进行新城疫、禽流感HI抗体检测,连续检测40多周。在抗体检测期间,抗体效价都能达到6lb以上,其HI抗体平均效价及抗体消长规律见图1。3.2抗体效价变化由图1可知,蛋鸡20~65周龄期间新城疫和禽流感的抗体效价一直保持比较平稳的消长曲线,由于经过多次免疫接种,抗体均维持在较高水平;新城疫和H9亚型禽流感抗体效价一直维持在8~11lb之间,而H5亚型禽流感抗体效价相对偏低,但抗体效价都维持在6~9lb之间,抗体效价在免疫保护临界值(4lb)以上。针对H5亚型禽流感使用重组禽流感H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-4株+Re-6株)进行免疫,H5亚型禽流感Re-4和Re-6效价消长规律基本相同。H5亚型禽流感和H9亚型禽流感免疫次数相同,但是35周之后禽流感H5亚型抗体效价比H9亚型低2lb左右。4新城疫和致病性抗体效价HA、HI试验是目前我国各地对新城疫、禽流感等疾病进行流行病学调查、疫病诊断、防疫监测、免疫程序制定等工作的主要依据,该方法具有经济、快速、操作简便等优点。但是抗原配制、操作不规范等因素也会影响到试验结果的准确性。鸡群健康状况是影响疫苗免疫效果的重要因素,当鸡群感染某些疾病,尤其是一些免疫抑制性疾病如鸡传染性法氏囊和鸡传染性贫血等疫病时,会严重干扰疫苗的免疫效果。抗体检测结果显示,鸡群从20周龄一直到65周龄(淘汰),新城疫和禽流感抗体效价均维持在抗体保护临界值以上,且抗体消长规律平稳;该鸡场未见新城疫和禽流感疫情,这也得益于严格规范的管理方案、科学的生物安全措施。一般认为成年鸡HI效价在6lb时便需进行免疫接种;而有条件的鸡场,可以半个月或一个月随机采集样品做一次抗体检测,只要开产鸡ND、AI的抗体低于8lb就进行疫苗的加强防疫;相比之下,H5亚型禽流感抗体效价偏低,从免疫程序上应适当增加H5的免疫密度,通过不断地进行抗体检测,可对免疫程序进行科学的评估和调整,减少不必要的免疫应激和资金投入,不仅可以提高鸡群的生产性能,还能增加经济效益。由于新城疫疫苗的开发以及免疫方案的改进,近年来新城疫没有大规模的流行,临床上多以非典型的形式出现,且常与大肠杆菌、沙门菌、传染性支气管炎等混合或继发感染,给该病的诊断带来困难,在临诊时需详细收集资料,进行综合分析,予以鉴别。由于对禽流感普遍采取强制免疫措施,临床症状逐渐表现出非典型的特点,且毒