取小鼠脑组织

丁香园上面总结的方法,排版有点乱。其实过程与大鼠近似，我的经验是：1.材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等；2。步骤：处死小鼠，取头颅;剪开皮肤，漏出颅骨；用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线；再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨;当全脑露出时,再用眼科镊去除脑膜和血管；然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可.3.注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部；用剪刀剪颅骨时,一定要贴壁向上剪,否则容易剪破脑部；去除脑膜时,不能硬拉，否则容易弄破大脑；取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高；若留病理，建议一定要取完整无损的大脑.做免疫组化的话,稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要先灌注.先麻醉小鼠剪开胸腔，找到心脏,从心尖入针，剪开右心耳先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了再改用固定液(一般是4％多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬小鼠只需要用注射器就行了，我做的25~35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛.具体步骤:常规麻醉小鼠将其固定用剪刀剪开胸部皮肤暴露出皮下组织，剪开时注意钝性分,以免误伤然后用镊子提起剑,用剪刀剪开胸腔剪断两侧肋骨,暴露整个胸腔，小心误伤肺及心脏、大血管。用镊子撕开心包膜，暴露心脏,用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室,注射，注射时小心针头滑脱.生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白色即待抽搐结束，小鼠僵硬即可。取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅,用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀将两边皮肤向下翻用手捏住暴露整个颅骨用眼科剪从脊髓端插入椎孔沿着颅正中线剪开颅,注意剪刀向上翘一些以免误伤脑组,剪开后用弯眼科镊分离颅骨小心分离直至暴露整个大脑然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，就可以取出整个脑子了。放多聚里固定24h后包埋切片即可。具体操作如下：实验操作步骤：1)小鼠称重，以每克小鼠0。0025ml％戊巴比妥钠剂量的实施腹腔麻醉。也可以用10%的水合氯,3-5ul/g腹腔注射麻醉。2)将麻醉的小鼠仰放在操作台上，去毛。3）解剖小鼠，暴露心.4）找到心尖部，左手用镊子提起心尖部，右手或左手将灌流针刺破心尖部进针约0.5c（最好是用小点的针头，止血钳固定针尖，剪开右心.5)将灌流器的导管部开口放到生理盐水中里打开灌流器灌流直到从右心耳流出的液体为无色,同时小鼠肝脏色淡，肠管肿胀为止，停止灌流。没有灌流器的用注射器或者吊瓶都可以.6)将灌流器的导管小心的移至4％多聚甲醛或25％戊二醛中注意不要产生气泡开始灌流.此时如果看到小鼠四肢突然紧张尾部卷曲,说明达到固定效果.7）灌流大约5分钟，灌流液用量约150毫升左右结束。（小鼠的用量没这么多）8)取材。取实验所需的标本。9)将取出的材料放到事先准备的多聚甲（戊二醛)中固定2——4小时后移至30%蔗糖中4度冰箱保存过夜。我们实验室鼠脑冰冻切片采用4％的多聚甲醛固定，小鼠直接灌注saline20ml,4％多聚甲醛20ml经左心室固定然后取材在4度4%多聚甲醛后固定4-6，浸20％—30％糖沉,就可以切,切片首先需要冰冻切片机，我们的leica1900的不知道lz那里有没有这个机,还有一种原始的自己刷冻台的那种，比较麻烦，切片厚度大概选择20-40um差不多开胸时要把肋骨提,大U字剪开左右肋弓后掀起，血管钳固定一下（以免挡遮视野;平头针插入后稍许打开输液器开关并迅速剪开充盈的右心耳（可见血涌出),用血管钳将心室和平头针一起钳夹固定再（但滴速也不能太快以免血管被冲破,，。：%醛-钠/钠：A醛 g水 lBO 6。g水lC：Hg水mA在l的待时,要。B液和C液配后,将B液入C液入A液以nH或Nl将H调至7。2～,至l合围:究,时,配醛存但同时也看到了关于同一个问题有很多不同的回,我想结合自己的实验，希望各位老师能就我提出的问题说说自己的经验看,给我启示,因为很多自己未做,怕自己哪里操作不恰当而影响实验结果，非常感谢各位老师的不啻赐教！首先,我做的是大鼠（体重约230—250g），模型是大脑中动脉栓塞，在不同的量PRnt的面.：量R：1么,，？2转0？3中A—0么,？nt：4注,？5于R和nt段话)：6液,？7、4？8、4？9的S是B度是5到%再%么?？0次,后,，后%用M的S水3了更的,？1或.6？瓶l入g钠,素存,用4推,推l，n度。含U于,用l成0液肝。素0g凝0l液(按g于0，0单凝l血液计）.如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大2~3倍。用于试管内抗凝时，一般可配成1%肝素生理盐水溶液，取0.1ml加入试管内，加热80℃烘干，每管能使5～10ml血液不凝固.作全身抗凝时，一般剂量为：大鼠2.5～3mg·(200300g体重)—1,兔或猫10mg·kg1，狗5~10mg·kg1。如果肝素的纯度不高，或过期，所用的剂量应增大2~3倍。7、4％多聚甲醛灌注固定一般灌注多常时间?多少毫升？一般多聚甲醛灌注20min100ml缩(这）,的。8、%多？片,片,者h。小干,放。9水,S是B度是15％到20％再3%？用0M的PB配配0和0度糖4h。现h底.0后,再，后30％用0。M的S水3天会好,如本,？话,囟m前囟m左。经则,。T—PE与WB都是分子生物学方面的实验,可以共用一个标本一般不需要灌注，文献上都如,需要新鲜的脑组织，液氮速冻，80度保存，半年应该没问题，既然是MCA取A域,后m带,子子,注,头。水3脱关,，0糖1天%糖2共3。注吧?取T—R和B比冰Sl一般1完)间,是，）了,有。我也说两句冰冻切片灌注用生理盐水还是PBS这个问题不是主要问题主要作用在于你能否冲干净血管内的血液,而且一般观点认为灌注液最好在10分钟之内冲完(原因可能在于缺血后脑细胞在10分钟后会大量死亡）,而且灌注液最好不要用冰冻的（原因有时候冰冻的液体也会使老鼠抽搐，造成你的判断失误)冲洗液的速度越快越好,量要适当控制过量的话细胞会肿大,一般我们以肝脏变白为标准，如果还不放心的话，再稍微延长点时间，但是最好不要超过10分钟。灌注时有一点小技巧,就是把心脏稍微往大鼠的右边向上扭一点,以进针没有阻滞感为佳.以6到12小及行.这的,个是0％水(s配置)等。单冻,让一在-0左—5。卡C0的片程.其应了.：、0。1M的PB0。M的S调H验耳。脑,快,而体.在4度行.4％是4。，是24小过1周失,不结。到4度行4，h后如2天大：是0？，。好4至0度.外用T埋,到-0是0度,？?？四:这？了.过,所以急切想听听大家的看法。