生理生化综合试验报告

《植物生理生化实验》综合性实验总结(2010—2011)学年第一学期课程：《植物生理生化实验》一生化实验课程：《植物生理生化实验》一生化实验21学时成绩:学院：林学院专业:林学年级:2009级学号：090410154姓名：黄泉妹综合性实验报告NaCl溶液浸种对水稻种子萌发过程若干生化指标的影响面向专业09级农学、植保、农资、园艺、设施、茶学、本项目 叫冲"林学、水保、制药、生安 学时 14学时(总学时45)实验内容简介本综合项目以水稻种子为材料，分别用蒸馏水、60mol/LNaCl溶液浸种一催芽一测定不同处理的发芽种子的游离氨基酸、可溶性蛋白质、淀粉酶和同工酶项目。实验要求：掌握分光光度计、离心机、电泳仪等仪器的使用方法以及电泳技术的基本操作、标准曲线的制作，并综合分析NaCl浸种胁迫对水稻种子生理特性的影响机制。综合性实验总结报告:60mol/LNacl溶液浸种对水稻种子萌发过程若干生化指标的影响摘要：研究并比较清水生长的水稻种子和60mol/LNacl溶液胁迫种子萌发的水稻种子中游离氨基酸和可溶性蛋白质含量的差异及淀粉酶和同工酶含量及活力的不同。结果表明：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中可溶性蛋白质和游离氨基酸的含量比清水浸泡的水稻种子的含量要低；60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中氧化物同工酶和淀粉酶的活性比清水浸泡的水稻种子的活性要低。研究结果说明：60mol/LNacl溶液的胁迫对种子的萌发和生长有抑制作用。关键词：清水浸泡的水稻种子、60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子、游离氨基酸、可溶性蛋白、淀粉酶、同工酶弓I言：盐胁迫是影响植物生长、降低作物产量的不利因素之一；据估计，我国盐渍化土壤面积约2700万平方千米，并且还有继续增长的趋势；种子萌发是植物整个生命中的关键，所以研究盐胁迫的种子中游离氨基酸和蛋白质的含量，以及对种子中淀粉酶和同工酶产生的影响，还有对种子萌发过程中若干生化指标的影响因素的研究是至关重要的。一、材料与方法1.1材料：清水浸泡的水稻种子、60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子1.2方法1.2.1植物组织中可溶性蛋白质含量的测定用Folin一酚试剂法，在碱性下蛋白质的肽键与铜结合生成紫红色的蛋白质一铜络合物；络合物及蛋白质中酪氨酸和某丙氨酸等芳香族氨基酸残基使磷钼酸一磷钨酸试剂还原，产生磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，一定条件下，颜色深浅与蛋白质含量成正相关，利用650nm波长的特性吸收进行比色测定。1.2.2植物组织中游离氨基酸总量的测定游离氨基酸与茚三酮共热时生成二酮茚一二酮茚胺，该产物成蓝紫色，在一定范围内吸光度与氨基酸溶度成正比，即可用分光光度法测定其含量。1.2.3植物过氧化物酶同工酶测定利用过氧化物酶催化双氧水（H2O2）分解并把联苯的溶液染色，出现的蓝色或棕褐色条带即为过氧化物；苯胺氧化成蓝色或棕褐色产物原理：将电泳后的凝胶置于含有双氧水（H2O2）及联苯胺的溶液中染色，出现的蓝色或棕褐色即为过氧化物酶同工酶在凝胶中存在的位置，多条有色带构成过氧化物酶同工酶酶谱。1.2.4淀粉酶活性的测定 淀粉酶包括a一淀粉酶、p一淀粉酶，采用加热钝化8一淀粉酶，测出a一淀粉酶的活力，再与非钝化条件下测定总活力（a+p）比较，即算出p一淀粉酶的活力。二、 实验结果分析2.1植物组织中可溶性蛋白质含量的测定由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中可溶性蛋白质含量低于用清水浸泡的水稻种子。造成误差的可能原因：在研磨水稻种子时没有加入石英砂或者太少使得研磨不够充分；在加入甲液后未置于30°C下放置10min；取量标准溶液时出现体积误差。2.2植物组织中游离氨基酸总量的测定由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子中游离氨基酸的含量比清水浸泡的水稻种子的低，且OD值大的样品呈现的蓝紫色就更深，试验中出现的误差可能是：研磨不够充分、迅速；试剂的用量控制不够精准；过滤不充分；加热时间不足。2.3植物过氧化物酶同工酶测定由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸种的水稻种子比清水浸泡的种子的色带疏及颜色浅。实验的关键：安装玻璃夹心槽应严密，加胶后应及时覆盖水层，防止氧化；电泳过程应严格控制好电压与电流的大小。2.4淀粉酶活性的测定由实验数据可知：用60mol/LNacl溶液浸种的水稻泡子中淀粉酶活力低于用清水浸泡的水稻种子中淀粉酶的活力。误差分析：在加入1%淀粉溶液时，各试管应尽量同步进行；并准确控制好水浴加热的温度和时间；9支试管在显色反应时应同时放入100C水浴锅中，并在准确的时间间隔后一起取出。三、 讨论通过以上的实验的结果显示，我们可以知道60mol/LNacl溶液对水稻种子萌发具有抑制作用。对于水稻种子萌发过程若干生化指标产生影响，说明盐胁迫的种子其细胞的细胞膜透性受到破坏，外界K+、Na+等离子进入细胞内使氧化物同工酶活性和淀粉酶活性有所降低。结果表明：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻种子比于清水浸泡的水稻种子中的蛋白质和游离氨基酸含量低，淀粉酶、氧化物酶同工酶的活力被抑制。参考文献：文树基.基础生物化学实验指导.西安：陕西科学技术出版社，1994皱琦.植物生理生化实验指导.北京：中国农业出版社，1995西北农业大学植物生理生化教研室.植物生理学实验指导.西安：陕西科学技术出版社，1987B.L.威廉斯，K•威尔逊编.王海云、冯北元译.实用生物化学原理和技术.北京：科学出版社，1979袁晓华，杨中汉.植物生理生化实验.北京：高等教育出版社，1983上海植物生理学会.植物生理学实验手册.上海：上海科学技术出版社，1985李建武等.生物化学实验原理和方法.北京：北京大学出版社，1997汪沛洪.基础生物化学实验指导.西安：陕西科学出版社，1986张志良，吴光耀.植物生物化学技术和方法.北京：农业出版社，1986朱利泉.基础生物化学实验原理与方法.成都：成都科技大学出版社，1997张志良，翟伟菁.植物生理学实验指导(第三版).北京：高等教育出版社，2003[美]J.萨姆布鲁克、E.F.弗里奇、T.曼尼阿蒂斯著.金冬雁，黎孟枫等译.分子克隆 实验指南(第二版).北京：科学出版社，1996黄留玉.PCR最新技术原理方法及应用.北京：化学工业出版社，2005刘恒烈，战广琴，曹流俭.油菜籽中硫代葡萄糖甙总量测定方法 内源酶法.中国油料，1994,16(4)：46—49戚存扣，马京.油菜籽低硫代葡萄糖甙材料简便快速筛选