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文档简介
糖链结构测定及糖的提取分离演示文稿本文档共18页;当前第1页;编辑于星期日\21点44分优选糖链结构测定及糖的提取分离本文档共18页;当前第2页;编辑于星期日\21点44分
组成苷的苷元和单糖的鉴定将苷用稀酸或酶进行水解,使生成苷元和各种单糖
苷元的结构鉴定在有关章节中逐一介绍。
组成苷中糖的种类鉴定通常采用PC、TLC等方法对水解液进行鉴定。
糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统,如正丁醇-醋酸-水(4:1:5),EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等,其Rf值与溶剂的含水量有关。七、糖链结构的测定本文档共18页;当前第3页;编辑于星期日\21点44分苷中糖的数目的测定质谱:苷分子量-苷元分子量,求出糖的数目。核磁:氢谱中端基质子信号数(5ppm左右),碳谱中端基碳信号的数目(90-112ppm)。七、结构的测定本文档共18页;当前第4页;编辑于星期日\21点44分
苷元和糖之间连接位置的确定13C-NMR:苷化位移规律,将苷和苷元的碳谱相比较。成苷后,α-C约+8ppm,β-C约-4ppm
二维核磁共振谱(如HMQCCOSY及HMBC谱)等技术广泛用于确定连糖位置。七、结构的测定本文档共18页;当前第5页;编辑于星期日\21点44分糖与糖的连接位置的确定全甲基化物进行甲醇解,分析其甲醇解产物。七、糖链结构的测定本文档共18页;当前第6页;编辑于星期日\21点44分采用的方法通常是将这些甲醚化的单糖进行了TLC鉴定,并与标准品对照。近来亦有用GC-MS联用仪对其进行鉴定的报道。全甲基化甲醇解:七、糖链结构的测定本文档共18页;当前第7页;编辑于星期日\21点44分
七、糖链结构的测定
如:已知某二糖甲醇解后得到下列产物,请推测该二糖的结构(连接位置)全甲基化甲醇解本文档共18页;当前第8页;编辑于星期日\21点44分
甲基化反应
(1)Haworth法:用硫酸二甲酯和氢氧化钠(或碳酸钠、碳酸钾),可使醇羟基甲基化。其缺点是甲基化能力较弱,如果欲进行全甲基化反应,必须进行多次反应才能达到目的,
(2)Purdie法:用碘甲烷和氧化银为试剂(一般可在丙酮或四氢呋喃中进行),可使醇羟基甲基化,但因氧化银具有氧化作用,只能用于苷的甲基化.而不能用于还原糖的甲基化。
七、糖链结构的测定本文档共18页;当前第9页;编辑于星期日\21点44分(3)Kuhn改良法:在二甲基甲酰胺(DMF)溶液中,加入碘甲烷和氧化银或硫酸二甲酯及氢氧比钡(或氧化钡),在搅拌下进行甲基化。本法的缺点是反应较缓慢。(4)Hakomari法(箱守法):二甲基亚砜(DMSO),氢化钠,碘甲烷七、糖链结构的测定本文档共18页;当前第10页;编辑于星期日\21点44分
此法反应迅速、完全、无需特殊装置、可在室温下连续反应,是目前最常用的全甲基化方法。但因在反应中,所用二甲亚砜和NaH均呈强碱性,故分子中有酯键的苷类不宜用本法。七、糖链结构的测定本文档共18页;当前第11页;编辑于星期日\21点44分酶水解转化糖酶--------水解β-果糖苷键麦芽糖酶--------水解α-葡萄糖苷键杏仁苷酶--------水解β-葡萄糖苷键,专属性较低纤维素酶--------水解β-葡萄糖苷键NMR谱法测定利用端基质子的偶合常数如:5ppm(1H,d,J=7Hz)为下面哪个结构?七、糖链结构的测定-苷键构型的确定本文档共18页;当前第12页;编辑于星期日\21点44分一、提取植物体内,苷类常与水解该苷的酶共存。提原生苷:先杀酶。
常用的方法是在中药中加入CaCO3,或用甲醇、乙醇或沸水提取,同时提取过程中要尽量勿与酸或碱接触,以免苷类分解。提苷原:可利用酶活性
八、糖及苷类的提取和分离本文档共18页;当前第13页;编辑于星期日\21点44分八、糖及苷类的提取和分离化合物的极性功能基的种类:(-COOH)>(-OH)>(–C=O)>(-COOR)>-O->(-CnHm)极性功能个数分子内氢键降低极性化合物大小
小分子的极性大于大分子的极性常用溶剂极性:水>甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯>氯仿>乙醚>己烷H2O>MeOH>EtOH>CH3COCH3>EtOAc>CHCl3>EtOEt>CH3(CH2)4CH3本文档共18页;当前第14页;编辑于星期日\21点44分流程图八、苷类的提取和分离本文档共18页;当前第15页;编辑于星期日\21点44分糖和苷的提取分离药材水水提液3倍量以上乙醇醇水溶液沉淀(苷)(多糖)本文档共18页;当前第16页;编辑于星期日\21点44分多糖提取分离
(一)提取
水提得到的粗多糖水溶液,加入95%乙醇使含醇量达80%,4摄氏度静置过夜,多糖析出。减压抽滤,用95%乙醇洗至溶液无色。沉淀(多糖)挥干醇。
(二)除蛋白
这是至关重要的一步,由于蛋白是大分子,它的存在会干扰多糖的纯化。一般选用sevage法萃取或离心,多糖浓度为1mg/ml,氯仿-正丁醇比例通常在3:1-5:1之间,变性的蛋白质一般在两相交界处产生一条白色的带。
(三)检测
除蛋白前后用紫外分光光度计检测280nm(蛋白质)和260nm(核酸)下的吸收值,多糖浓度为0.4mg/ml对照验证除蛋白的效果。本文档共18页;当前第17页;编辑于星期日\21点44分(四)离子交换纤维素(DEAE-纤维素)进行初步分离一般选用DE-52型离子交换纤维素(二乙氨基乙基纤维素52)
<1>柱的预处理
加蒸馏水浸泡过夜,期间换几次水,每次除去细小颗粒,用0.5mol/LHCl溶液浸泡1~2h,蒸馏水漂洗至中性;再用0.5mol/LNaOH溶液浸泡1~2h,蒸馏水漂洗至中性。
<2>洗脱
样品浓度在20mg/ml左右。先用水洗脱,再用Na
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