痔瘘熏洗颗粒的毒性研究

痔瘘熏洗颗粒的毒性研究

肛门直肠疾病的著名专家白连松教授接受了上海著名医院一名肛门直肠疾病专家的培训，该方法是现代制剂工艺中制备的中药复方。该药具有清热解毒、活血化瘀的功效,主要用于治疗内外痔肿瘤、脱出。本文对该制剂外用进行了毒理学的研究评价。现报告如下:1实验材料1.1k沪2002-东南角新西兰白色家兔,体重1.8～2.4kg,♀♂兼用,上海申旺兔场提供,合格证号:SCXK(沪)2002-001l。白色豚鼠,体重250～330g,♀♂兼用,上海申旺兔场提供,合格证号:SCXK(沪)2002-0011。Wistar大鼠,体重180～200g,♀♂兼用,上海斯莱克实验动物有限公司提供,合格证号:SCXK(沪)2003-0003。1.2实验试剂及试剂痔瘘熏洗颗粒(4g生药/g):由上海中医大药业股份有限公司提供,批号:031001。临用时以温水配成1.5%或24%的混悬液,作为痔瘘熏洗颗粒小、大剂量组(以下简称熏小、大剂量组)。糊精:为赋形剂,由上海中医大药业股份有限公司提供。临用时用温水配成0.75%的混悬液,作为对照组。痔瘘熏洗粉(8.0g(生药)/g):不含赋形剂,由上海中医大药业股份有限公司提供,批号:031001。临用时用蒸馏水配成48%的混悬液,以下简称痔瘘熏洗粉组。2,4-二硝基氟苯:为阳性药,中国医药(集团)上海化学试剂公司。批号:F20020315。加丙酮麻油(1∶1)配成1%(致敏给药)浓度和0.1%(攻击给药)浓度。1.3上海公司的产品AR2130电子精密天平:奥豪斯上海公司产品。JUNC2050轮转切片机:AO.CO公司。BX51系统显微镜:日本OLYMPUS公司。2方法和结果2.1多次皮肤多次给药对家兔所有皮肤和周围皮肤的刺激性反应家兔12只,♀♂各半,随机分为3组,即熏小、大剂量组和对照组,每组4只。采用家兔肛门粘膜处涂抹1.5%(临床人用浓度)或24%痔瘘熏洗颗粒混悬液,对照组给予等容量的赋形剂溶液,每日每次2mL/只,连续16次,使药液在肛门保持4h以上,同法连续给药7d。每日肉眼观察药物对家兔肛门粘膜及周围皮肤有无充血、红肿等刺激性反应,末次给药后24h取肛门粘膜及周围皮肤、肛管和直肠进行病理检查。结果显示,肉眼观察各组动物肛门及周围皮肤无充血、红肿等刺激症状,各组动物饮食、活动正常,均无烦躁等异常精神状态及全身中毒症状。HE染色病理组织学检查显示熏小、大剂量组和对照组动物肛门粘膜及肛周皮肤、肛管和直肠均无病理性改变。2.2皮肤刺激测试2.2.1皮肤多次刺激试验取新西兰白色家兔8只,随机分为2组,即熏小、大剂量组,每组4只,♀♂各半,给药前24h将每只家兔背部脊柱两侧用电动剃头刀去毛但不损伤皮肤,脱毛面积为150cm2,分为给药区与对照区。各组家兔给药区皮肤处分别1次涂抹1.5%或24%痔瘘熏洗颗粒混悬液4mL,对侧同法涂抹赋形剂4mL,用两层纱布覆盖涂抹部位,并用胶布固定,使药液保持4h。给药24h后用温水洗去药物,肉眼观察去除药物后1、24、48、72h家兔完整皮肤有无充血、红肿等刺激反应进行评分(表1),根据下列公式计算平均积分值,并进行刺激强度评价(表2)。72h后取两侧皮肤进行病理检查。公式:每组动物平均积分=∑红斑和水肿积分受试动物数=∑红斑和水肿积分受试动物数结果,各组动物给药区和赋形剂对照区皮肤红斑水肿积分平均值均为0,结果见表3。各组动物饮食、活动正常,均无烦躁等异常精神状态及全身中毒症状。病理观察显示熏小、大剂量组的给药区皮肤和对照区皮肤表皮完整,无异常改变,皮肤组织无红肿、充血及炎症细胞浸润,皮下毛囊等皮肤附件及间质也均无异常。刺激强度评价为无刺激性。2.2.2家兔皮肤刺激性试验动物给药前皮肤处理、动物分组和给药方法同试验2.2.1项,给药次数为每日2次,连续14d,给药期间每天肉眼观察对家兔皮肤有无充血、红肿等刺激性情况,并于末次给药后24h后用温水洗去药物,肉眼观察去除药物后1、24、48、72h家兔皮肤刺激性情况,按表1～2进行评分并进行刺激强度评价。然后取家兔背部皮肤,HE染色,进行病理检查。结果,各组动物饮食、活动正常,均无烦躁等异常精神状态及全身中毒症状,各组动物给药区和赋形剂对照区皮肤红斑水肿积分均为0。病理观察显示熏小、大剂量组的给药区皮肤和对照区皮肤表皮完整无异常改变,皮肤组织无红肿、充血及炎症细胞浸润,皮下毛囊等皮肤附件及间质也均无异常。刺激强度评价为无刺激性。2.2.3皮肤多次给药对家兔皮肤刺激性及病理检查给药前24h将兔背部脊柱两侧用电动剃头刀去毛并不损伤皮肤,脱毛面积为150cm2,将脱毛区分为给药区与对照区,给药区用砂纸磨损,并用16号灭菌针头在脱毛区做“井”字形切口(以渗血为度),对照区以同样方法处理,动物分组和给药方法同2.2.1项,每日给药2次,每次4mL/只,连续14d,给药期间每天肉眼观察对家兔皮肤有无充血、红肿等刺激性情况,并于未次给药后24h后用温水洗去药物,肉眼观察去除药物后1、24、48、72h家兔皮肤刺激性情况,按表1～2进行评分,并进行刺激强度评价。然后取家兔背部皮肤,HE染色,进行病理检查。结果,各组动物饮食、活动正常,均无烦躁等异常精神状态及全身中毒症状,各组动物给药区和赋形剂对照区皮肤红斑水肿积分均为0。HE染色,病理观察显示熏小、大剂量组破损皮肤的给药区表皮和皮下毛囊等皮肤附件完好,真皮浅层组织中可见灶性炎细胞浸润及水肿,破损皮肤对照区亦出现同样病理表现,因此认为是皮肤损伤所造成,刺激强度评价为无刺激性。2.3给药后皮肤观察和评分选用豚鼠进行过敏试验,分别于第1、7、14天3次致敏,一组豚鼠背部左侧皮肤处给予1.5%(临床人用浓度)痔瘘熏洗颗粒混悬液,0.3mL/只,另两组豚鼠给予等容量的赋形剂或1%2,4-二硝基氟苯组(阳性药),第28天,于豚鼠背部右侧皮肤进行攻击给药,肉眼观察给药后豚鼠背部皮肤的红斑、水肿情况,并按表1进行评分。结果,空白对照组和痔瘘熏洗颗粒组豚鼠皮肤72h内均未出现红肿的过敏反应,而2,4-二硝基氟苯组激发给药后1h,豚鼠皮肤开始出现红斑,72h内未消失,各组皮肤红斑水肿积分结果见表4。2.4止血钳夹闭引起大鼠病取Wistar大鼠20只,随机分为2组,即对照组和给药组。给药前动物禁食不禁水12h,用痔瘘熏洗颗粒粉配成48%混悬液(最大浓度),上午给药组直肠给予该混悬液0.2mL/100g,每次给药后用止血钳夹闭大鼠肛门15min,使药液在大鼠直肠内充分吸收,连续2次,间隔2h。对照组用同法给同等量蒸馏水。上、下午给药间隔3h,下午同法操作,连续2次给药,1d给药后,连续观察7d。结果,给药后对照组和给药组动物均活动减少,大便稀溏,部分大鼠肛门红肿(此认为是由于止血钳夹闭所引起的),两组无差异。第2天各组大鼠活动、大便均恢复正常,肛门红肿逐步好转,7d内均无全身中毒症状和死亡,7d后处死动物,解剖,肉眼观察直肠、肛门部等亦无明显病理性改变。3肌肉注射和给药安全性痔瘘熏洗颗粒是采用现代制剂工艺制成的中药复方外用颗粒,主要是通过熏洗法治疗痔疮。由于该制剂为外用,我们对动物采用涂抹法,结果显示该药在临床人用浓度或人用浓度16倍时,无论单次或多次给药,无论对粘膜、完整或破损皮