种子健康检验资料

3种子(zhǒngzi)健康检验3.1种传病害(bìnghài)检验的意义3.2种传病害检验的方法第一页，共五十六页。编辑课件3.1种传病害(bìnghài)检验的意义3.1.1播种无病种子（1）检疫性病害禁止进境；（2）国内检疫性病害，调运种子时要做好检疫工作。（3）对于普通病害，寄主携带(xiédài)病原体超过一定限度，不能用作种子繁殖和推广第二页，共五十六页。编辑课件3.1种传病害检验(jiǎnyàn)的意义3.1.2提高种子消毒的效果种子所带病原物的种类、数量、潜伏部位等，处理与否，选择药剂和方法都会不一样。（1）种子表面与内部(nèibù)带菌；（2）种子带菌作为唯一初侵染来源；（3）种子带菌，土壤或粪肥带菌，种传和土传（4）初侵染来源多，再侵染频繁的病害第三页，共五十六页。编辑课件3.1.3防止检疫性病原生物的传播与为害（1）一旦发现带有危险性病原生物，禁止调运和作种子；发现传进新区，销毁或防除(fángchú)（2）有些病原物的不同生理小种或病毒的不同株系问题，也应进行检验3.1种传病害(bìnghài)检验的意义第四页，共五十六页。编辑课件3.2种传病害检验(jiǎnyàn)的方法3.2.1种传病害的产地检验(jiǎnyàn)3.2.2种传病害的室内检验第五页，共五十六页。编辑课件3.2.1种传病害的产地(chǎndì)检验确定种子是否带病或带何种病，首先要进行田间检验（产地检验），尤其是对于种子上不表现症状(zhèngzhuàng)，室内无快速、准确、有效的检验方法。产地检验的开展：第六页，共五十六页。编辑课件3.2.1种传病害(bìnghài)的产地检验3.2.1.1搞好病情调查和疫情普查（1）检测有无检疫性对象如有，目前发生种类、地区和为害面积；检疫性对象的发生规律，销毁或防除划为疫区封锁(fēnɡsuǒ)（2）普通病害为害的时期及受害的程度，造成的损失第七页，共五十六页。编辑课件3.2.1种传病害(bìnghài)的产地检验3.2.1.2建立优质种子繁育基地（1）基地所采用的种子来源于无病区，保证不带任何(rènhé)检疫对象（2）所有种子要进行消毒处理（3）产地检验存在检疫对象，应撤消基地第八页，共五十六页。编辑课件3.2.1种传病害(bìnghài)的产地检验我国：（1）基地无检疫对象；（2）种子来自非疫区；（3）专人负责，防止(fángzhǐ)检疫性或危险性病害传入；（4）一旦传入，就地销毁第九页，共五十六页。编辑课件3.2.1种传病害的产地(chǎndì)检验3.2.1.3隔离试种检验1）不易发现症状或病原体；2）国外引种；3）减少(jiǎnshǎo)病害初侵染来源，保证生产上的安全，先进行隔离试种，观察发病率隔离种植区在相对封闭或严密的地区进行试种（隔虫，土壤消毒），保证植株发病只能来源于种子第十页，共五十六页。编辑课件3.2.1种传病害(bìnghài)的产地检验3.2.1.4实施产地田间检验（1）检疫性病害，发生流行季节，病情症状较明确阶段进行普查；（2）非检疫性病害，分期进行系统调查，查看各生育期的发病程度，了解(liǎojiě)种子带菌情况。田间检验为无病或轻病的会不会变成重病种？第十一页，共五十六页。编辑课件3.2种传病害检验(jiǎnyàn)的方法3.2.2种传病害(bìnghài)的室内检验3.2.2.1取样3.2.2.2室内检验方法第十二页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)一批种子，全部检验是不可能的；只能取其中一部分进行检验分析。如果抽取的样品不能代表(dàibiǎo)全部种子实际情况，即便检验过程精细，也不能反映该批种子正确的结果。（1）取样的基本原则：样品必须具有代表性

A确定取样点；B样点必须全面均匀；C各点所取样品数量应该基本一致。第十三页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)（2）样品的种类小样：整批的种子堆或仓库中，用扦样器或徒手从不同部位、不同样点每次取出来的小量样品原始样品：把由一批或部分(bùfen)种子所扦取出来的小样全部混合起来组成。平均样品：原始样品分样器混合，再从中取出相当数量的样品。代表性强。第十四页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)试样：平均样品经过混合，称出一定量种子，供室内检验使用的样品抽取小样和原始(yuánshǐ)样品是取样工作中最重要的一环。如果数量与部位抽取不恰当，会影响样品的代表性。第十五页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)（3）取样(qǔyàng)的方法划批：作物、品种、年度、来源、国家、运输工具、时间A袋装种子取样法B散装种子取样法第十六页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)A袋装种子(zhǒngzi)取样法10袋以下扦取总袋数的1/211-20袋扦取6袋21-40袋扦取7袋41-60袋扦取8袋61-80袋扦取9袋81-100袋扦取10袋101袋以上每增加20袋多扦取1袋第十七页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)样袋分布均匀：样袋呈堆积(duījī)状态，在堆桩的上、中、下各部分别取样；且每袋取样时，不能局限在某一部位扦样：小粒种子用单管扦样器，大粒种子用双管扦样器第十八页，共五十六页。编辑课件B散装种子(zhǒngzi)取样法分区设点：25平方米，5点取样；相邻区域，实行取样点合并设在各区界限上按堆分层：不足2米，分上下2层；2-3米，分上、中、下3层；3米以上增加1层扦取小样：分层定点后，按上、中、下的顺序取样。第十九页，共五十六页。编辑课件第二十页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)（4）取样重量：40000粒（平均样品）：依据千粒重来计算最低重量实验室定量样品的扦取：如果平均样品数量(shùliàng)还太多，可采用正方形四分法：样品倒在平板，厚度不超过1cm，用正方形四分法扦取所需要的份数和数量(shùliàng)（粒数）第二十一页，共五十六页。编辑课件3.2.2.1取样(qǔyàng)（5）取样注意事项:A取样器、分样器、容器、用具等要灭菌B棉花、花生等种子不能用扦样器取样原因：防止(fángzhǐ)病菌污染，保证检验结果的正确性；防止(fángzhǐ)伤种，影响结果的准确性第二十二页，共五十六页。编辑课件3.2.2种传病害(bìnghài)的室内检验3.2.2.2室内检验方法肉眼检验；过筛检验；比重检验；解剖检验；洗涤检验；漏斗分离检验；保湿萌芽检验；分离培养检验；整胚检验；接种检验；化学染色检验；荧光反应检验；噬菌体检验；血清学检验；病毒电子显微镜检验；分子杂交分析(fēnxī)；PCR体外扩增DNA种子健康检测的6个要求：特异性、灵敏性、快速性、简单性、成本效率性、可靠性第二十三页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内(shìnèi)检验方法（1）肉眼检验应用于具有明显症状的种子，或者病原物容易识别，个体(gètǐ)较大的种传病害。混杂于种子间的虫瘿，菌瘿，菌核或菟丝子；种子表面孢子量大的（腥黑穗）；感病后有明显症状的病粒，小麦黑胚病（胚部有病变）第二十四页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法方法：从平均样品中取出一半种子作试样，放在白纸或玻璃板上，用肉眼或5-10倍的扩大镜检查，取出病原体或病粒，称其重或计其粒数，计算病害感染率。注意：无症状表现的不一定是无病种子；不同病害相似症状，同一病害不同或多种症状；无法判断(pànduàn)有无活力或致病性。第二十五页，共五十六页。编辑课件大豆(dàdòu)灰斑病大豆(dàdòu)紫斑病第二十六页，共五十六页。编辑课件小麦粒(màilì)线虫病第二十七页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（2）过筛检验适用于较大病原体，其形状、大小与种子不同。如菌瘿、病核、虫瘿及赤霉病粒等。方法：从平均样品中取出一半种子作试样，用规定孔径的筛子过筛，不同作物种子所用筛孔不同，最后计算(jìsuàn)病害感染率。一般采用圆孔筛。每千克样品的检验对象含量=（检验对象数量/试样重量）×1000第二十八页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内(shìnèi)检验方法（3）比重检验病原体与种子大小相仿，但比重存在差异，如菌核、菌瘿、虫瘿(chóngyǐng)小麦粒线虫的虫瘿，用20%盐水进行悬浮。第二十九页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内(shìnèi)检验方法（4）解剖检验适用于表面(biǎomiàn)无明显症状，诊断比较困难的种子，可以了解病菌的潜伏场所。方法：切片、染色、观察马铃薯环腐病，切开，用手挤压，维管束部分有菌脓溢出，制片高倍镜下观察。小麦线虫病的虫瘿和腥黑穗病的菌瘿（黑粉，冬孢子，腥味）第三十页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（5）洗涤检验适用(shìyòng)于种子表面带病而肉眼看不见的种子病害。方法：取样，洗涤，振荡，离心，悬浮，记载病原体种类及每视野的孢子数，并计算每粒种子孢子负荷量。第三十一页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内(shìnèi)检验方法（6）漏斗分离检验此法专门用于种子(zhǒngzi)携带线虫的检验。具体方法（贝尔曼漏斗法）：

将样品放在漏斗内的过滤纸上，在漏斗的排水口处套一像皮管，其上装有螺旋节流夹，将种子用恒温细喷雾24小时，多余的水会自种子与漏斗的边缘流掉，这样线虫通过滤纸下沉到螺旋夹以上的橡皮管内，然后打开螺旋节流夹搜集下沿液，便可检验出线虫并计算出含量。第三十二页，共五十六页。编辑课件第三十三页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（7）保湿萌芽检验适用于种子携带病菌在种子萌芽阶段开始为害，萌发期或幼苗早期表现症状，或种子未萌芽，种表长出病菌的种传病害。可以检测种子的带菌情况，发芽(fāyá)情况，种内感染情况。第三十四页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法A保湿培养(péiyǎng)检验（吸水纸，冷冻吸水纸，琼脂平皿法）吸水纸法：吸水纸吸足无菌水，放入培养皿，种子排放在吸水纸上，放入20-28℃培养，12小时光照/黑暗，有时加入0.1-0.2%的2，4-D溶液代替水冷冻吸水纸法：10℃3天，20℃2天，-20℃冷冻过夜，然后20℃，12小时光照/黑暗，形成孢子，避免伸长琼脂平皿法：1.5-1.7%的琼脂液，制成平板，将种子放入第三十五页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法B砂内萌芽检验法

河砂（1mm筛孔）及容器灭菌（干热灭菌），注入冷开水至砂量的60%左右（17%含水量），低容器边缘4厘米，排列种子，加砂覆盖2-3厘米，25℃培养，幼芽连根拔出。检测幼苗和未发芽种子症状以及种苗上有无(yǒuwú)孢子。C土内萌芽检验法D试管幼苗症状测定法第三十六页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内(shìnèi)检验方法（8）分离培养(péiyǎng)检验适用于种子内部，不易发现和鉴定的病原菌，或种子虽有病斑，但无病征或种表携带的种传病害。专性寄生物（病毒，白粉，锈菌等）除外

A分离潜伏于种表或深层的病菌；B确定病菌的潜伏部位；C了解种子外部携带的菌群；D了解种子感染和萌发的总体情况；E分离无性繁殖材料所携带的病菌第三十七页，共五十六页。编辑课件第三十八页，共五十六页。编辑课件细菌的分离培养培养基：肉汁胨培养基（牛肉浸膏3g，蛋白胨5-10g，琼脂17-20g，水1000ml）划线分离法：种表消毒磨碎，无菌水将细菌溢出(yìchū)，接种环蘸取划线。将单个细菌分开，经培养后形成单菌落，获得纯菌株。平板稀释法：病原细菌数量大，稀释培养使病原细菌与杂菌分开，形成纯培养。培养皿4个，1ml无菌水，接种环搅匀，依次移入2、3、4皿，倒培养基（45℃）。第三十九页，共五十六页。编辑课件第四十页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（9）接种检验有时在植物发病部位发现(fāxiàn)或混杂在进境种子里的真菌，并不是引起该种病害的病原真菌，可能是由其他杂菌污染所造成的。第四十一页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法拌种接种(jiēzhòng)：种子和孢子拌匀浸种接种：菌丝段、孢子或细菌悬浮液花期接种：（花期侵入的病菌）小麦散黑穗病喷雾接种：细菌或悬浮液稀释，22-28℃保温针刺接种：需要伤口侵入的病原物剪叶接种：伤口侵入的细菌（水稻白叶枯病）摩擦接种：病毒，隔离条件下进行，金刚砂土壤接种，蘸根接种，根部切伤接种，涂抹法第四十二页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（10）化学染色检验不同的化学品，对细菌、真菌、病毒等染色，鉴别有无病原体及其种类植物细菌性病害（革兰氏染色）步骤：切开病部，挤压挑取菌脓，结晶(jiéjīng)紫草酸胺液染色1分，碘液染色1分，95%的乙醇褪色30秒，番红染10秒，干燥后镜检。马铃薯环腐病，阳性，紫色，青枯病菌阴性，红色第四十三页，共五十六页。编辑课件曲利苯蓝未被侵染(qīnrǎn)被侵染(qīnrǎn)小麦(xiǎomài)散黑穗病第四十四页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（11）荧光反应检验植物细胞中含有各种核酸，在紫外线下能发生荧光，细菌、真菌、病毒等有荧光反应，并且它们比正常组织的荧光反应要强。凡感染环腐病的马铃薯块茎切面均呈现绿色的荧光，凡无病的薯块则呈现紫色荧光；而革兰氏阳性细菌为害的薯块都为黄色、蓝色或绿色。菜豆日烧病菌和菜豆细菌性疫病菌在浮白色或浅黄色豆粒上产生蓝白色荧光。注意(zhùyì)：少数有病种子有时不发光，而健康种子可能会发较强光。第四十五页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内(shìnèi)检验方法（12）血清学检验

血清学方法是病毒诊断和鉴定(jiàndìng)的基础方法。其基本原理是抗体与抗原之间的专化性结合。方法：酶联免疫吸附法、斑点免疫结合测定法、免疫扩散、免疫电泳、荧光免疫免疫胶体金技术。第四十六页，共五十六页。编辑课件ELISA流程(liúchéng)IndirectELISADirectELISA第四十七页，共五十六页。编辑课件3.2.2.2室内检验(jiǎnyàn)方法（13）PCR检测

聚合酶链式反应(Polymerasechainreaction,PCR)技术(jìshù)已广泛用于病毒、细菌、真菌、植原体、害虫和杂草等检测。方法：提取病原物的DNA，设计特异性引物，利用PCR技术进行相应真菌种类的鉴定。因其灵敏度高、特异性强，已经成为实验室对有害生物检疫的重要手段。第四十八页，共五十六页。编辑课件产地检验与室内(shìnèi)检验的关系：（1）有些种子带病无明显症状，不能分离培养，实验室无法检验，需产地检验，尤其检疫性病害（2）产地检验主要靠肉眼，比较粗放（3）产地检验现场即可确定留种用的种子，但种子在收获、脱粒、加工、贮藏、转运等过程中，会将无病种子变成有病。第四十九页，共五十六页。编辑课件种子病害检验(jiǎnyàn)小结1一种病原生物的检验可以用多种检验方法；2一种检验方法可以用作多种病原生物的检验；3进行病原生物检验时多种检验方法综合利用，以便及时快速地得出准确(zhǔnquè)的结论第五十页，共五十六页。编辑课件真菌：肉眼，过筛，比重，解剖，洗涤，保湿萌芽，分离培养，整胚，接种，荧光反应等细菌：解剖，保湿萌芽，分离培养，接种，化学染色，荧光反应，噬菌体等病毒：保湿萌芽，接种，荧光反应，血清学，电子显微镜观察(guānchá)，分子杂交分析，PCR体外扩增DNA等线虫：肉眼，过筛，比重，解剖，洗涤，漏斗分离等寄生性种子植物：肉眼，过筛等第五十一页，共五十六页。编辑课