外植体消毒方法

PAGEPAGE1外植体消毒方法第一篇：外植体消毒方法外植体消毒、材料：油菜、番茄、芝麻等种子或其他培养材料。、仪器：超净工作台，含MS培养基的培养瓶，镊子，培养皿，酒精灯，接种器械（解剖刀、剪子、镊子等）。、试剂：70%酒精，95%酒精，0.1%升汞或漂白粉、无菌水等。方法步骤1、用水和肥皂洗净双手，穿上灭过菌的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射20XX钟。、上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，然后用70%酒精喷雾降尘，并擦拭工作台面。、先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子蘸95%酒精在酒精灯火焰上灼烧，放置冷却。、修整接种材料，除去不用的部分，然后进行外植体消毒：（1）水洗，滤纸吸干。（2）70%酒精中浸泡约30-60秒（注意：酒精穿透力很强，时间不宜过长，以免损伤材料组织细胞）。（3）在0.1%升汞中浸泡10分钟；或在10%漂白粉上清夜中泡10-15分钟；（4）无菌水冲洗3-5次。、接种：将种子或其他培养材料放到培养基上。（1）先解开包口纸，将试管或培养瓶拿成斜角，使瓶口在酒精灯火焰上方灼烧数秒钟。（2）用灼烧过的冷却的镊子取外植体材料转接到试管或培养瓶中，轻轻插入或放在培养基表面。（3）接种完毕后，将瓶口在火焰上转动灼烧，封口。（4）操作期间应经常用70%酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%酒精中浸泡和火焰上灼烧灭菌。注意：双手不能离开工作台，不能说话、走动或咳嗽等。、接种结束后，清理和关闭超净工作台，并用70%酒精擦拭工作台面。第二篇：外植体灭菌外植体灭菌对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、酒精、消毒液、无菌水、手表等。用酒精浸10-30s。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用酒精处理稍长的时间。升汞是由重金属离子汞来达到灭菌的，一般处理5-8min，用无菌水冲3-10次。吐温是表面活性剂，主要作用使药剂更容易展布，更容易浸入到灭菌的材料表面。但吐温加入后对材料的伤害也在增加，应注意吐温的用量和灭菌时间。处理完的材料在无菌条件下，取用内部材料。第三篇：植物组培外植体消毒详解植物组培外植体消毒详解外植体的消毒植物组织培养用的外植体大部分取自田间，表面上附着大量的微生物，这是组织培养的一大障碍。因此在材料接种培养前必须要消毒处理，消毒一方面要求把材料表面上的各种微生物杀灭，同时又不能损伤或只轻微损伤组织材料而不影响其生长。因此，外植体的消毒处理是植物组织培养工作中的重要一环。（1）常用的消毒剂常用的消毒剂如下表所示。理想的消毒剂应具有消毒效果好，易被无菌水冲洗掉或能自行分解，对材料损伤小，对人体及其他生物无害，来源广泛，价格低廉。常用消毒剂的使用方法及效果①酒精酒精是最常用的表面消毒剂，以70%~75%酒精杀菌效果最好，95%或无水酒精会使菌体表面蛋白质快速脱水凝固，形成一层干燥膜，阻止了酒精的继续渗入，杀菌效果大大降低。酒精具有较强的穿透力，使菌体蛋白质变性，杀菌效果好。同时它还具有较强的湿润作用，可排除材料上的空气，利于其他消毒剂的渗入。但酒精对植物材料的杀伤作用也很大，浸泡时间过长，植物材料的生长将会受到影响，甚至被酒精杀死，使用时应严格控制时间。但酒精不能彻底消毒，一般不单独使用，多与其他消毒剂配合使用。②升汞又称氯化汞，Hg2+可以与带负电荷的蛋白质结合，使蛋白质变性，从而杀死菌体。升汞的消毒效果极佳，但易在植物材料上残留，消毒后需用无菌水反复多次冲洗。升汞对环境危害大，对人畜的毒性极强，使用后应做好回收工作。③次氯酸钠次氯酸钠是一种较好的消毒剂，它可以释放出活性氯离子，从而杀死菌体。其消毒能力很强，不易残留，对环境无害。但次氯酸钠溶液碱性很强，对植物材料也有一定的破坏作用。④漂白粉漂白粉的有效成分是次氯酸钙[Ca(ClO)2]，消毒效果很好，对环境无害。它易吸潮散失有效氯而失效，故要密封保藏。⑤过氧化氢也称双氧水，消毒效果好，易清除，又不会损伤外植体，常用于叶片的消毒。⑥新洁尔灭这是一种广普表面活性消毒剂，对绝大多数植物外植体伤害很小，杀菌效果好。（2）消毒方法①茎尖、茎段及叶片等的消毒消毒前先对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，然后用自来水冲洗。对于一些表面不光滑或长有绒毛的材料，可用洗涤剂清洗，必要时用毛刷充分刷洗，硬质材料可用刀刮。消毒时在超净台上操作，先用70%酒精浸泡10~30s，以无菌水冲洗2~3次，然后按材料的老、嫩和枝条的坚实程度，分别采用2%次氯酸钠浸泡10~15min或用0.1%升汞浸5~10min。消毒时要不断搅动，使植物材料与消毒剂充分地接触。若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴Tween-20XX后用无菌水冲洗3~5次。②果实及种子的消毒先用自来水冲洗10~20XXn，再用酒精迅速漂洗一下。果实用2%次氯酸钠浸10min，后用无菌水冲洗2~3次。种子则先用10%次氯酸钠浸泡20XX0min，难以消毒的可用0.1%升汞消毒5~10min。对于种皮太硬的种子，也可预先去掉种皮，再用4%次氯酸钠浸泡8~10min。③花药的消毒用于组织培养的花药多未成熟，其外面有花萼、花瓣或颖片保护，处于无菌状态。消毒时将整个花蕾或幼穗用70%酒精浸泡数秒钟，然后用无菌水冲洗2~3次，再在漂白粉中浸泡10min，最后用无菌水冲洗2~3次。④根及底下部器官的消毒由于这类材料生长于土壤中，表面带菌量大，消毒较为困难。可先用自来水冲洗，软毛刷刷洗，用刀切去损伤及污染严重部位，再用酒精漂洗后，置于0.1%升汞中浸5~10min或2%次氯酸钠中浸10~15min，最后用无菌水冲洗3次。在操作时要根据材料的大小、幼嫩、质地等差异做出判断后，再选择适宜的消毒剂种类、浓度和消毒时间，切不可生搬硬套。消毒的最佳效果应以最大限度地杀死材料上的微生物，而又对材料的损伤最小为好。第四篇：无菌室消毒方法无菌室的消毒灭菌无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：l．用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室，关紧房门，熏蒸20XX0分钟即可。2．0.1％升汞水消毒：用0.1％升汞水浸过的纱布或海绵进行指擦，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。喷雾后20XX0分钟，箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死，内部的空气就变得很清洁。3．紫外线照射灭菌：在无菌箱中装一支20XX、3O瓦的紫外线灯管；每次开20XX0分钟，就能达到空间杀菌的目的。照射结束后，罩黑布半小时，以增强杀菌效果。4．石炭酸喷雾：在每次接种之前，用5％石炭酸溶液喷雾，可促使空气中的微粒和杂菌沉降，防止桌面微尘飞扬，并有杀菌作用。5．石灰揩擦：经常用药物熏蒸，易造成酸性环境，特别用甲醛和高锰酸钾熏蒸长久，污染往往越来越严重，预防办法可把各种药品交替使用，过一段时间（约五周）用石灰擦洗一遍。实践证明，这样做效果很好。第五篇：幼儿园消毒方法幼儿园常用消毒的方法物理消毒：①开窗通风：每天通风2-3次，并且在30分钟以上。特别是白天开空调的时候。②紫外线消毒：每次消毒30分钟以上，必须在无人的情况下，避免紫外线对人眼睛和皮肤的灼伤，消毒后要开窗通风，驱散残留臭氧后才可进入室内。化学消毒：含氯消毒剂（消毒片），小桶和大桶都贴有标识，先放入清水到标识处，早上来园小桶放入半片消毒片，依次擦拭茶杯架、桌、椅、柜子、窗、墙壁。大桶泡放2.5片消毒片，消毒拖把，拖走廊、教室、厕所。注意：消毒片充分溶化并搅拌后才可使用。玩具消毒方法：塑料玩具清洗干净后用消毒液浸泡30分钟，再用流动水清洗干净，晾干。玩具一般每周消毒一次。席子消毒方法：每天用温水擦试。每周1-2次用消毒液擦，过20XX后再用清水擦一遍，晾干，以免幼儿皮肤受损。发生传染病的班级每天都必须消毒一次。桌椅消毒方法：幼儿桌子在进餐前20XX先用清水擦干净，从左到右，从上到下，再用消毒液擦（抹布半干），过20XX后用拧干的消毒抹布擦干。厕所消毒方法：抽水马桶、便池每天消毒2次，用消毒液擦，在幼儿午睡时和幼儿离园后进行。每班用木棍绑清洁球每星期擦试便池一次。托班用便盆的大便用一次消毒一次，小便的一天消毒2次（午睡和离园后）。被子、被套：每个星期提醒家长带回家晾晒，两个星期清洗一次。拖把、抹布、垃圾桶、扫帚：按各班的标识分开放好，用后及时清洁干净，晾干。垃圾桶每天及时倒，经常冲洗干净。幼儿衣服：衣物要折叠整齐，摆放整齐，并放在固定的地