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文档简介
糖原的显示反应第1页,课件共11页,创作于2023年2月
实验目的
实验原理
实验用品
实验方法与步骤
实验结果
实验报告第2页,课件共11页,创作于2023年2月目的要求通过PAS反应,了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。第3页,课件共11页,创作于2023年2月基本原理糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成,在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂,能将葡萄糖中乙二醇基(CHOH-CHOH)氧化成二个游离醛基(—CHO),游离醛基与Schiff‘s试剂反应生成紫红色产物,颜色深浅与多糖含量成正比。由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉,故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖,包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被唾液淀粉酶水解,先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色,若反应为阴性,则表明是糖原,反之则为其他多糖。第4页,课件共11页,创作于2023年2月第5页,课件共11页,创作于2023年2月实验用品1.器材:石蜡切片机,盖玻片、载玻片、染色缸等.2.试剂0.5%过碘酸溶液;Schiff‘s试剂3.材料:小鼠肝脏石蜡切片第6页,课件共11页,创作于2023年2月切片经二甲苯和各级酒精复水后,入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟,取出后水洗。注意:过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤,过碘酸的作用时间与反应环境温度有关,当室温较高时,反应较快,过碘酸的作用时间应适当缩短,当室温较低时,反应较慢,过碘酸的作用时间应适当延长。第7页,课件共11页,创作于2023年2月切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用15分钟左右,将切片取出水洗,为洗去非特异性着色,将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗,取出后水洗,镜检。第8页,课件共11页,创作于2023年2月对照片的设置为了确保实验结果的可信性,在实验中需设置阴性对照片。对照片在复水后,用唾液淀粉酶37℃水解30—60分钟,取出后水洗,再入过碘酸处理。第9页,课件共11页,创作于2023年2月实验结果第10页,课件共11页,创作于2023年2月实验报告绘图表示糖元在细胞中的分布情况;在实验过程中,过碘酸处理能
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