微生物实验报告

Xxx农业大学兽医微生物学试验汇报葡萄球菌和链球菌分离判定姓名＿＿＿＿＿＿＿＿＿学号＿＿＿＿＿＿＿＿＿专业班级＿＿＿＿＿＿＿＿＿指导教师＿＿＿＿＿＿＿＿＿葡萄球菌和链球菌分离判定摘要目标：对A.B两种菌种进行分离判定主要方法：经过分离培养形态观察生化试验进行判定关键词葡萄球菌链球菌分离判定引言葡萄球菌，属微球菌科葡萄球菌属，革兰氏阳性菌。对生长环境要求不高在普通培养基上生长良好，需氧或碱性厌氧，最适培养温度为37摄氏度。最适PH7.4.在普通培养基上形成湿润光滑隆起边缘整齐圆形菌落。多数菌株能分解葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖，产酸不产气;致病菌株能够分解甘露糖，还能够产生血浆凝固酶。有致病性葡萄球菌主要是金黄色葡萄球菌，致病性葡萄球菌判定可经过色素颜色，溶血性，过氧化氢酶试验（触酶试验），凝固酶试验，甘露糖发酵试验等判定链球菌，革兰氏阳性菌，老龄菌或被吞噬细菌或展现阴性。呈圆形或卵圆形，直径为0.5～1.0微米，常呈链状或成双排列。通常致病性链球菌链比非致病性链长。个别菌株有鞭毛，有菌株有菌毛，幼龄培养物可形成荚膜。大多数为兼性厌氧菌，少数为厌氧菌。致病菌对营养要求比较高，普通培养基中生长不良。在加入血液血清葡萄糖等培养基中生长良好。在血琼脂平板上可长成直径约0.1～1.0mm,灰白色表面光滑,边缘整齐小菌落.多数致病菌落可形成溶血现象.强致病菌可形成β溶血.产生α溶血环链球菌致病性不强,为条件致病菌.γ型溶血菌落周围无溶血现象,通常不治病.1.材料与方法1.1材料1.1.1两种未知试验菌种A菌B菌1.1.2培养基制作材料（1）药品牛肉膏蛋白胨NacI琼脂0.1mol/L和1mol/LNaoH溶液,0.1mol/L和1mol/LHCI溶液。（2）仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌器。（3）玻璃器材移液管试管烧杯量筒锥形瓶培养皿玻璃漏斗。（4）其余物品钥匙称量纸ph试纸记号笔脱脂棉线绳纱布试管塞牛皮纸注射器等。1.2方法1.2.1普通培养基制作方法（1）称量：牛肉膏1克，蛋白胨2克NaCI1克蒸馏水200毫升于烧杯中。（2）溶解：加热至沸腾，边加热边用玻璃棒搅拌。（3）调整PH：利用配制好HCINaOH溶液来调整，用ph试纸测ph，直到调整至7.5为止。（4）分装：将配置好培养基分装入锥形瓶试管中，塞上试管塞或者锥形瓶塞，用牛皮纸包装，扎紧瓶口，在121摄氏度温度下高压蒸汽灭菌20—30min。（5）倒板:将经过高压蒸汽灭菌成有培养基锥形瓶和培养皿放在试验台上，点燃酒精灯。右手托着锥形瓶底，左手拔下塞子在酒精灯火焰上稍加灼烧，然后左手拿着平板，靠近酒精灯火焰，将锥形瓶口在酒精灯火焰上稍加灼烧。然后将培养基分别倒入两个平板中，使培养基后约三毫米。倒完后将瓶塞再加灼烧后再塞上。等候十五分钟。培养基充分冷却后即可接种。1.2.2血琼脂培养基制作方法（1）称量：牛肉膏1克，蛋白胨2克NaCI1克蒸馏水200毫升于烧杯中。（2）溶解：加热至沸腾，边加热边用玻璃棒搅拌。（3）调整PH：利用配制好HCINaOH溶液来调整，用ph试纸测ph，直到调整至7.5为止。（4）分装：将配置好培养基装入锥形瓶30毫升，塞上塞子，牛皮纸扎紧瓶口，在121摄氏度温度下高压蒸汽灭菌20—30min。（5）制备血液：用注射器对兔子心脏进行抽血，抽血之前注射器先抽取0.3毫升柠檬酸钠作为抗凝剂，抽取5毫升兔血。抽血之前，应先确定兔子心脏位置，左侧第三四肋骨之间下针，先用碘酒棉擦再用酒精棉擦拭消毒。抽血完成要对试验台进行消毒。（6）制作血平板：将抽取血用拔掉针头注射器沿锥形瓶瓶壁注入经过高压蒸汽灭菌已冷却至50摄氏度左右培养基中。轻轻摇匀后快速按照普通培养基倒板方法倒如两个培养基中。1.2.3细菌划线分离培养基经过高压蒸汽灭菌之后，倒入平板，用经过灭菌接种环等工具在无菌条件下接种菌株与培养基上。第一次划线:将接种环置于酒精灯火焰上先竖烧后横烧。然后左手拿起培养有菌种培养基A，将灼烧后接种环先戳平板上面水蒸气降温，再挑菌。左手放下菌种A，拿起盛有培养基平板再靠近壁内侧划线数道。第二次划线：将上一步接种环灼烧冷却后，从上次划线部位引一条线至临侧，角度约为120度。（如图1-1所表示）第三次第四次划线均与第二次划线一致，参考（2）此步骤需要将A接种一个普通培养基平板，一个血平板。B菌种接种一个普通培养基平板，一个血平板。图1-1图1-12.结果与分析2.1普通琼脂平板2.1.1普通琼脂平板A.B两菌种生长情况如图2-1;2-22-12-22.1.2血琼脂平板血琼脂平板平板上AB两菌种生长情况2-32-42.3革兰氏染色2.3.1基本原理在经过革兰氏染色，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌则展现红色。所以，能够经过革兰氏染色区分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。2.3.2器材（1）试剂；草酸铵结晶紫，革兰氏碘溶液，乙醇95％沙黄水溶液，生理盐，水香柏油（2）器材：载玻片，光学显微镜，接种环，酒精灯等2.3.3试验步骤将载玻片置于酒精灯火焰上灼烧去除蜡层，待冷却后两端各滴一滴生理盐水，用灼烧后接种环挑取菌涂抹于载破片生理盐水里。烘干后用草酸铵结晶紫染1-2min是，水洗。革兰氏碘液染色1-3min，水洗。乙醇脱色30s，水洗。沙黄复染30s，水洗。吸水纸拭干后在光学显微镜下，最终用油镜观察镜检。2.3.4试验结果与分析葡萄球菌与链球菌均为革兰氏阳性均呈紫色，如图2-5；2-6所表示2-52-6触酶试验（过氧化氢试验）2.4.1基本原理葡萄球菌能够产生过氧化氢酶（接触酶），此酶能够分解过氧化氢使其分解产生水和氧气。所以能够从有没有气泡判别是否存在过氧化氢酶，进而判别出存在葡萄球菌。而链球菌不产生过氧化氢酶所以不产气。2.4.2试验器材3％过氧化氢溶液，经过灭菌小试管，玻璃棒。2.4.3试验步骤取2ml3％过氧化氢与小试管中，将玻璃棒置于酒精灯火焰上灼烧灭菌冷却后蘸取菌种置于小试管中，观察现象。2.4.4试验结果与分析在试验中，A菌没有产生气泡，触酶阳性。而B菌产生了气泡所以为触媒阴性。经过试验，初步断定A为链球菌，B为葡萄球菌。结果如图2-72-72.5凝固酶试验2.5.1试验原理致病性葡萄球菌能够产生凝固酶，是一个分泌至菌体外游离固酶，作用类似凝血酶原物质，能够产生使血清凝结2.5.2试验器材（1）试剂：0.5ml兔血清葡萄球菌（2）器材：小试管接种环酒精灯2.5.3试验步骤用经过酒精灯火焰灼烧灭菌接种环挑取疑为葡萄球菌菌种，置于盛有兔血清小试管中，充分混匀置于36左右环境中，培养2-4h，查看结果。2.5.4试验结果与分析B菌血清凝固，凝固酶阳性。如图2-8.2-82.6甘露醇发酵试验2.6.1试验器材甘露醇发酵管接种环酒精灯2.6.2基本原理金黄色葡萄球菌发酵甘露糖产酸，使试剂管里指示剂颜色由紫变成黄色。2.6.3试验步骤用用酒精灯灼烧过接种环挑取疑似葡萄球菌，置于甘露醇发酵管中，混匀后做好标识密封37摄氏度培养18-24h。2.6.4试验结果与分析经过观察B菌培养基由紫变黄，且产生浑浊。故为甘露醇试验阳性。结果见图2-92-93.讨论3.1兔子抽血量不够因为兔子数次抽血，造成血量不足或产血跟不上，造成在心脏跳动最快地方却抽不出血。3.2油镜观察不到