细胞生物学实验四课件

动物染色体标本的制备与分析

线粒体的活体染色与观察实验四当前第1页\共有25页\编于星期四\21点动物染色体标本的制备与分析P60当前第2页\共有25页\编于星期四\21点

1.掌握动物骨髓细胞染色体标本制备的基本过程及基本原理。2.观察染色体的数目以及形态特征。当前第3页\共有25页\编于星期四\21点细胞周期？提问秋水仙素的作用？细胞周期分为哪两个期？各又分为什么期？当前第4页\共有25页\编于星期四\21点

骨髓细胞具有高度分裂能力，分裂相多，不需经体外培养就可直接观察到分裂细胞。经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，便可制作出理想的染色体标本，是研究动物细胞遗传学的好材料。再经过低渗、固定、滴片就可以获得大量的骨髓细胞染色体分裂相。当前第5页\共有25页\编于星期四\21点1.颈椎脱臼法处死小白鼠，取股骨，去掉两端，暴露骨髓腔；

3.低渗处理：37摄氏度水浴中静置15min。使细胞涨大，染色体分散，在滴片时细胞才能破裂，染色体才能平铺在载玻片上。

2.收集骨髓细胞:取低渗液5ml，用注射器吸取低渗液进行反复冲洗，直至股骨发白；当前第6页\共有25页\编于星期四\21点4.预固定：取新鲜固定液0.5ml加入可以使细胞表面轻微固定，以防止细胞结团。5.离心：2500rpm，5min。

6.

固定：弃上清，留沉淀，加固定液5ml，吹打混匀，静置8min。7.离心：同上使得染色体形态更为清晰可见当前第7页\共有25页\编于星期四\21点8.制细胞悬液：弃上清，留沉淀，加固定液吹打混匀。9.滴片：冰载玻片，高度30cm以上。10.微烤：酒精灯火焰上方来回5次。使细胞充分破裂，暴露染色体，并充分附着、铺散开，便于制得分散清晰的中期染色体。当前第8页\共有25页\编于星期四\21点11.染色：姬姆萨染色8min。12.冲洗、晾干。13.镜检：先在低倍镜下找到分散较好的染色体，再置于高倍镜下观察。当前第9页\共有25页\编于星期四\21点实验结果10倍镜下当前第10页\共有25页\编于星期四\21点高倍镜下当前第11页\共有25页\编于星期四\21点12当前第12页\共有25页\编于星期四\21点1.从第2步，即“取股骨”开始操作；2.注意识别股骨，与身体骨骼相连接的骨段；3.剪股骨两头时，一点一点试着剪。4.固定液现配先用，甲醇：冰醋酸=3:1；5.滴片一定要有高度，30cm以上，越高越利于细胞破裂，染色体分散。当前第13页\共有25页\编于星期四\21点6.微烤时注意部位和时间，不能烤干。7.禁止将小白鼠残体丢入水槽中。当前第14页\共有25页\编于星期四\21点线粒体的活体染色与观察P25当前第15页\共有25页\编于星期四\21点1.掌握线粒体的活体染色方法和原理；2.了解光镜下线粒体的形态。当前第16页\共有25页\编于星期四\21点活体染色？提问线粒体功能？染料？当前第17页\共有25页\编于星期四\21点线粒体是细胞进行呼吸作用的场所。细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。詹纳斯绿B是线粒体的专一性活体染色剂。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。

当前第18页\共有25页\编于星期四\21点与《实验指导》稍有区别，1.取普通载片；滴1、2滴0.02%詹纳斯绿B染液于载玻片上。2.牙签刮取口腔粘膜上皮细胞，牙签尖上可见小颗粒。3.染色：将牙签于染液内滚动，放置5min。4.镜检：染色后盖盖玻片，先低倍镜以下观察，找到清晰的口腔黏膜上皮细胞后在高倍下观察。当前第19页\共有25页\编于星期四\21点实验结果当前第20页\共有25页\编于星期四\21点当前第21页\共有25页\编于星期四\21点当前第22页\共有25页\编于星期四\21点1.取材是这个实验内容的关键，刮取口腔粘膜上皮细胞时部位要准确、用力不要太大。2.盖盖玻片：这里不用头发丝，用镊子夹住盖玻片的一侧，以另一侧斜着接触载玻片和液体，顺势放下。若液滴较小，可适当加一点液体，以防干枯。当前第23页\共有25页\编于星期四\21点操作流程图颈椎脱臼法处死小白鼠滴1滴詹纳斯绿B于载玻片上取股骨，剪掉两端。取5ml低渗液于离心管中，用注射器吸取低渗液将骨髓冲洗到离心管中染色5min盖上盖玻片37℃水浴中低渗处理放置15min预固定，加入固定液0.5ml，离心2500rpm,5min镜检姬姆萨染色8min，冲洗，晾干,镜检弃上清，加入固定液5ml，吹打混匀，静置8min离心，2500rpm,5min，弃上清，加0.3ml固定液，吹打混匀制成细胞悬液冰载玻片，30cm以上滴片,微烤牙签刮取口腔黏膜上皮细胞涂于染液中当前第24页\共有25页\编于星期四\21点值日生的值日标准1.清点实验器材，每组有肾形盘1个，剪刀、镊子各1把，注射器、离心管各1个，一次性吸管1根，剪刀是否擦干晾在试管架上。2.抹布（大纱布）、手套是否洗净晾在试管架上。