过敏原检测方法方案

过敏性疾病与临床检测

河南省人民医院呼吸科王思勤2023年9月7日第1页2023/10/10Nameofpresentation2临床常见过敏性疾病有过敏性鼻炎、哮喘、荨麻疹、湿疹、食物过敏及过敏性休克等。近年来，过敏性疾病发病率呈上升趋势，国内医学界对这种疾病日益重视，其试验室诊断也得到充足发展。第2页过敏性疾病研究历史20世纪人们用动物抗血清治疗烈性传染病时发觉“血清病”1923年奥地利医生ClemensvonPirquet刊登“Allersie”(变态反应)一文，开拓了变态反应临床和试验研究新领域1963年Gell及Coombs根据变态反应病机理和特点，将其分为四型1966年石坂夫妇发觉了速发型变态反应中IgE抗体1967年Johansson从骨髓瘤病人中分离到纯化IgE并进行了其分子构造研究第3页第4页一般过敏性疾病是由IgE介导I型变态反应所包括疾病也有例外，例如某些药品（如多粘菌素、吗啡、某些造影剂或阿斯匹林）引发过敏性休克。IgE第5页Ⅰ型变态反应特点是反应迅速、强烈、消退亦快，一般不遗留组织损伤，也称为速发型超敏反应有显著个体差异及时令性。好发于呼吸、消化、皮肤等系统。特性性病理变化以水肿，分泌物增多，平滑肌痉挛，嗜酸细胞增多为主第6页过敏性疾病触发原因

----过敏原（变应原）第7页过敏性疾病常见过敏原包括：药品（如引发过敏性休克青霉素类、多粘菌素、吗啡、某些造影剂或阿斯匹林）粉尘螨、真菌（如曲霉属和青霉属霉菌、以及交链孢霉和枝孢霉等）花粉（包括蒿属、豚草、树、牧草和杂草花粉）、其他吸入过敏原（如引发哮喘蚕丝、皮毛、羽毛、屋尘）食物（如引发食物过敏牛奶、鸡蛋、花生、豆类、坚果、鱼、虾、肉类、贝类和谷物）化工材料（如造成接触性皮炎油漆、甲醛、乳胶、香料和染料等）第8页过敏性疾病临床诊断临床症状、病史体检及临床试验试验室检查第9页父母双方都有变态反应病者，或父母一方有变态反应者，子代患变态反应机率较高父母双方均无变态反应病者，子代发病机率少，一旦发病，临床体现较轻，连续时间较短过敏发生与后天环境关系同样非常密切，变态反应临床体现并不一定符合遗传规律。过敏体质是造成变态反应内因第10页过敏进程食物过敏和特应性皮炎在出生早期发病率较高，而呼吸道过敏性疾病在小朋友期发病率较高。伴伴随小朋友年纪增加，过敏性疾病体现会发生阶段性变化，各系统次序出现不一样过敏症状，此现象被称为“过敏进程”第11页过敏性疾病临床症状以一种典型次序

出目前小朋友期，并连续数年自然进程过敏进程EugeneGWeinberg,MBChB.Theallergicmarch.CME2023;28(2).第12页ProgressionoftheallergicmarchEugeneGWeinberg,MBChB.Theallergicmarch.CME2023;28(2).第13页明确过敏原，制止过敏进程EugeneGWeinberg,MBChB.Theallergicmarch.CME2023;28(2).小朋友早期，明确过敏原，进而躲避过敏原，可制止过敏进程，改善患儿生活质量第14页特应性变应原及也许诱因回避是治疗基本标准如何明确过敏性疾病过敏原？第15页过敏性疾病诊断详细病史体检及临床试验第16页家族过敏史既往过敏史既往发生过敏时临床体现季节和室内/外变化疑似过敏原种类、接触频率、接触量、接触时间生活环境、工作环境、精神压力影响其他原因问询病史第17页 体内试验贴斑试验（patchtest）点刺试验（pricktest）或挑刺试验（puncturetest）皮内试验（intradermaltest或intracutaneoustest）眼结膜试验（conjunctivatest）鼻粘膜激发试验（nasalmucosaprovocationtest）或抗原鼻内滴入试验（灌输测试）第18页舌下试验（sublingualtest）G.Pfeiffer数十年始终用此法进行诊断食物激发试验（foodprovocationtest），亦称为白细胞减少指数试验第19页其他检查影像学诊断：包括胸部透视和摄片、支气管造影、鼻窦X线照相、胃肠造影、B超、CT、核磁共振等。治疗性诊断：某些病例经多种检查仍无法确认时，可使用对变态反应有良效药品（如肾上腺素、

2受体兴奋剂、抗组织胺类药品及肾上腺皮质激素类药品等），进行试探性治疗。第20页特异性IgE测定有时也称为“过敏原测定”特异性IgE检测主要是酶免疫分析根据标识酶批示底物不一样分为：

荧光酶免疫分析（如ImmunoCAP）、

发光酶免疫分析（如Immulite和Access）

酶联免疫吸附剂测定（ELISA）。第21页体内试验和体外试验比较第22页皮肤试验成果解释假如病史提醒敏感性尚有皮肤试验成果阳性然后与抗原有关也许性极强假如病史不提醒敏感性皮肤试验成果阳性在高强度自然暴露中观测患者病史提醒敏感性皮肤试验成果阴性1回忆患者用药情况，抗组胺、抑郁药

2回忆其他引发假阴性试验原因如：劣质试验材料和技术不恰当

3在高强度自然暴露中观测患者4进行激发试验（很少做）

帕特深变态反应性疾病人民卫生出版社2023第23页sIgE体外检测和皮试比较不受患者皮肤条件影响不受患者药品治疗影响不受操作者技术影响符合WHO标准第24页ImmunoCAP

全自动

、体外过敏原特异性IgE检测、全定量血液测定检测原理：

荧光酶联免疫分析法

FEIA荧光酶底物比显色底物敏捷度高10-1000倍。第25页ImmunoCAP固相载体抗原吸附能力是纸片法3倍；是试管法150倍。第26页ImmunoCAPTM全面检测项目总IgE

特异性IgE嗜酸性粒细胞阳离子蛋白ECP（评定气道炎症状态）IgG&IgG4（评价特异性免疫治疗反应）类胰蛋白酶（严重过敏反应标识物）本身免疫性疾病诊断

过筛试验单价S-IgE检测多价S-IgE检测组分过敏原诊断第27页总IgE（TotalIgE)IgE是介导I型变态反应抗体，血清IgE水平升高提醒机体也许患有变态反应性疾病。不过，总IgE不一定是过敏，过敏者总IgE也不一定高，过敏是否主要取决于sIgE存在。影响总IgE原因遗传、年纪、性别、种族吸烟、寄生虫感染测定患者血清中总IgE抗体含量第28页特异性IgE（SpecificIgE,SIgE）假如对某种过敏原过敏，血清中便存在针对该过敏原S-IgE。

单价S-IgE检测多价S-IgE检测过筛试验

常见单价S-IgEd1户尘螨

d2粉尘螨

i6蟑螂

f1鸡蛋白

f2牛奶常见多价S-IgE

mx1（m1,m2,m3,m6）

mx2（m1,m2,m3,m5,m6,m8）hx2（h2,d1,d2,i6）

过筛试验吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop）食物过敏原过筛试验（Fx5）小朋友吸入性过敏原过筛试验（PhadiatopInfant）第29页草类花粉：

w6（艾蒿）w22（葎草）树木花粉：t11（梧桐）螨类：d1（屋尘螨）d2（粉尘螨）微生物：m6（交链孢霉）动物皮毛：e1（猫毛皮屑）食物：f1（蛋白）f2（牛奶）屋尘：h1昆虫/毒液：i6（蟑螂）药品：c1（青霉素G）职业性过敏原等：k82（乳胶）超出600种过敏原和80种以上组分过敏原第30页特异性IgE（sIgE）成果判断检测范围：0.35－100kUA/l高敏捷度：89%

高特异性：91%

定量成果分级标准及临床意义：0级<0.35未检出变应原，无过敏1级 ≥0.35可疑或轻度过敏2级 ≥0.7 中度过敏3级 ≥3.5重度过敏4级 ≥17.5特重度过敏5级 ≥50 特重度过敏6级 >100 尤其严重之过敏第31页全定量检测特异性IgE——ImmunoCAPL.Soderstrom,G.Lilja,M.P.Borres,andC.Nilsson。Allergy2023;66:1058–1064.第32页过筛试验

吸入性过敏原过筛试验（Phadiatop）食物过敏原过筛试验（Fx5）小朋友吸入性过敏原过筛试验（PhadiatopInfant）第33页Phadiatop®吸入性过敏原过筛试验

具有95%常见吸入性过敏原筛查是否吸入性变应原过敏临床精确率>90%21项研究，超出2700个病例敏捷度 91%

特异度 93%

精确率 92%Reference:ErikssonNE.Allergy1990;45:285-292CrobachM.J.etal.Allergy1994;49:170-176第34页

包括6种最常见食物变应原 ——鸡蛋白、牛奶、小麦、花生、大豆、鱼检测成果直接、客观高敏捷度：89％高特异度：96％Fx5食物过敏原过筛试验第35页如何过筛过敏性疾病

推荐检测组合TPF：T-IgE+Phadiatop+Fx5第36页过敏原检测流程临床病史Phadiatop阳性螨、宠物、真菌系列三个花粉系列IgE检测T-IgE+Phadiatop+fx5第37页过敏原检测流程临床病史fx5阳性分别测定单价特异性IgE食谱分析T-IgE+Phadiatop+fx5第38页ImmunoCAPTM系统

——体外过敏原诊断金标准

检测成果真实、可靠，反复性好；为临床提供客观试验室指标敏捷度高，特异性好；减少漏诊、误诊全自动化，减少试验工作量，提升检测效率检测成果全定量，指导临床脱敏治疗和小朋友早期诊断完善检测项目，600多种过敏原和80多种组分过敏原，充足满足临床和科研需要第39页DiagnosisandIdentificationofCausativeAllergensConfirmationofallergyandidentificationofcausativeallergensarecrucialtocorrectlymanageallergicdiseasesPrecisediagnosisallowstheimplementationoftherapiesorientedtotheetiologicfactorsofallergicdiseases,suchasenvironmentalmeasuresandimmunotherapyWAOWhiteBookonAllergy2023-2023:ExecutiveSummary第40页Diagnosisbeginswithadetailedmedicalhistoryandphysicalexamination.Theidentificationofatemporalassociationbetweensymptomsandallergenexposureconstitutesthebasisforfurthertesting第41页ClinicalsuspicionisconfirmedbymeansofinvestigationofIgEantibodiesinvivo(skintests)orinvitro.Skintestsshouldincluderelevantllergensandtheuseofstandardizedallergenextracts.Invitrotestingisespeciallyusefulwhenskintestresultsdonotcorrelatewiththehistoryorcannotbeperformed.第42页Invitrotestscanbeappliedto“probabilityofdisease”predictioninfoodallergy.Thereisaneedforincreasedaccessibilitytoallergydiagnosisandtherapiesandimproveddiagnosticmethodologiesthatcansubstituteinvivoprovocationtestsfordrugandfoodallergy.第43页Theuseofunproventestsincreasestheunnecessarycostsofallergydiagnosis.使用未经证明测试增加了无须要成本过敏原诊断第44页IgE与过敏性疾病IgE是血清中含量最少一类免疫球蛋白，占血清总量0．001%。致敏阶断，过敏原作用于机体，机体产生过敏原特异性IgE；当机体再次接触到过敏原时，过敏原特异性IgE抗体与过敏原结合，并且与肥大细胞、嗜碱性粒细胞等结合，使其释放组胺等生物活性物质，进而产生过敏症状。第45页因此，特异性IgE介导了过敏反应发生只有特异性IgE检测才能以为是过敏原体外诊断IgE检查具有高度抗原特异性，如出现阳性反应，表达对该物质过敏第46页体外过敏原测定办法及检测系统非IgE检测生物共振（百康，摩拉）过敏原特异性IgE检测荧光酶联免疫法（ImmunoCAP）液相酶联免疫法ELISA（Adaltis）酶联免疫印迹法（Allergyscreen）酶联免疫捕捉法（Dr.Fooke）第47页非IgE检测生物共振

－－－百康

生物共振技术，通过红外扫描检测过敏原不是直接检测体内IgE抗体检测成果为定性据称可检测上百种过敏原检测成果未通过WHO标准案不受学术支持过敏原检测产品第48页四种检测仪器性能比较

---检测原理与参数ImmunoCAPAdaltis敏筛Dr.Fooke备注检测原理荧光酶联免疫法液相酶联免疫法酶联免疫印迹法酶联免疫捕捉法？检测底物荧光底物显色底物显色底物显色底物荧光法敏捷度是显色法10～1000倍抗原载体ImmunoCAP专利载体微孔板（试管法）硝酸纤维素膜（纸片法）微孔板（试管法）ImmunoCAP抗原吸附能力是纸片法3倍，试管法150倍检测项目6大项，包括T-IgE、s-IgE、ECP、IgG4等T-IgE、s-IgET-IgE、s-IgET-IgE、s-IgE、IgGImmunoCAP拥有完善过敏原有关检测项目过筛试验Phadi