硝苯地平缓释片人体药动学和生物等效性研究

硝苯地平缓释片人体药动学和生物等效性研究

硝基苯丙烯酸酯（nifidipa）是一种二羟吡啶类钙抗剂。它是继激素受体阻滞剂之后的一种重要心血管药物。2007年发表的国内心血管药物利用调查中,硝苯地平为临床选择频率最高品种之一药品与试剂受试制剂:硝苯地平缓释片(安徽永生堂药业有限责任公司,规格:每片10mg,批号:050606);参比制剂:硝苯地平缓释片(南京白敬宇制药有限责任公司,规格:每片10mg,批号:050402);硝苯地平对照品(中国药品生物制品检定所,含量98.1%,批号:100338-200502);内标:尼莫地平(芮城县帕尔玛化工中间体有限公司提供,含量99.8%,批号:20050817)。甲醇(色谱纯,Merck公司);甲酸(色谱纯,TEDIA公司);水为超纯水,自制。仪器美国Thermo公司FinniganTSQQuantumDiscoveryMAX型LC-MS/MS联用仪,ESI离子源,Xcalibur1.4数据处理系统;XW-80A微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂);XS105分析天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);TGL-16H平衡离心机(珠海黑马医学仪器有限公司);DZG-303A纯水机(台湾艾柯仪器厂)。色谱条件色谱柱:PhenomenexLunaC质谱条件离子源为ESI源;喷雾电压4.8kV;毛细管温度:260℃;源内碰撞电压:12V。正离子方式检测,扫描方式为选择反应监测(SRM),用于定量的离子分别为硝苯地平m/z374.1→m/z254.0;内标尼莫地平m/z419.0→m/z343.0,扫描时间为0.5s。血浆样品处理精密量取血浆100μL于1.5mL空白离心管中,加入10μL尼莫地平内标溶液(25μg·L标准溶液配制硝苯地平标准溶液的配制:精密称取2.04mg的硝苯地平对照品于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,即配制成200mg·L尼莫地平内标溶液的配制:精密称取尼莫地平2.51mg于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,即配制成250mg·L标准曲线和线性范围精密量取不同浓度的硝苯地平标准溶液各10μL于空白离心管中,加入空白血浆100μL配成血浆中药物浓度分别为:0.78,1.56,3.12,6.25,12.5,25,50,100,200μg·L血浆硝苯地平稳定性试验配制硝苯地平浓度分别为1.5、15和150μg·L研究对象40例男性健康受试者,其中单次给药20例受试者年龄(23.2±s1.1)岁,体重(65±4)kg。多次给药20例受试者年龄(23.5±1.4)岁,体重(65±3)kg。受试者均无药物过敏史;无烟酒嗜好。全面体格检查均正常(其中包括肺部听诊、肝脾触诊、心电图、心率、血压、肾功能、肝功能、血常规及尿常规等),试验前2wk和试验期间禁服其他任何药物,并禁烟酒。所有受试者均被告知试验过程及与相关的不良反应,签署知情同意书。试验方案经兰州大学第一医院伦理委员会批准。试验设计双周期随机交叉试验设计,40例受试者由DAS2.0软件产生随机分组表。每位受试者按照随机分组表在不同试验周期中服用受试制剂或参比制剂。给药剂量20mg。服药方法及血样采集单次给药:每位受试者每次口服受试制剂或参比制剂20mg,用温开水200mL送服,服药后4h统一进清淡饮食。2次试验间隔时间为1wk。在服药前(0h)和服药后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、15、24、36h从静脉采血4mL,肝素抗凝,取血浆于-40℃冰箱储存。整个采血过程避光。多次给药:受试者每次口服受试制剂或参比制剂20mg,每日2次(700和19∶00),用温开水200mL送服,连续给药6d,服药d4、5、6于每次清晨服药前采集血样4mL,d6服药后采血,采血点同单次给药服药。2次试验间隔时间为1wk。数据处理利用DAS2.0计算药动学参数和进行统计分析。t结果1质谱分析及质谱图硝苯地平与内标尼莫地平在ESI离子化方式下,主要生成[M+H]2方法专属性在上述色谱条件下,空白血浆样品、空白血浆加入内标和对照品、受试者口服受试制剂2h后的血浆样品色谱图见图2。硝苯地平保留时间为3.32min,内标尼莫地平的保留时间为4.48min;结果表明,血浆中内源性物质不干扰硝苯地平和内标的测定。3线性范围血浆中硝苯地平浓度测定的线性范围为0.78～200μg·L5基质效应测定经提取的空白基质中添加低、中、高浓度(1.5,15,150μg·L6稳定性硝苯地平血浆样品在室温条件下至少能稳定12h,在-20℃冰冻条件下至少能稳定10d,反复冻融3次并不影响血药浓度,RSD均﹤10%。单剂量给药的药动学参数及生物等效性评价20例受试者单次口服硝苯地平受试制剂和参比制剂20mg后平均血药浓度-时间曲线,见图3。试验数据采用DAS2.0进行统计分析,主要药动学参数见表2。结果表明,单剂量2个制剂具有生物等效性。多剂量给药的药动学参数及生物等效性评价连续6d口服受试制剂和参比制剂进行多剂量稳态试验,其中d4～d6服药前(0h)受试制剂的谷浓度分别为(16±9)、(19±9)和(19±10)μg·L安全性评价40例受试者2次服药如期完成,服药后均未见不良事件的发生。讨论有关血浆中硝苯地平的测定方法