胸腺肽的认识与对比

几种不同的胸腺肽药物当前第1页\共有66页\编于星期四\11点胸腺激素类免疫调节剂发展

----胸腺肽

胸腺肽最早是由雪兰诺公司从小牛胸腺提取的一种胸腺因子,1980年在意大利上市,尔后在欧美注册和临床。生产厂家已超过百余家，国家食品药品监督管理局（SFDA）已核准下发了389个注射剂生产批文，有8家企业生产口服制剂。胸腺肽的主要剂型有：冻干粉针剂、注射液、肠溶片、肠溶胶囊和胸腺肽氯化钠注射液5种。当前第2页\共有66页\编于星期四\11点胸腺激素类免疫调节剂发展

----胸腺肽但由于胸腺肽有效成分不明确、含量低、含致敏大分子蛋白，不符合WHO对免疫调节剂的五项标准（1、化学成分明确；2、易于降解；3、刺激适中；4、不致癌，致畸变；5、无累积毒性，无不良反应及后继作用），因而疗效低、安全性差，不良反应尤其是严重过敏反应频繁发生，由此引发了国家药品不良反应监测中心对该类药品进行通报。

当前第3页\共有66页\编于星期四\11点胸腺激素类免疫调节剂发展

----胸腺五肽在对胸腺素类药物的研制中，科学家通过化学合成的方法制造出了胸腺生成素Ⅱ，并在此基础上进一步开发了胸腺五肽。1985年，胸腺五肽在意大利以商品名“Timunox”上市。1997年，我国研发合成胸腺五肽，随后四川源基制药、北京双鹭药业、丹东医创药业等企业的产品也获准生产。截至2006年6月，SFDA已核准36家企业生产胸腺五肽原料药及其注射剂。胸腺五肽的主要剂型有：冻干粉针剂、注射液当前第4页\共有66页\编于星期四\11点胸腺激素类免疫调节剂发展

----胸腺肽α1(Tα1)

在上世纪末，意大利赛生公司的产品“胸腺肽α1”已进入我国市场，而且在国外也已在30多个国家获得批准上市。2002年底，SFDA批准成都地奥九泓、海南双成药业、海南中和药业生产原料药及注射剂。胸腺肽α1(Tα1)的主要剂型有：粉针剂当前第5页\共有66页\编于星期四\11点胸腺类制剂的发展

普通胸腺肽安全性大大提高

胸腺五肽

安全性和疗效都实现了质的飞跃胸腺肽α1被2010版药典收载：安全，有效，质量可控当前第6页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1受到高度认可被2010版中国药典收载胸腺肽、胸腺五肽未被收入进入《国家基本医疗保险、工伤保险和生育保险药品目录（2009年版）》胸腺肽、胸腺五肽、亮菌甲素、香菇多糖、免疫核糖核酸等均未进入进入《中国国家处方集》收录于肿瘤项下当前第7页\共有66页\编于星期四\11点

神经-内分泌系统主要通过神经纤维、神经递质和激素调节免疫系统功能；免疫系统则通过分泌多种细胞因子，反馈信息，调节神经-内分泌系统。

当前第8页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽类激素种类及功能当前第9页\共有66页\编于星期四\11点（一）氨基酸的结构通式天然氨基酸在结构上的共同特点为：(1).与羧基相邻的α-碳原子上都有一个氨基，因而称为α-氨基酸(2).除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的α-碳原子都为不对称碳原子,所以：A.氨基酸都具有旋光性。B.每一种氨基酸都具有D-型和L-型两种立体异构体。目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。当前第10页\共有66页\编于星期四\11点氨基酸的构型和存在形式构型（用D、L表示）：-氨基酸通式除甘氨酸，天然-氨基酸都是有旋光的，而且都是L型的。L型-氨基酸D型-氨基酸L-甘油醛当前第11页\共有66页\编于星期四\11点+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键（二）肽：肽键是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。当前第12页\共有66页\编于星期四\11点蛋白质的分子结构包括

一级结构(primarystructure)二级结构(secondarystructure)三级结构(tertiarystructure)四级结构(quaternarystructure)高级结构当前第13页\共有66页\编于星期四\11点蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构(Primarystructure）主要的化学键肽键，有些蛋白质还包括二硫键。当前第14页\共有66页\编于星期四\11点15202528AlaAspAlaAlaValAspThrSerSerGluThrThrLysAspLeuLysLysGluValValGluGluAlaGluAsnIleLysGlu--OHAc--胸腺肽α1化学合成的28个氨基酸组成的多肽,纯度>99.8%正常人血清浓度为400-1000pg/ml105当前第15页\共有66页\编于星期四\11点二、蛋白质的二级结构蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象

。

主要的化学键：

氢键

当前第16页\共有66页\编于星期四\11点

(二）主链构象的分子模型

-螺旋(-helix)

-折叠(-pleatedsheet)

-转角(-turn)无规卷曲(randomcoil)

当前第17页\共有66页\编于星期四\11点1.-螺旋左手和右手螺旋当前第18页\共有66页\编于星期四\11点2.-折叠①在-折叠中，-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm.②-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。③-折叠有两种类型。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。当前第19页\共有66页\编于星期四\11点3.-转角-转角在-转角部分，由四个氨基酸残基组成.四个形成转角的残基中，第三个一般均为甘氨酸残基．弯曲处的第一个氨基酸残基的-C=O和第四个残基的–N-H之间形成氢键，形成一个不很稳定的环状结构。这类结构主要存在于球状蛋白分子中。当前第20页\共有66页\编于星期四\11点超二级结构

αα；ββ；βαβ；βββ．

ααβββαβ（三）超二级结构和结构域当前第21页\共有66页\编于星期四\11点三、蛋白质的三级结构整条肽链中全部氨基酸残基的三维空间的排布位置。四、蛋白质的四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。当前第22页\共有66页\编于星期四\11点

一级结构→二级结构→三级结构→亚基→四级结构总结：蛋白质分子从一级结构到高级结构当前第23页\共有66页\编于星期四\11点当前第24页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1与普通胸腺肽的比较注：胸腺肽实际有效成分就是胸腺肽α1，但含量极低（不到0.6%）当前第25页\共有66页\编于星期四\11点从工艺上说，普通胸腺肽以动物胸腺为原料，经过捣碎、提取、离心、过滤，分装。普通胸腺肽所标示的20mg、50mg等，实际上是总蛋白含量。也就是含氮物质总量。在新的试行标准中，为提高质量，规定必须含有一定比例的胸腺肽α1。这实际上从另一方面证明普通胸腺肽中实际真正起作用的是胸腺肽α1，但可惜的是普通胸腺肽中胸腺肽α1的含量只有0.6%左右。当前第26页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1与胸腺五肽的比较注：胸腺五肽给药方式和剂量国内外相差极大，缺少循证医学证据支持当前第27页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1与胸腺五肽最大的不同在于胸腺肽α1是人体内源性物质，与体内的胸腺肽α1结构和活性都完全一致，都是28肽。而胸腺五肽却不是人体内源性物质，只是胸腺生成素II的一个片段，胸腺生成素II是49肽，五肽却是只有5个氨基酸的寡肽，连蛋白质的3级结构都不具有，很难说其具有胸腺生成素II的全部活性。可能正因为如此，五肽仅在中国和意大利被批准上市。当前第28页\共有66页\编于星期四\11点15202528AlaAspAlaAlaValAspThrSerSerGluThrThrLysAspLeuLysLysGluValValGluGluAlaGluAsnIleLysGlu--OHAc--ZADAXIN(胸腺肽α1)注射液化学合成的28个氨基酸组成的多肽,纯度>99.8%正常人血清浓度为400-1000pg/ml105当前第29页\共有66页\编于星期四\11点T1－在活体外的免疫调节功能细胞因子及受体方面T细胞的增生及分化方面

白介素2（IL－2）的浓度干扰素（IFN－）的浓度高亲和力IL－2受体的表达干扰素（IFN－）的浓度CD3＋，CD4＋及CD8＋细胞的增生由地塞大米松诱发的胸腺细胞凋亡激活NK细胞活性CFU的前体细胞数目当前第30页\共有66页\编于星期四\11点当前第31页\共有66页\编于星期四\11点当前第32页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1增加Th1亚型Andreoneetal(2001)JournalofViralHepatitis8:194-201*p<0.05CD4Th1细胞分泌IL-2,INF

gTh2细胞分泌IL-4,IL-1******HCV阳性病人的外周单核细胞经胸腺肽α1培育Th1在抗肝炎治疗中是清除病毒所必需当前第33页\共有66页\编于星期四\11点当前第34页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1增加NFkB转录因子表达当前第35页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1(胸腺肽α1)启动人体免疫机制来抗病毒、抗癌增加靶细胞MHC-I类抗原的表达直接抑制病毒的复制直接抑制肿瘤细胞生长的作用增产NK,CD4+,CD8+,Th1

增加IL-2,INF-γ,IL-2R胸腺肽α1的双重作用机制免疫调节机制直接抗病毒、肿瘤机制当前第36页\共有66页\编于星期四\11点STEMCELLNKCELL胸腺肽α1作用机制靶细胞靶细胞CD4+T-CELLCD8+T-CELLIL-2,INF-γTh1CTL间接作用促进T细胞的增生和分化促进细胞因子的表达(IL-2、INF、IL2R）直接作用增强MHC-I类抗原表达直接抑制病毒的复制增强谷胱苷肽的水平当前第37页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1的作用机制当前第38页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1的临床应用1、在慢性病毒性肝炎治疗中的应用2、在肿瘤治疗中的应用3、在免疫功能低下人群中作为疫苗增强剂的应用4、在其他领域中的应用各种免疫功能缺陷和异常患者往往伴随有免疫功能低下,因此胸腺素α1在临床上已开始被应用于治疗重症感染、慢性肾炎、红斑狼疮、风湿或类风湿性关节炎及艾滋病等疾病的治疗中,且均表现出不同程度的临床疗效.当前第39页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽a1的合成工艺胸腺肽a1是一条由28个氨基酸构成的肽链，人工合成时，是将首个氨基酸固定于固体树脂上，通过28步反应(含末端乙酰化一步)，将其他27个氨基酸一个个分别按序列接上，然后将整条肽链自树脂上“切割”下来，得到的粗品再进入纯化阶段，经多级次色谱柱分离，最终得到纯度极高的胸腺肽a1单体。以上是对采用固相多肽合成技术生产胸腺肽a1的最简单描述。首先，任何化学反应均受化学平衡常数的制约，每一步反应收率均<100％；假设肽合成反应的每一步收率均达到90％，则连续28步反应之后终产品收率仅5％(0．9的28次方)；其次，在经历如此多步合成反应之后，终产品中混杂的各步反应中间体种类近乎天文数字，为得到高纯度胸腺肽a1单体，势必进行多级多次纯化，每次纯化过程又都涉及产品收率问题，目标肽分子在纯化过程中的损失在所难免。当前第40页\共有66页\编于星期四\11点磁共振成像（MRI）证实一：在氨基酸5～8间有β样折叠结构进口胸腺肽α1具有独特的二维空间结构当前第41页\共有66页\编于星期四\11点磁共振成像（MRI）证实二：

在氨基酸17～24间形成的样螺旋形结构进口胸腺肽α1具有独特的二维空间结构当前第42页\共有66页\编于星期四\11点相互作用后可引发产生一连串的生物学效应：1.增强淋巴细胞分泌白介素（IL-2）、及干扰素；2.增强淋巴细胞表膜IL-2受体的表达作用；3.增强NK细胞的蓦集及杀伤能力；4.增强混合性淋巴细胞的反应。

二维空间结构是与淋巴细胞膜结合首要条件当前第43页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1中所有氨基酸均为左旋形式当前第44页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1与仿制品的区别当前第45页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1与胸腺五肽的区别当前第46页\共有66页\编于星期四\11点HBV的治疗选择胸腺肽α1®核苷酸类似物THTS干扰素NKTC+++-+++--拉米夫定LamivudineRegevA,SchiffER.DrugtherapyforhepatitisB.AdvInternMed2001;46:107-35.当前第47页\共有66页\编于星期四\11点

乙肝病毒本身并不引起明显的肝细胞损伤。肝细胞的损伤主要是由免疫病理引起的，也就是机体的免疫反应在清除HBV的过程中造成了肝细胞的损伤。当前第48页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1显著诱导PBMC细胞2’，5’—寡腺甘酸合成酶（2-5OAS）的增加；联合二者更有相乘的作用（2-5OA是一种抗病毒蛋白）。(mmol/ml)p<0.05*p<0.05*p<0.01*2-5OAS胸腺肽α1通过增加Th1,降低Th2免疫反应治疗慢乙肝胸腺肽α1显著诱导2-5OAS的增加*A.Gramenzietal.Hepatology,Vol42,No.4,suppl.1,2005当前第49页\共有66页\编于星期四\11点干扰素a诱导PBMC细胞分泌IL-4。胸腺肽α1显著降低IL-4水平，而干扰素诱导IL-4分泌增加。*与控制组比较**与干扰素组比较(pg/ml)IL-4(10³U/ml)(10ug/ml)p<0.05*p<0.01***A.Gramenzietal.Hepatology,Vol42,No.4,suppl.1,2005胸腺肽α1通过增加Th1,降低Th2免疫反应治疗慢乙肝胸腺肽α1显著降低IL-4的生成当前第50页\共有66页\编于星期四\11点单用治疗慢乙肝（荟萃分析）治疗结束随访6—12月时评估;完全反应：ALT复常+DNA阴转或HbeAg+DNA当前第51页\共有66页\编于星期四\11点慢乙肝的联合治疗当前第52页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽1与拉米夫定联合治疗慢性乙型肝炎近期疗效研究*p=0.3780**p=0.3780#p=0.4000##p=0.0012^p=0.0344^^p=0.0119中山医科大学附属第三医院传染科：林炳亮黄桂梅杨绍基等当前第53页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1与干扰素的持续反应率比较。本研究再次证实胸腺肽α1停药后的持续反应率增加。31％48％46％27％胸腺肽α1干扰素胸腺肽α1治疗e抗原阳性慢乙肝的中国报告停药6个月后胸腺肽α1持续应答率仍保持良好*YouJ.etalWorldJGastroenterol.2006Nov7(41):6715-21当前第54页\共有66页\编于星期四\11点小结内毒素炎性介质细菌感染肝细胞损伤T1微循环障碍当前第55页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1治疗重症肝炎的免疫调节研究

（黄自存等）N＝18T11.6mg隔天或BIW1月20001800160014001200100080030201000.1250.0268.911.28.823.818.721.781320041208治疗前后有显著差异，所有指标P＜0.01g/ml当前第56页\共有66页\编于星期四\11点当前第57页\共有66页\编于星期四\11点当前第58页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1联合干扰素治疗慢丙肝（荟萃分析）

治疗结束随访6月

ALT复常RNA（--）ALT复常RNA(--）1.Rasi8/1511/155/156/152.Sherman13/3113/33

3.Moscarella12/17

5/17

4.Sherman*4/103/10

5.Rasi**4/64/63/63/66.徐道振*6/196/197/197/197.马为民等6/106/10

8周大桥等14/2014/20

汇总67/12857/11320/5716/40*对INF无应答或复发病人**不能耐受INF副作用者，单用Tα1，为期一年当前第59页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α1适用于下列感染人群细菌引起的高热持续不退病人免疫低下创口难愈病人有严重感染史者年老体弱的患者欲行重大手术者当前第60页\共有66页\编于星期四\11点胸腺肽α