复合酶解法提取克氏原螯虾中的多肽

复合酶解法提取克氏原螯虾中的多肽

一、微量元素的需求克氏原虾通常被称为小龙虾，其肉质细腻。它是一种含有蛋白质、低脂肪和低胆固醇的食品，深受人们喜爱，需求量很大。锌是动物体必须的微量元素之一,含量仅次于铁,人体大约有200种酶与锌有关。锌与DNA、RNA及蛋白质的合成有密切的关系,被称“生命的火花”,又称抗衰老素近代研究表明多肽与游离氨基酸相比具有吸收率高,耗能少且转与载体不易饱和的特点,且多肽与金属离子螯合有利于提高金属矿物质的生物学效价二、材料和方法2.1试剂的选择克氏原螯虾副产物(江西海浩鄱阳湖水产有限公司),木瓜蛋白酶(Papain,80万u/g南京庞博生物工程有限公司),风味蛋白酶(80万u/g,诺维信(中国)有限公司),盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、硫酸钾、硼酸、三氯乙酸、氯化铵、氨水、Na2EDTA、双硫腙、碳酸钙、硫酸锌、硫酸、无水碳酸钠等试剂均为分析纯。电子天平(FA1004,上海舜宇恒洋科学仪器有限公司),高速组织捣碎机(JJ-2,海标本模型厂),超级恒温水浴锅(HH–60,江苏省金怀师荣华仪器制造有限公司),超声清洗机(KQ-250DE,昆山市超声仪器有限公司),离心机(TDL-5A,上海费洽尔分析仪器有限公司),电热鼓风干燥箱(UT-12,上海三发科学仪器有限公司),pH计(ST2100,奥豪斯仪器(常州)有限公司),紫外可见光分光光度计(8453,AgiLent科技有限公司),红外光谱仪(Spectrumtwo,PerkinElmer股份有限公司等)。2.2实验方法2.2.1原材料预处理将虾壳副产物在电热鼓风干燥箱中50oC烘干,粉碎机粉碎,密封保存于干燥环境中以备用。2.2.2虾壳蛋白含量使用半微量凯氏定氮法测定其中:X—虾壳中蛋白含量,gVVC—HcL标准溶液的当量浓度m—虾壳质量,gF—氮与蛋白质换算系数,6.25。2.2.3果汁中果汁蛋白质添加量的确定称取100g虾壳粉,按料液比1:10加入水搅拌溶解后调节pH为6.5,将木瓜蛋白酶与风味蛋白酶按1:1.5混合加入,加酶量为1.0%,在50℃级恒温水浴锅中水浴搅拌酶解3h13]。取出沸水浴灭酶15min,冷却离心(5000r/min,10min)得上清液,旋转蒸发定容。2.2.4分辨率测量原料中蛋白质含量前文已测出,提取液中蛋白含量使用甲醛滴定法2.2.5山羊中氨基酸的测定氨基酸自动分析仪法2.2.6多酚硫合金处理2.2.7不同条件下对虾壳苷棕榈酸产量的影响采用单因素实验研究时间、温度、pH、物料比对螯合锌的产率影响,设计正交试验进行螯合工艺优化,单因素实验设计如表1。2.2.8紫外光谱的测定采用紫外分光光度计扫描仪对虾壳肽溶液及虾壳肽螯合锌溶液进行扫描,扫描范围190nm-1100nm。2.2.9红外光谱法采用KBr压片法。三、结果与分析3.1氨基酸氨基酸丰富由表2可看出,利用自动分析仪共检测出17种氨基酸,总氨基酸含量为4.897%,其中有7种是人体必需氨基酸,占总量的47.4%,非必需氨基酸占52.6%,呈味氨基酸占40.9%,氨基酸丰富。制成的虾壳多肽粉末成品有特有的香味,具有发展成为调香或调味的食品添加剂潜力。3.2优化了虾壳中醚提取和锌提取的工艺3.2.1不同温度对多肽螯合锌产率的影响在pH=6.5,肽锌物料比5:1下反应70min如图2所示,在60℃到80℃间随着温度的增加,多肽螯合锌的产率逐渐增加,当温度达到75℃后产率增加量基本不变。3.2.2温度70下反应在pH=6.5,肽锌物料比5:1,温度70℃下反应。如图3,可以看出时间对多肽螯合锌产率影响较小,当反应时间在40min时螯合锌的产率最大。3.2.3ph对多肽螯合锌产率的影响在肽锌物料比5:1,温度70℃下反应70min。如图4所示,可以看出pH对多肽螯合锌产率影响较大,在pH=5.5的时候产率最大,pH大于或小于5.5,产率都不高。当反应体系pH太低时,H3.2.4最佳材料选择苯乙烯在温度70oC,pH=6.5条件下反应70min,如图5所示,随着虾壳多肽与ZnSO3.2.5实验因素的确定通过单因素实验确定虾壳多肽螯合锌的最佳工艺条件:螯合温度80℃,螯合时间40min,螯合pH为5.5,物料比为7:1,在此基础上选择螯合温度、时间、pH、物料比为实验因素,设计L采用极差分析法对结果进行分析,极差越大则表示该因素对实验结果的影响越大。由表3可看出各因素对螯合锌产率的影响大小为:C>D>A>B,其中pH对螯合锌的产率影响最大,其次是物料比和反应温度,影响最小的是反应时间。由此得出螯合锌的最佳反应工艺条件为:A3.2.6多肽溶液加入量通过对比虾壳多肽(图6)与多肽螯合锌(图7)发现,多肽溶液在250nm-280nm范围内有较强的吸收峰,加入ZnSO3.2.7ir谱图分析用KBr压片法测得多肽和多肽螯合锌的IR谱图如图8所示。3385cm从多肽螯合锌与多肽IR图谱对比发现,螯合锌在1060cm综