生化试剂的基础知识

..生化试剂的根本知识一、生化试剂的分类2(一)按照化学性质分类2(二)按照临床应用分类2二、反响速度特性2(一)终点法试剂2(二)动力学法试剂3三、显色原理3(一)NAD-NADH和NADP-NADPH系统3(二)p-NP和p-NA系统3(三)H2O2偶联的指示系统3(四)抗原抗体反响指示系统3(五)其它显色反响3四、性能评价方法3(一)主要性能指标：3(二)性能评价方法3生化试剂的分类按照化学性质分类酶类：包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE等。底物/代产物类：包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。无机离子类：包括Ca,P,Mg,Cl等。特种蛋白类：包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子)，IgG,IgA,IgM等。按照临床应用分类无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。肾功能：UA，UREA，Cr等。心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。糖尿病：GLU等。前列腺疾病：ACP，p-ACP等。胰腺炎：α-AMY。血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。痛风：UA。有机磷中毒：ChE。免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM，Kappa链，Lambda链。反响速度特性按照反响速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。终点法试剂终点法，指经过一段时间(一般为几分钟)的反响，反响进展到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。如图〔1〕。整个反响到达平衡，由于正向反响的平衡常数很大，可认为所有的被测定物已转变为产物，反响液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比。终点法对反响条件(如酶量、pH、温度)小的改变不敏感，只要这种改变不影响在一定时间反响到达平衡即可，是最理想的反响模型。图〔1〕属于终点法的试剂主要有：TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，Cr〔氧化酶法〕，NH4+，CO2，Ca，P，Mg，Cl，apoA1，apoB，Lp(a)，C3，C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM等。动力学法试剂零级动力学法零级动力学法，指反响过程中反响速度维持不变，到达最大，与底物浓度无关，因此，在整个反响过程中，反响物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度〔△A/min〕与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。如图〔2〕。实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反响的进展，底物消耗到一定程度后，反响速度不再维持不变，同样从启动反响到到达最大速度需要一定时间。因此，零级动力学法是针对特定时间而言的，各试剂商对这段时间有严格规定。图〔2〕属于零级动力学法的试剂主要有：ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，α-HBDH，LDH，CK，CK-MB,α-AMY，MSO，ADA，ChE，TBA等。一级动力学法在一定的反响时间，反响速度与底物浓度的一次方成正比，由于底物在不断的消耗，因此整个反响的速度在不断的减少，表现为吸光度的增加〔或降低〕速度越来越小，这类反响到达平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进展监测，但由于血清成份复杂，反响刚启动时反响较复杂，杂反响较多，经过一段延迟时间才能进入稳定反响期，必需在特定时间段进展监测，各试剂商对这段时间有严格规定。如图〔3〕。在一固定时间间隔中，底物浓度的变化量正比于底物的初浓度，这是一级反响的同性。该段时间吸光度的增加或降低与被测物的浓度成正比。图〔3〕属于一级动力学法的试剂主要有：Cr〔苦味酸法〕，UREA〔紫外监测法〕显色原理显色系统主要有以下几种：NAD-NADH和NADP-NADPH系统p-NP和p-NA系统H2O2偶联的指示系统抗原抗体反响指示系统其它显色反响NAD-NADH和NADP-NADPH系统NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm无特征性吸收峰，利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反响，根据340nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。作为该指示系统常用的工具酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH目前利用此指示系统进展测定的临床工程有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、α-HBDH、Glu、UREA、NH4+、CO2等。p-NP和p-NA系统p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度的变化，可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进展测定的临床工程有ALP、ACP、r-GT、AMY等。H2O2偶联的指示系统H2O2在过氧化物酶的作用下，可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素，导致某一波长吸光度的增加，因此可用来测定物质的浓度或活性用于此指示系统的单一色素原有TMB、ABTS等；成对色素原有酚和4AA、MBTH和DMA等。目前利用此指示系统进展测定的临床工程有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。抗原抗体反响指示系统特异性抗体与抗原(待测物质)在相应的缓冲环境下反响生成抗原抗体复合物，形成一定的浊度，导致特定波长透光率的改变。在抗体过剩的前提下，改变程度与抗原浓度成正比。目前利用此指示系统进展测定的临床工程有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等。其它显色反响蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，在一定浓度围颜色反响强度与蛋白质的浓度成正比。用于TP的测定。溴甲酚绿(BCG)在非离子去污剂Brij－35的存在下，可与白蛋白形成严密结合的绿色复合物。用于Alb的测定。重氮苯磺酸盐与胆红素生成红紫色偶氮胆红素。用于总胆红素和直接胆红素的测定。甲基麝香草酚兰(MTB)在碱性条件下可与Ca、Mg形成有色络合物。用于Ca、Mg的测定。性能评价方法主要性能指标：稳定性：指在规定条件下经过一段时间的保存，仍能到达相应的性能指标，如试剂空白吸光度、线性围、灵敏度等。反响灵敏度：指单位浓度(或活性)的测定物反响所产生的反响度，反响度越高，灵敏度越大。精细度：结果间相互符合的一致程度准确度：与参考测定程序结果的一致性线性围：在规定的重复性和线性偏差下，测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的围。基质效应：基质指的是样品中被分析物以外的组分。基质常常对分析物的分析过程有显著的干扰，并影响分析结果的准确性。例如，溶液的离子强度会对分析物活度系数有影响，这些影响和干扰被称为基质效应〔matrixeffect〕。抗干扰性：其它：试剂/样本比例、反响时间、