HIV试验室SOP文件-新版

HIV实验室SO咬件■新版3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第0页共70页目HIV筛查实验室的设置及人员情况••HIV筛查实验室工作管理程序 HIV筛查实验室工作流程图 目HIV筛查实验室的设置及人员情况••HIV筛查实验室工作管理程序 HIV筛查实验室工作流程图 HIV筛查实验室规章制度 一、 实验室工作制度 二、 岗位责任制 三、 标本管理制度 四、 试剂管理制度 录 3 4 6 7 7 7 8 11五、污染区工作守则 12七、环境消毒隔离制度 13\o"CurrentDocument"八、实验台消毒措施 14\o"CurrentDocument"九、废弃物处置和实验室消毒 15\o"CurrentDocument"十、消毒液的配置及使用措施 16\o"CurrentDocument"十一、消防安全制度 16\o"CurrentDocument"十二、生物安全防护制度 16十三、职业暴露的防护及处理措施 17\o"CurrentDocument"十四、筛查检验程序 18\o"CurrentDocument"十五、检测结果的判定方法 25\o"CurrentDocument"十六、检测结果报告规程 25\o"CurrentDocument"十七、检测结果的判定方法 26\o"CurrentDocument"十八、检验结果的解释 27\o"CurrentDocument"十九、检测数据的记录与保存 28\o"CurrentDocument"二十、呈阳性反应标本的处理程序 28\o"CurrentDocument"二十一、检测数据季报方案和程序 29\o"CurrentDocument"二十二、感染追踪处理方案 30\o"CurrentDocument"二十三、保密程序制度 31\o"CurrentDocument"二十四、质量管理制度 323河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第1页共70页TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"二十五、室内质控分析管理制 33\o"CurrentDocument"二十六、外部质控血清的制备和保存 34\o"CurrentDocument"二十七、仪器的使用维护 35\o"CurrentDocument"人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 36\o"CurrentDocument"程序HIV-抗体初筛试验标准操作（酶联免疫法） 37\o"CurrentDocument"人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 38\o"CurrentDocument"人类免疫缺陷病毒抗体检测（胶体金法） 39科华酶标仪的标准操作程序（SOP） 40科华全自动洗板机标准操作规程 40加样器的维护保养程序 41\o"CurrentDocument"加样枪校准记录 41\o"CurrentDocument"生物安全柜的标准操作程序（SOP） 42\o"CurrentDocument"离心机操作维护规程 47\o"CurrentDocument"室内质量控制的标准操作程序 48室间质量评价的标准操作程序（EQA） 55实验室意外和事故处理 58艾滋病的职业暴露后预防 60附表1HIV抗体筛查报告 61附表2HIV抗体复检检测单 62附表3HIV抗体检测数季报表 65附表4艾滋病职业暴露个案登记表 66附表5艾滋病防治工作人员职业暴露事故汇总表 703河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第2页共70页HIV筛查实验室的设置及人员情况为了更好发挥艾滋病检测在艾滋病防治工作中的作用，根据《全国艾滋病检测技术规范》对于艾滋病的检测要求，我院检验科设置了独立的HIV筛查实验室。为了使检测工作能够正常进行，保证 HIV检测结果的正确性和准确性，我们不仅对工作环境条件和检测设施加以整改，而且建立了完整的实验室标准化操作规程，以确保 HIV检测结果的准确有效。HIV检测实验室分为清洁区、半污染区和操作区，配备了专用的的生物安全柜、电脑、冰箱、酶标仪、洗板机、恒温培养箱、离心机、高压消毒锅等设备和安全防护用品等。根据HIV检测实验室工作的需要，我科配备从事HIV检测工作人员4名，其中专职工作管理人员3名，副高级技术人员1名，中级卫生技术职称人员3名，所有人员从业年限均在7年以上。并积极参加省级、市级举办的HIV检测技术培训，不断提高质量意识、技术水平和业务能力，保证HIV检测工作的质量。HIV筛查实验室负责人： 贾向东人员：孟晓虹吕华

郭长城3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第3页共70页HIV筛查实验室工作管理程序一、 目的对HIV筛查实验室工作全过程进行控制，保证检验工作符合规定要求，提供可靠的检验数据和有效的检验报告。二、 范围适用于本实验室开展的各类医学检验工作的各个环节。三、 职责1、 工作人员负责门诊检验样品的米集。2、 工作人员负责住院检验样品的接收。3、 负责人负责组织协调完成检验任务，并负责对检验工作质量的监督。4、 工作人员负责执行检验任务，做好检验记录，填报检验数据。5、 报告授权审核人负责检验报告的签发、发放。6实验室负责人负责检验资料的归档保管（计算机）工作。四、 工作程序（一）、检验工作分类本实验室的检验工作，根据标本的来源不同分为采样检验和送样检验，根据工作性质分为常规标本检验和检验质量抽检委托复检。（二八委托复检工作需按下列程序执行：1、 当面核对标本姓名、性别、年龄及标本质量等资料；2、 按要求进行检验；3、 必要时委托方可全程参与检验过程；4、 其余程序与常规检验标本相同。（三）、采样及样品管理3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第4页共70页采样执行本科程序文件《标本采样管理程序》。样品接收、分发和保管处理，执行本科程序文件《标本管理程序》和《标本采样管理程序》。样品一旦受理即给予受理编号。（四）、标本检验检验执行本科程序文件《标本检验管理程序》和《检验项目标准操作规程》（五） 检验依据1国家标准方法；2、 部颁标准方法和检验规范；3、 卫生技术部门推荐使用方法；4、 有关科技文献或杂志上发表的方法；5、 自编规程的使用执行《检验方法确认程序》。（六） 、检验实施检验人员按检验标准或作业指导书的要求按时完成检验任务， 并按程序文件《记录档案管理程序》做好原始记录。（七八检验报告的编制、复核和签发按本科程序文件《检验报告管理程序》执行。（八）、检验方法控制检验必须按《全国临床检验操作规程》规定的方法或标准检验方法进行，也可用经本科技术负责人批准的非标准检验方法进行。其他检验方法不得采用3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第5页共70页HIV筛查实验室工作流程图3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第6页共70页HIV筛查实验室规章制度一、 实验室工作制度i•实验室保持清洁整齐，仪器设备要摆放整齐，说明书手册要妥善保管，原始记录不得擅自修改和销毁。进入实验室前要摘除首饰修剪指甲，以免揕手套。严禁在艾滋病实验室进食，饮水，吸烟和化妆。不要将与工作无关的物品带入实验室。进入实验室要穿隔离衣，戴手套必要时戴双层手套和防护眼镜。认真对待样品，严格遵守操作规程。采血时一定要注意安全，使用一次性注射器，谨慎操作防止刺伤皮肤以免造成污染。8•严格执行实验室工作人员年度采血和备案年度，工作人员从事工作必须进行HIV抗体和乙肝，丙肝等肝炎病毒标记物的检测，注射乙肝疫苗，每半年至一年进行一次抗体检测，并保留笑血清样品。二、 岗位责任制岗位责任制是保证工作质量和医疗安全，提高工作效率的重要环节。建立岗位责任制，做到人人分工职责明确，事事有人负责，立足本职，团结互助，相互协调，保证各项任务的胜利完成。HIV筛查实验室由有实践经验的技术人员负责。牢固树立把质量放在第一位的思想，在工作中必须加强检查和复查制度，以保证血液质量及医疗安全。交接工作必须认真负责，须核对实物和记录，对工作一般情况、存在问题和注意事项应进行具体交待，否则，发生问题由交班人负责。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第7页共70页职工临时因故离开工作岗位，必须将工作委托给能胜任该项工作的人员，否则,发生问题由原担任该项工作者负责。6•新参加工作的职工，在未熟悉和掌握工作前不能独立工作不能顶岗位，在确能掌握经考核合格后方可。7.建立HIV筛查实验室专用的精密仪器和重要设备专责岗位制，其他人不得任意使用。严格按照仪器操作规程操作，不可擅自乱改设置。8•凡是一物多人使用的，除共同负责外，应指定一人为该岗位责任制负责人，负责指导正确操纵，定期安全检查，经常维护保养，保持正常运转，该负责人有权制止任何违章操作和有害设备安全的行为。9.人员职责分工：每日值班人员负责样品的采集，接收，执行检验任务，做好检验记录，填报检验数据，签发报告及实验室仪器设备的日常维护和保养。行政班人员负责协助值班人员做好实验室的所有日常工作， 并负责对检验工作质量的监督，检验报告的复核、发放，结果的解释，实验室室内消毒以及每日医疗废弃物的消毒处理。实验室负责人负责检验资料的归档保管（计算机）工作。三、标本管理制度（一）、样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用的血液样品的采集和处理方法如下：1、血清样品采集和处理（1） 、用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置12h,待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用（2） 、如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。2、抗凝血样品采集和处理3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第8页共70页、用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管)，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。、应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。、用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在 4〜8h内分离PBMC和血浆，否则应在24〜48h内分离血浆和血细胞。3、采集样品注意事项、采集样品原则上应按临床采血技术规范操作。、采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病(AIDS)病人血液/体液的操作，应戴双层手套。、所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。、应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒。、采血时一定要注意安全，采血用一次性注射器，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染。、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。样品的保存1、 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20C以下，短期(1周)内进行检测的样品可存放于2-8°C。2、 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20C以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80Co3、 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。样品的运送3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第9页共70页1、 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。2、 应采用WHO提出的三级包装系统：第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。3、 血清和血浆样品应在2〜8C条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18〜23C运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。4、 运送感染性材料必须有记录。5、 如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20E以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。6特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。（四）。样本接收和拒收标准1、签收：实行双签制度，送检者及实验室验收人员均需签名。2、 认真查对姓名，性别，年龄，住院号，病区/床号，检测目的及项目等。对不符合要求者记入拒收标本记录表中，并及时通知采样单位，正确及时地补米样本，以免延误病人的检测报告。3、 对符合检测要求的标本及时进行唯一性编号（详见标本唯一性编号标准操作程序）并记入可接收标本记录表中。4、 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。4.1、核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器进行消毒，同时报告科主任等3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第10页共70页有关领导和专家。4.2、检查样品的状况，记录有无溶血、污染、血脂高及黄疸等情况。如果污染过重认为样品不能接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。4.3、 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼睛，以防皮肤或粘膜污染。4.4、 接收样品时应填写样品接收单。（五）标本检测1、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超 /高速离心时形成气溶胶。复核标本接收过程中的每一步骤，在检测过程中，应严格按照标准化操作规程。2、 在标本足够的情况下，不能浪费、随意丢弃或损坏标本。应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒（六）、标本处理检验标本先用含2-3g/L有效氯消毒剂浸泡半小时，再用高压锅高压消毒。然后用双层专用黄色医用垃圾袋专人收集所有废弃医用垃圾。送专门存放医用垃圾处统一焚化处理。四、试剂管理制度（一）、采购与审批科主任根据需要定期拟定采购计划，交由院领导审批，批核后由科主任交与器械科，有器械科与经销联系（二八验收与登记仓管负责人根据供应商提供的试剂及清单对数量、品种、品牌、包装等进行验收，并将入库数据登记。（三八贮存3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第11页共70页冷臧试剂统一存放在HIV实验室专用的冰箱内，冷箱保管及温度控制由仓管负责人负责。HIV试剂一般应2〜8C避光保存，在有效期内使用。（四八出库管理各室提出试剂申领，仓管人填写出库单据，认领人签名后出库。（五八其它1、 试剂的保存应严格按照要求存放，以保证有效期内能有效地使用，杜绝浪费现象。2、 仓管人应对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。3、 易燃，易爆试剂应分开存放远离火源和电源。4、 剧毒试剂必须由科主任和负责科室保卫的同志负责保存，放保险箱内，使用时应有两人在场，并做好登记。五：污染区工作守则做好污染区实验室废弃物的消毒处理，未经实验室管理人员许可不得进入污染区。1、 凡是被血液、体液污染的物品要先消毒灭菌后清洗。2、严格操作程序，做好各种实验记录，实验阳性标本保存至 5年，（经过免疫印记确诊的阴性标本也要保存），不得擅自处理。3、 禁止用口吸液体，必须使用移液器操作。4、 操作中有标本等外溅时，应及时消毒，对大量溅出的高浓度污染物在清洁前先用1%次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦洗。5、每次实验后，要对工作台面消毒，用 0.2%-1%次氯酸钠溶液喷洒和浸泡。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第12页共70页6、离开实验室前要脱去手套，隔离衣等防护物品，放入指定污桶，用肥皂和流水洗手。六：清洁区工作守则1、 实验室是检验工作的场所，要保持清洁、安静、物品摆放要整齐。2、 清洁的防护服置于实验室清洁区内存放处。检验人员工作时应按要求穿工作服、工作衣、帽、专用鞋等。3、 禁止将与检验工作无关的物品带入检验室，禁止在检验室内会客、抽烟、吃东西。4、 注意安全，下班后、节假日必须切断水源、气源、电源，关好门窗。5、严禁将污染区的物品带入清洁区。6、 妥善保管仪器、设备的说明书、操作规程、原始记录表、零（部）件、常用工具、电源线、连接线要排列整齐。7、 检验室须配置消防设备，并经常检查待用状态，任何人不得擅自挪用或挪动。七、环境消毒隔离制度1、 实验室应分为清洁区和操作区，清洁区要注意保护不受污染。操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置，如紫外线灯，排气扇等操作区的工作台及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染时随时消毒，每周大扫除一次。2、 采血室每日操作前用清水擦拭操作台一次，采血结束用消毒液擦拭操作台、桌子和地面一次，紫外线每日照射消毒二次，每月空气细菌培养一次，紫外线强度定期测定。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第13页共70页3、 各种检验标本的收集，送检必须用相应指定的容器留取，不得外溢污染。4、 静脉及末稍采血，应严格执行消毒隔离措施，静脉抽血做到一人一针一筒一巾一带一消毒，所用止血带及纸垫每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜绝交叉污染。5、 一次性医用器具包括采血针，注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管，应严格做好领发登记，注射器先浸泡消毒后由供应室一对一调换，统一处理，其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送焚烧炉焚烧。6检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术，操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩，操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手，必要时用消毒液浸泡双手，酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次。7、 溢出试管外的血液，应立即用碘酒棉签擦拭干净，注意防止玻璃碎片刺伤手，并注意试管有无破裂。8、 当针头和碎玻璃刺伤手时，用流水冲洗，挤出血水，应立即用碘酒消毒局部。9、 实验室操作时应戴上手套。吸取标本，离心振荡等应严格按操作规程，防止自身和实验室受污染。10、已检查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠（2000mg/L）中两小时后，标本倾弃，一次性容器送焚烧，重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用，均要有记录。有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理，防止污染环境。11、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进入。八、实验台消毒措施1、 实验台消毒措施必须符合艾滋病实验室的通用生物安全要求。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。2、台面的清洁消毒，保持清洁、湿式打扫。每天开始工作前用湿布抹擦 1次，地面用湿拖把擦1次，禁用干抹干扫。抹布和拖把等清洁用具实验室专用，不得混用，用后洗净晾干，下班前用含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000mg/L）、0.2〜0.5%过氧乙酸或75%乙醇抹擦1次。也可用便捷式高强度紫外线消毒器近距离照射消毒。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第14页共70页3、 应象操作未知传染风险样品一样进行消毒与灭菌，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的血液、质量控制和参考物质，若被上述物品明显污染，如具传染性的标本或培养物外溢，溅泼或器皿打破，洒落于台面，应立即用消毒液消毒，用5000mg/L有效氯消毒剂、过氧乙酸或乙醇洒于污染的台面，并使消毒液浸过污染表面，保持30〜60min后再擦，拖把用后浸于上述消毒液内1h以上。4、 各类在实验室实验台上操作后的废弃物品均应视作物染物分类处理，所有废弃物应视为HIV污染物品，按照《传染病防治法》处理。九、废弃物处置和实验室消毒1、 废弃物处置废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》 （GB19489-2004）和《消毒技术规范（2002年版）》。从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。2、 HIV常用的物理消毒方法压力蒸汽消毒，121T，保持15〜20min;干燥空气烘箱消毒（干烤消毒），140C，保持2〜3h。3、 HIV常用的化学消毒方法HIV最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯 2000〜5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10〜30min。4、 废弃物缸：5000mg/L次氯酸钠。5、生物安全柜工作台面和仪器表面：75%乙醇。6、 溢出物：5000mg/L次氯酸钠。7、污染的台面和器具：2000mg/L次氯酸钠，也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛浸泡消毒。十、消毒液的配制及使用措施1、HIV实验室最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10〜30min。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第15页共70页2、含氯消毒剂的配制：次氯酸钠原液使用前进行 1:20〜1:50稀释(2000-5000mg/L)或联昌84使用前进行1：10〜1：25(2000-5000mg/L)稀释后，用于实验室内的消毒。3、 乙醇，俗称酒精”能够杀灭多种细菌，对HIV病毒有一定的杀灭作用，70〜75%的效果最好。因此，使用前新鲜配置足量70〜75%的乙醇，用于生物安全柜、工作台面和仪器表面的消毒，可以达到最佳的消毒效果。4、过氧乙酸也是目前使用比较广泛的一种高效消毒剂，新鲜配置 1〜3%的过氧乙酸熏蒸，用于地面、墙壁、实验器材及实验室内资料、文件、书本等物品的消毒。0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡 1〜20分钟，再用肥皂洗手。5、 2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒，医疗器械等。6HIV实验室常用化学消毒剂的配置，本着多用多配，少用少配，现用现配的原则，保证消毒剂使用时的浓度，保证消毒效果。十^一、消防安全制度1、 根据谁主管、谁负责”的原则，实行科室负责制。2、 主管领导和保卫科对全体职工经常进行消防安全教育，提高思想认识，掌握消防知识和消防器材的使用。3、 严格执行《安全防火管理制度》各种火种与易燃易爆物品，必须严格分区，保持一定的安全距离。实验室实施单向流向制度，通道不得乱堆放易燃爆物品和杂物。4、 严禁在实验室内吸烟。5、 电器的安装与拆除，必须由电工进行，严禁乱接电源，乱后电线。6各种机电设备、高温电器设备、耐高压容器和设施，使用时必须有专人负责，随时检查，消除隐患，严防事故发生。7、 各防火区域设置的消防器材和设备，应定期进行检查，维修和更换，随时处于完好状态，并不得随便挪动。8、 任何人发现火、水灾等隐患者，必须及时向科领导报告。科主任及时向院领导报告，及时做好善事处理工作。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第16页共70页十二、生物安全防护制度1、 上岗工作人员应是经过岗前安全与技术培训，取得合格证，具有独立工作能力的人员。2、 进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时（如对筛查阳性标本进行复测或检测高危标本）要戴防护眼镜，防止污染暴露的皮肤和衣物。3、 严格按照操作规程操作。操作过程中，不得用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。4、 操作时可能发生的触电、失火、玻璃割伤、针头刺伤、烧伤、不慎中毒、传染性标本的污染，有应急处理的方法，有关工作人员均应熟悉。5、 操作中手套破损，应立即丢弃，洗手后戴上新手套继续操作，不慎发生泻漏，应立即按照《发生职业暴露后的处理措施》，进行处理。6防止腐蚀、灼伤、中毒、火灾和爆炸等事件发生。7、 实验操作完毕后，应按照实验室清理与消毒程序，进行善后处理。同时记录相关资料与数据并存档。8、 工作结束后，应先洗戴手套的手，然后脱去手套丢弃，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手后离开实验室。9、 注意安全，随手关门，做好水，电，门的安全保卫工作，防火防盗防水。十三、职业暴露的防护及处理措施HIV检测实验室职业暴露是指检验工作人员在从事检测工作过程中意外被艾滋病病毒感染者或者艾滋病病人的血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其他利器刺破皮肤，有可能被艾滋病病毒感染的情况。（一）、防护措施：1•医务人员进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴手套，操作完毕，脱去手套后立即洗手，必要时进行手消毒。在诊疗、护理操作过程中，有可能发生血液、体液飞溅到医务人员的面部时，医务人员应当戴手套、具有防渗透性能的口罩、防护眼镜；有可能发生血液、体3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第17页共70页液大面积飞溅或者有可能污染医务人员的身体时， 还应当穿戴具有防渗透性能的隔离衣或者围裙。3•医务人员手部皮肤发生破损，在进行有可能接触病人血液、体液的诊疗和护理操作时必须戴双层手套。4•医务人员在进行侵袭性诊疗，护理操作过程中，要保证充足的光线，并特别注意防止被针头、缝合针、刀片等锐器刺伤或者划伤。5•使用后的锐器应当直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，也可使用具有安全性能的注射器、输液器等医用锐器，以防刺伤。禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。（二）、处理措施：用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤，用生理盐水冲洗粘膜。如有伤口，应当在伤口旁端轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，再用肥皂液和流动水进行冲洗，禁止进行伤口的局部挤压。受伤部位的伤口冲洗后，应当用消毒液，如75%的酒精或者0.5%的碘伏等进行消毒，并包扎伤口；被暴露的粘膜，应当反复用生理盐水冲洗干净。在暴露后的0周、第四周、第八周、第十二周及六个月时抽血进行检测艾滋病病毒抗体。预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在四小时内实施，最迟不得超过二十四小时；即使超过 24小时，也应当实施预防性用药，连续使用28天。发生艾滋病病毒职业暴露后立即通知院感科备案、评估。十四、筛查检验程序1、 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。2、 筛查方法一，胶体金法3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第18页共70页样品的米集和保存采集静脉的血清、血浆样本必须在无菌条件下，并避免样品溶血。如果血清和血浆样品收集后7天内检测，样品须放在2-8C保存，如果大于7天则须冷冻保存。操作步骤在使用此测试卡前必须仔细阅读试剂的说明书， 需严格按照试剂说明书执行有关操作，否则无法保证可靠的结果。将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。将所需数量的测试卡从包装盒中取出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上。用微量加样器取50卩1羊本血清，加到测试卡的加样处。加样后，阳性标本可在1〜30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议 30分钟再最终观察并记录实验结果。结果判断阳性:测试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。阴性:测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。失效:对照区未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并将待测样本稀释后用新的测试卡重新测试。 注意:测试区（T）内的紫红色条带可呈现颜色深浅的现象。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应判定为阳性结果。二，酶联免疫法1珠海丽珠原理及用途：本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒I型和U型HIV-1/HIV-2琢抗原合成肽或基因重组蛋白，包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成。应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第19页共70页的HIV-1/HIV-2抗体。试剂盒成分HIV抗原包被板12孔X8,HIV酶标记物7mlX1瓶，阴性对照1mlX1瓶，阳性对照1mlX1瓶，20倍浓缩洗液50mlX1瓶，底物缓冲液7mlX1瓶，底物液7mlX1瓶，终止液7mlX1瓶，封口袋1个，说明书1份操作方法①将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即时封存。 ②用去离子水和蒸馏水20倍稀释浓缩洗涤液。③将所需数量的条板固定于支架按顺序编号设置样品孔、外部对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔 .|每次实验需设外部对照1孔阳性对照2孔阴性对照3孔。④在样品孔中加入50ul待测样品，阴性、阳性对照及外部对照每孔加入50ul，轻拍混匀。⑤置37C温育60分钟。⑥将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤 5遍，扣干。⑦每孔加入50ul酶标记物，轻拍混匀，置37E温育30分钟。⑧重复步骤⑥。⑨每孔加入 50ul底物缓冲液和50ul底物液，轻拍混匀，置37E避光温育30分钟。⑩每孔加入50ul终止液终止显色反应，用酶标仪（双波长 450nm/630nm测定各孔A值。结果判定临界值|Cutoff=0.15+阴性对照的平均A值（阴性对照的平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按实际值计算），样品的A值》Cutoff值为HIV抗体阳性；样品的A值＜Cutoff值为HIV抗体阴性。2北京万泰试剂厂家：北京万泰生物工程公司试剂类型：双抗原夹心酶联免疫法仪器：a.洗板机b.酶标仪c.恒温箱标本的采集与要求1病人的准备：无特殊要求。2标本的类型：无溶血的血清或血浆。3标本准备： 取无菌试管采集全血2ml，待血液凝固后离心分离血清，标本应无溶血现象。标本采集后应及时测定，如不能及时测定，将分离后的血清样本放置于4〜6C冰箱保存不超过4天，-20C以下保存可延长一个月，-80C一下可长期保存。不合要求的样本按样本拒收制度执行。操作步骤1、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。2、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照 3孑L、阳性对照I型2孔，外部对照1孑L。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第20页共70页3、加样：分别在相应孔中加入待检样品、阴阳对照、外部对照各 100J。4、 温育：封板后37+1T60min5、 洗涤：洗板机洗5遍。6、 加酶：每孔加入酶标试剂100d。7、 温育：37+1T30min8洗涤：洗板机洗5遍9、 显色：各孔加入AB显色液50d，混匀，37+1T30min。10、 测定：加入终止液50d,450nm/620nm波长测定各孔OD值。结果判断：阴性对照孔ODfiw0.10，阳性对照孔OD值》0.80，试验有效。临界值(CUTOFF的计算临界值二阴性对照孔OD均值Nc+0.12.阳性判定：样品OD值大于等于临界值(CUTOFF为HIV抗体阳性，样品小于临界值为阴性。(注意：初试阳性标本应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》进行确证实验。厦门英科新创【试剂名称】人类免疫缺陷病毒HIV(1+2型)抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)【汉语拼音】RENLEIMIANYIQUEXIANBINGDU(HIV1+2XING)KANGTIZHENDUANSHIJIHE(MEILIANMIANYIFA)【英文名】HIV(1+2)AntibodiesELISAKit【检测原理】本试剂盒采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的(HIV1/2)型抗体。采用多种HIV-1和HIV-2的特异性抗原制作预包被板及酶结合物。当待检样本中存在HIV抗体时，在反应过程中形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。【适用范围】人类免疫缺陷病毒(HIV1/2)抗体辅助诊断及献血员筛查。【试剂组成】序号组分名称数量包装规格序号组分名称数量包装规格1微孔板1包8X12T6显色剂A1瓶7ml

3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第21页共70页2酶标抗原1瓶14ml7显色剂B1瓶7ml3阳性对照1瓶1ml8终止液1瓶7ml4阴性对照1瓶1ml9说明书1份5洗涤液2瓶25ml10自封袋1个11封板膜3张【样品的采集和保存】1•采集静脉的血清、血浆样本应在无菌条件下保存，并避免样品溶血及反复冻溶。血清和血浆样品收集后如果无法在当天检测，样品须在 2-8°C保存；如果大于7天则须冷冻保存。【操作步骤】:在使用本检测试剂前必须仔细阅读使用说明书。1•平衡:将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18C-25C），微孔板开封后按需要取用，余者及时以自封袋封存。配液:浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用。编号:取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。加样:按顺序分别在相应孔加入50卩l待测样品及阴、阳性对照血清。温育:覆上封板膜，置37C温育30分钟。洗涤:用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。加酶:分别在每孔中加入酶标抗原100卩l。温育:覆上封板膜，置37C温育30分钟。洗涤:用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。10显色:每孔加底物A、B各50卩l，轻拍混匀，覆上封板膜，37C暗置20分钟。11终止:每孔加入终止液50卩l，混匀。12测定:用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。【结果判定】1、阳性对照均值应大于阴性对照均值0.60以上且阴性对照均值小于0.10方可认

3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第22页共70页为本次实验有效。2、临界值计算：CutoffValue=0.10+阴性对照均值（若阴性对照均值小于0.05,以0.05计）。3、 样本0D值大于或等于临界值为初筛阳性，小于临界值为阴性。初筛阳性者重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送HIV确认实验室进行确认试验。【注意事项】1、 本检测试剂仅用于体外诊断试验。仅用于人血清或血浆样本，其它体液和样品可能得不到准确的结果。2、本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的 HIV初筛实验室。3、 样本的加样建议使用微量加样器准确加入。酶标抗原需用微量加液器加液，并经常校对其准确性。加酶标记抗原时，注意勿使微量加液器的加样头接触样本以避免样本间相互污染。加试剂前，应先将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。4、 封板膜为一次性使用，每次使用后请丢弃，重复使用将导致严重污染。5、 HIV检测必须符合HIV实验室管理规范和生物安全守则的规定，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。所有样品、洗涤液和各种废弃物应按传染物处理。对于那些含有感染源和怀疑含有感染源的物质应有合适的生物安全保证程序， 下列为有关注意事项但不仅限于此：*带手套处理样本和试剂*不要用嘴吸样*不可在处理这些物品时吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜*用消毒剂对溅出的样本或试剂进行消毒*按当地的有关条例来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物*试剂各组份在正当处理和保存的情况下直至效期都保持稳定，不能使用过效期的试剂盒6、 HIV抗体检定结果的判定必须以酶标仪读数为准。样本的酶标仪读值与样本中抗体的滴度没有一定的必然联系。

3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第23页共70页7、任何一种测试都不能绝对保证样本中没有低浓度的抗体存在，所以阴性结果任何时候不能排除含有HIV暴露和感染的可能。8每板建议设阴、阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样本及酶标抗原，其余各步相同。9、 洗涤液应先取出预先稀释，洗涤时各孔均须加满但应防止溢流，防止孔口内有游离酶未能洗净。10、 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。【贮藏】储存:2-8C避光保存【有效期】十二个月【批准文号】3、复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告 HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见图 1）。

3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第24页共70页 送确认实验室确认 ^告图1HIV抗体筛查检测流程4、初筛试验结果的报告对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告（可用附表1）；对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1）。8、 初筛试验呈阳性反应样品的转送如需送上级实验室进行复测或确认， 需要填写“HIV抗体复测送检单”（附表2）,经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。9、 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。十五、检测结果的判定方法1、 HIV测定（胶体金法）结果的判定方法（1） 、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反应。（2） 、阴性：仅出现质控一条红线，则实验结果为阴性。（3） 、无效：如无红线（或只有反应线）出现，表明实验无效，须重新检测。2、 HIV测定（ELISA法）结果的判定方法（1） 、计算临界值CO（cut-off）值。（2） 、临界值二阴性对照A均值+0.12（3）、正常情况下，阴性对照孔的0D值w0.1（若1孔阴性对照的0D值〉0.1应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值〉0.1，应重复实验。）。样品OD值V临界值者为HIV抗体阴性。（4）、正常情况下，阳性对照孔的OD值》0.8（若1孔阳性对照的OD值V3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第25页共70页0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值V0.8,应重复实验。样品OD值目临界值者为HIV抗体阳性。十六、检测结果报告规程1、 从事HIV检测工作的技术人员必须接受过上岗前的培训和定期复训。2、 HIV检测工作必须在独立的实验室内进行。3、 初筛检测试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、中国药品生物制品检定所批批检合格且在有效期内的试剂。4、 按照《全国艾滋病检测技术规范》的要求建立健全质量管理制度、实验室安全标准操作规程、安全防护工作等。5、 检测结果报告前应填写好原始实验记录资料，包括试验日期，试验操作记录，检测样品及空白、阴、阳对照结果， S/CO值、临界值、试剂厂家、批号、效期，检测人、复核人签名等。6将试验结果存档保存，处理试验废物，擦净实验台，做好实验室消毒卫生。7、结果报告：对呈阴性反应的样品，可出具 “HIV抗体筛查报告”(见附表1)阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。8、 复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告 “HIV抗体筛查报告”(见附表1)阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，贝U应按照《全国HIV检测管理规范》的要求送艾滋病确认实验室进行确证试验 。十七、检测结果的判定方法1、 HIV测定(胶体金法)结果的判定方法、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反应。、阴性：仅出现质控一条红线，则实验结果为阴性。、无效：如无红线(或只有反应线)出现，表明实验无效，须重新检测。2、 HIV测定(ELISA法)结果的判定方法、计算临界值CO(cut-off)值。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第26页共70页（2） 、临界值二阴性对照A均值+0.12（3）、正常情况下，阴性对照孔的0D值W0.1（若1孔阴性对照的OD值〉0.1应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值〉0.1，应重复实验。）。样品OD值V临界值者为HIV抗体阴性。（4）、正常情况下，阳性对照孔的OD值》0.8（若1孔阳性对照的OD值V0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值V0.8,应重复实验。样品OD值目临界值者为HIV抗体阳性。十八、检验结果的解释HIV抗体检测的结果有三种，分别是阳性、阴性和不确定，绝大多数情况下都是阳性或阴性，出现不确定结果的情况很少。（一）、阳性结果的解释1、表明一个人感染了HIV，具有传播性当一个人HIV抗体检测结果为阳性，表明这个人已经感染了HIV，具有把HIV传播给别人的可能。2、不能判断发病与否，不能判断疾病的进展。 HIV抗体检测结果只能说明一个人是否感染了HIV，阳性结果并非就意味着一个人已经得了艾滋病，也不能说明患者处于疾病发展的哪个阶段。若要判断疾病的进展，则要做另外的实验检测CD4细胞记数和HIV病毒载量检查。3、对于刚出生的婴儿，情况则不一样刚出生的婴儿，不能根据其 HIV抗体检测呈阳性反应而判断该婴儿感染了 HIV。因为出生半年以内的婴儿，其抗体主要是由该婴儿从其母体获得，不管他（她）感染HIV与否，只要其母亲感染了HIV,母体内存在HIV抗体，婴儿出生后HIV抗体检测-般都是阳性。如果要判断一个婴儿是否感染HIV,则应该等到一岁半（18个月）以后再做检测，检测结果阳性时才能说明该婴儿感染了 HIV。（二八阴性结果的解释1、检测者处于窗口期HIV从感染到能够检测出来有一段时期，这段时期称为窗口期，窗口期一般是2周到2个月。拿到一个阴性结果，首先要确定窗口期是否已过，如果确定最后-次危险行为距抽血作检测时已过窗口期，这时基本可以确定检3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第27页共70页测者未感染HIV。如果窗口期末过或者抽血化验之后又发生了危险行为（如又共用针具或未采取保护措施的性行为），同样也不能确定抽血者没有感染HIV。2、检测者未感染HIV如果检测结果阴性，最后-次危险行为又过了窗口期，那可以判定检测未感染HIV。（三）、不确定结果结果不能确定是指住进行HIV抗体检测的确认试验时，检测结果不是阴性，又够阳性标准，界乎于阳性与阴性之间的一种结果。出现不确定结果一般建议过三个月后再复查，出现不确定结果一般有以下几种原因：1感染处于窗口期，从HIV进人体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应。2、 艾滋病进展到终末期，抗体水平下降。3、 有其它原因：如某些恶性疾病，怀孕，输血或器官移植等情况，身体会产生一些抗体，其反应与HIV的某些蛋白抗体所引起的反应相似。十九、检测数据的记录与保存1、实验原始记录表应按实验要求，设计操作的原始记录表，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。要注明试剂盒厂家、测定方法、批号、效期、操作人员和复核人员姓名及检测日期。2、 标本的登记收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或代号、试管编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注（必要时记录通信地址）等。3、 HIV阳性标本的保存记录包括HIV阳性标本的类型、贮存量、贮存温度、贮存起始时间以及标本保管人姓名。4、文件存档

3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第28页共70页实验原始记录表、打印数据、检测记录表、标本登记、标本保存记录以及

仪器设备维修和校准记录等都应该妥善存档保存 15年以上。并同时使用计算机保存各种文件和记录。二十、呈阳性反应标本的处理程序1、 对HIV抗体初筛试验，呈阴性反应的样品可出具 “HIV抗体阴性”报告（可用附表1）;对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告 “HIV抗体筛查报告”（见附表1）阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，贝U应按照《全国HIV检测管理规范》的要求送艾滋病确认实验室进行确证试验 。对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告（附表1）。2、 初筛试验呈阳性反应样品，需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV抗体复测送检单”（附表2），经实验室负责人和1名专业检验人员审核签字。送县疾病控制中心艾滋病筛查中心实验室，或在本实验室复检后直接送安阳市艾滋病确认实验室。3、 初筛试验呈阳性反应样品，进一步送检、本室冰冻保存后不在需要的样品的处置应符合《实验室生物安全通用要求》 （GB19489-2004）和《消毒技术规范（2002年版）》。4、 从HIV实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。5、 所有废弃物应按照HIV污染物品处理。由专人按本实验室制定的程序和方法进行清洁和消毒。6严格HIV实验室的废弃物的消毒处理制度，做好登记。7、检验科主任定期负责检查，操作处理不当的按照科室有关规定处罚。卜一、检测数据季报方案和程序

卜一、检测数据季报方案和程序3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第29页共70页1、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点应于每季度首月 5日前填写“HIV抗体检测数季报表”（附表6）,向艾滋病筛查中心实验室报告上季度检测情况。没有艾滋病筛查中心实验室的地区可直接向艾滋病确认中心实验室报告。艾滋病筛查实验室艾滋病每季首月5日前报季月J£/J1级-卫生」艾滋病确认中心实牛

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省卫生彳亍艾滋病中国CDC生图2HIV抗体检测情况季报流程3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第30页共70页2、 艾滋病筛查中心实验室应于每季度首月10日前将本实验室和本辖区内各筛查实验室上季度报告的检测情况（附表6）汇总，报告艾滋病确认中心实验室。3、 艾滋病确认实验室应于每季度首月10日前将上季度检测情况汇总后（附表6），报告当地艾滋病确认中心实验室和同级卫生行政部门。4、艾滋病确认中心实验室应及时收集、整理和分析辖区内 HIV抗体检测情况，于每季首月15日前向省级卫生行政部门和中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心（简称中国疾控中心性艾中心）参比实验室报告。同时，按艾滋病疫情报告的有关规定上报疫情。5、 在非送检样品中（如专项调查与研究等）发现的艾滋病病毒抗体阳性者，应向所在地的省疾病预防控制中心报告，并填写“HIV抗体确认检测报告单”（附表3），报中国疾控中心性艾中心参比实验室。&实验室上报检测结果的同时，应随时报同级监测人员，以便及时随访调查。二十二、感染追踪处理方案（一）、追踪人群1、 有明确受血或血液制品史，并排除性传播、母婴传播、经国家确证实验室确认的艾滋病病毒抗体阳性者；2、 无偿献血工作中发现的艾滋病病毒抗体阳性献血人员。（二八工作步骤1、 对供血或受血的追访，须以健康跟踪服务或科研的名义进行，系统体检并采血预备有关的检验。2、 对发现的受血艾滋病病毒感染者制定详细的个人追踪方案，确定追踪人员，应有一名近期参与治疗的医生参加。3、 对供血者追踪，由卫生防疫机构会同采供血机构的专业技术人员进行。（三八善后处理：对受血的艾滋病病毒感染者由县卫生防疫机构制定专人建立健康档案， 实施预防监护、医疗照顾和管理。并定期进行随访和医疗保健咨询服务。特别必要时应告知受血感染者有关真实情况。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第31页共70页（四）、对HIV抗体阴性者，如近期有高危行为如性乱史、吸毒史、受血史、献血浆史，或有急性流感症状等情况，为排除窗口期的可能，建议每3个月复查一次，连续2次。二十三、保密程序制度1、 HIV检测实验室的所有工作人员要具有高度的保密意识。不得对无关人员透漏任何实验室内部的信息。2、 HIV检测实验室要有专人负责妥善保存与HIV/AIDS相关检测项目的所有资料（包括送检单、各种实验记录、感染者档案、报告单的发放） ，不得擅自修改和销毁。未经省级卫生行政部门许可，不得向无关人员或单位提供任何情况。严格遵守保密制度，杜绝泄密事件的发生。2、 我院HIV实验室属于筛查实验室，检测的结果也不是最终结果，检测到阳性结果应及时启动应急预案，根据WHO提出的三级包装系统送到上级实验室作进一步确认。此时，不能出具HIV抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本人。3、 确认实验室确认阳性结果，以机密级向送检单位出具阳性报告；送检单位接到报告后，由专人负责接收，并应及时会同医院感染科上报县卫生防疫站和卫生局。在对阳性者告知检测结果时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。4、经确认的阳性标本，包括在实验室留存的标本，应送省级 HIV抗体确认中心或省级卫生行政部门指定的单位保存，不得擅自处理。标本保存时间至少5年。5、 当发生职业暴露事故后，无论职业暴露事故级别的大小，对涉及的职业暴露者，均应注意做好保密工作。任何一个得到信息的人都要做好保密工作。保密守则：1、不该说的机密绝对不说；2、 不该问的机密绝对不问；3、 不该看的机密绝对不看；4、 不该记录的机密绝对不记录；3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第32页共70页5、不在非保密本上记录机密；6不在私人通信中涉及机密；7、 不在公共场所和家属、子女、亲友面前谈论机密；8、 不在不利于保密的地方存放机密文件资料；9、 不在普通电话、明码电话、普通邮件传达机密事项；10、不携带机密材料游览、参观、探亲、访友和出入公共场所。二十四、质量管理制度1、根据省临检中心的有关规定，开展实验室室内的质量控制，绘制 HIV实验室室内质量控制图，包括20次OD值、S靶值、CV%值。对室內质控应每日有记录，有每月的S、靶值、CV%值。对失控情况有纠正方法，有预防性措施。2、 积极参加省临检中心组织的室间质控活动，对每次质控评价应有记录。3、 计量仪器应定期校正，每年一次。4、 精密分析仪器由专人负责，有使用记录和维修记录。5、 商品化的试剂盒的申购由专业组长负责申报，每月一次报科主任审批，不得使用过期，无批准文号的劣质试剂，进货统一由科室管理，自配试剂须严格校正后方可使用。6建立完整的HIV筛查实验室标准化操作程序，并应严格按程序执行。7、 当日发出的全部检验报告单须经当日科室总值班人员严格审核后方可发出。8、 科室在完成严格的室内、室间质量控制体系的同时，应逐步建立全面质量控制体系，对标本的采集，运送，保存等纳入严格的管理之中。二十五、室内质控失控分析管理制度室内质控出现失控时，应填写失控报告单，并上交专业主管，由专业主管做出是否发出与测定质控品相关的那批患者标本检验报告并分析及登记失控原因。失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误、试剂、校3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第33页共70页准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、质控限范围、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批患者标本报告可能作废。此时，首先要尽量查明导致的原因，然后再随机挑选出一定比例（例如5-10%）的患者标本进行重新测定，最后根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。当得到失控信号时，可以采用如下步骤去寻找原因：一、 立即重测定同一质控品。此步是主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细操作，以查明质控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应控。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操作。二、 新开一瓶质控品，重测失控项目。如果质控品结果正常，那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质或者被污染。 如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。三、 进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换，对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。四、 重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。五、 请实际工作经验丰富的工作人员或专家的帮助。如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求技术支援。二十六、外部质控血清的制备和保存1、质控血清的制备和保存（以ELISA试验检测HIV抗体为例）在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第34页共70页（1） 、内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。（2） 、外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值（ Cut-off、的2〜3倍为宜。2、 外部对照质控血清的制备HIV抗体阳性和阴性血清，56C30min灭活，3000r/min，离心15min。弱阳性对照可以用HIV抗体阴性血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并标定后得到。按一年使用量配制（可加入不影响检测结果的防腐剂、用 0.2ym滤膜过滤除菌。3、 外部对照质控血清的保存（1） 、按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20C冻存于非自动除霜冰箱中。（2）、外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放 28°C，供一周内使用。4、 外部对照质控血清的使用每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。5、 外部对照质控物的质量要求质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异（CVV20%二，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响 ELISA反应的防腐剂。二十七、仪器的使用维护（一）、设立常用仪器的维护及校准制度，以保证正常运转。1、酶标读数仪、洗板机每天：核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。每周：清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第35页共70页每月：检查洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求。每年：检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点则要更换。根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，可根据使用情况更换必要的部件。2、移液器1年至少应该标定1次，发现异常情况应随时进行校准。标定方法包括有色溶液光谱分析法、称量校准法、同位素计数法以及使用配套校准盒等。校准多道移液器时，必须保证每一个加样头都能够连续、准确地加样。移液器的精密度应在厂家说明书规定的范围内。（二八仪器使用环境良好的工作环境不仅能确保HIV筛查实验室的酶标仪、洗板机等仪器的准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。1、 仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。2、 仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。3、 为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。4、 操作环境温度应在15°C-40°C之间，环境湿度在15%-85%之间。5、 操作时电压应保持稳定。6操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。7、保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。（三）、仪器操作注意事项1、 使用移液器加液，移液枪头不能混用2、 洗板要干净，避免交叉污染。3、 严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。4、 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。5、 不要在测量过程中关闭电源。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第36页共70页6对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。7、使用后盖好防尘罩。出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪、洗板机等仪器。人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）试剂厂家：英科新创（厦门）科技有限公司本试剂盒采用抗原夹心两步法检测人血清或血浆中的 HIV1/HIV2型抗体。在微孔板预包被基因重组HIV（1+2）抗原，当加入的待检测样本中存在HIV抗体时，将反应形成抗原抗体复合物，再与加入的酶标记基因工程 HIV（1+2）抗原反应，最后形成固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫，复合物，加入底物后形成显色反应。标本要求；1采用血清或血浆样本，血浆样本可以使用常规用量的肝素，枸橼酸钠或者EDTA抗凝。2样本不能用叠氮钠防腐，以免抑制酶的活性。3样本保存在2-8C。如需长期保存，需置-15-20C冻存，并避免样本反复冻融。4高血脂，高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。检验方法：1.平衡：将试剂合各组分从盒中取出，平衡至室温（ 18-25C）,微孔板开圭寸后，余者即时以自圭寸袋圭寸存。2配液：浓缩洗涤液配前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。加样：按顺序分别在相应孔中加入50ul待测样本及阴.阳性对照。温育：覆上封板膜，置37T温育60分钟。洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。加酶：分别在每孔中加酶标抗原30分钟。温育：覆上封板膜，置37T温育30分钟。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第37页共70页洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。显色：每孔加底物A，B和50ul,轻拍混匀，37C暗置30分钟。11终止：每孔加入终止液50ul,混匀。12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照孔调零），并记录结果。结果判定；1•样本OD值S/CO三1者为HIV抗体反应初筛阳性样本OD值＜1者，为HIV抗体反应阴性。2.阴性对照OD均值＞0.1或阳性对照OD均值w0.6寸，实验无效，应重新试验。初筛阳性者应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按照 全国HIV检测管理规范”送HIV确认实验室进行相关确认试验。参考值：临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照OD均值+0.10阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算程序HIV-抗体初筛试验标准操作（酶联免疫法）试剂厂家：北京万泰生物药业有限公司本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被高纯度重组HIV（1+2型）抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂等其它试剂，检测人血清或血浆中的HIV-1（或）HIV-2型抗体。检验方法：配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型,2型各1孑L,空白对照1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性对照 100ul.温育：用封板膜封板后，置37温育60±分钟。洗板：小心揭掉圭寸板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。3河南省鹤壁市中医院检验科HIV筛查实验室SOP文件责任部门检验科文件编号201405版次/页码第1版第3次修改 第38页共70页加酶：每孔加入酶标试剂100ul，空白孔除外。温育：用封板膜封板后，置37温育30±分钟。8洗板：操作同步骤5.9.显色：每孔加入显色剂A,B液各50ul,轻轻振荡混匀，37±C避光显色30±1分钟。10•测定：每孔加终止液50ul,轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm/600-650nm）,用空白孔调零后测定各孔A值。检验结果的解释：阴性对照孔A值w0.10阳性对照孔A值》0.80否则实验无效。若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃；若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，实验无效。阴性判定：样品A值V临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。阳性判定：样品A值目临界值（CUTFF）者为HIV抗体阳性（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行