AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程

. .. .........文件名称文件名称AB7500PCR颁发部门制订人：复核人：批准人：质保部制订日期：复核日期：批准日期：执行日期版本1.0编号SOP04006制作份数 份发送部门修订人修订缘由修订容版本修订日期修订记录目的：确保荧光定量PCR仪能够正确和正常的使用，保证扩增及结果分析的标准化、规化。围：适用于AB7500荧光定量PCR定义：无职责：荧光定量PCR仪使用人员负责本规程的实施。质保部对本规定的有效执行担当监视检查责任。容：5.115～30℃，45～75%。仪器操作依次翻开电脑显示器和电脑主机的电源开关，进入Windows界面。接着翻开AB7500107500Softwarev2.38PCR96PCR8PCR**96PCR**〔8PCR8PCR96PCR板无需配平〕再次按压托盘使其滑入仪器。5.2.6UG-63-6245″〕5cycle〔95°，10″6°，35″〕40cycle，在6°时收集荧光信号HEFAM信号，20μl反响体系。Setup-PlateSetup-DefineTargetsandSamplesTargetNameTarget1FAM；点击AddNewTarget，将增的Target1改成HEX，点击Reportee下拉菜单，选择VIC。在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell20〔20μl体系HoldingStagDeleteSelectedCyclingStage中的ofCycles5Step110Step2634563AddStageCycling，在CyclingStageNumberofCycles40Step110Step2623562 点击Save下拉菜单下的SaveAsTamplate，文件名输入UG-63-62，保存在默认ab7500-config-tamplates已有扩增参数模板Home界面中点击Templat其扩增参数就是95°10′〔95°10″645″×5cycle〔95°10″635″〕×40cycle6〔HEFAM信号ReactionVolumePer反响体系。Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples8Sample1；UGT1A1*6HEX，UGT1A1*28FAM。Run-AmplificationPlotSTARTRUN20230101-1〔当日日期+当日上机次数，例:2023年1月1日第1次上机编号为20230101-，保存在默认文件夹中，开头运行。结果分析PCRBaselineStartEnd〔用户可依据实际状况自行调整，Start值可以在～1、End值可设在～2，Threshold值R〕推举设定为AnalyzePlateCt试验完毕后取出反响管〔切勿翻开管盖，挨次关闭AB7500软件、定量PCR仪电源，关闭电脑。5.3仪器维护5.3.1每周维护5.3.1.1检查计算机磁盘空间。如需要，将试验文件归档或备份。5.3仪器维护5.3.1每周维护5.3.1.1检查计算机磁盘空间。如需要，将试验文件归档或备份。至少每周检查一次计算机磁盘空间。假设硬盘的可用空间缺乏其总容量的20%，应将较旧的数据传输到备份存储设备上保存。5.3.1.27500Instrument305.3.1.35.3.1.3用无绒布块〔不脱毛〕7500Instrument〔注：切勿使用有机溶剂清7500Instrument〕5.3.1.4使用75%酒精浸泡反响管托架〔晾干后放回仪。每月维护〔可执行一次背景校准以检查是否存在污染物〕运行磁盘清理和磁盘碎片整理。至少每月一次。当Windows操作系统显示消息提示执行碎片整理时。切勿同时运行磁盘治理有用工具和至少每月一次。当Windows操作系统显示消息提示执行碎片整理时。切勿同时运行磁盘治理有用工具和7500Real-TimePCRSoftware。5.3.3每半年〔6〕维护5.3.3.1检查灯具状态。7500Software中，选择Instrument→LampStatus/ReplacementLampStatus/ReplacementCondition–表示以下其中一种状况：–GoodLampStatus/ReplacementCondition–表示以下其中一种状况：–Good–灯具工作良好，不需要更换。单击Close。–Failed–必需更换灯具。单击Close5.3.4.3–ChangeSoon2023Close，然后打算是否更换灯具。假设打算更换，请依据5.3.4.3步骤更换卤素灯。Usage(Hours)–灯具已照明的总小时数。LampCurrent–灯具的输出电流，以安培为单位(ADateLastReplaced–上次更换灯具的日期。②在执行一次运行之前或期间，7500Software消息消息描述Warning–Cannotdetectsufficientcurrentfromlamp.Eitherlampisnotinstalled依据5.3.4.3properlyorneedstobereplaced.续该运行。Warning–Cannotdetectsufficientcurrent7500Softwarefromlamp.Eitherlampisnotinstalled中灯具电流下降到可承受水平之下。在依据properlyorneedstobereplaced.运行。在消息框中单击OK，检查仪器日志，然后更换灯具。WarningThelampusagehasexceeded2023hr.2023Werecommendreplacingthelampsoonto单击CancelRun，然后更换灯具，或者单击ensureoptimalassayperformance.ContinueRun。重运行ROI、背景、光学和染料校准。执行目标区〔ROI〕校正。执行背景校准。执行光学校准。执行染料校准。执行RNaseP5.3.4其它维护任务〔需要时执行〕5.3.4.1样本块污染去除。5.3.4其它维护任务〔需要时执行〕5.3.4.1样本块污染去除。7500Instrument见缘由，在此状况下，一个或多个反响孔会持续表现出特别的高信号。留意！切勿移去设备上的盖板。7500Instrument中没有用户可安全修理的组件。假设疑心存在问题，请联系生产商效劳代表。①全程戴上一次性无粉手套操作。②找到样本块中受污染的反响孔〔参阅5.4.2.13。7500Real-TimePCRInstrumenta.按压托盘门，将其翻开。b.取出反响板和托盘支架。c.关闭托盘门。以确定角度向托盘右侧施加压力。a.按压托盘门，将其翻开。b.取出反响板和托盘支架。c.关闭托盘门。以确定角度向托盘右侧施加压力。④手动降低样本块：④手动降低样本块：a.a.7500SoftwareInstrument→InstrumentMaintenanceManager。b.InstrumentMaintenanceManagerROI选项卡中，单击StartManualCalibration。c.在ROIInspectorMoveBlock。d.ROIInspectorBlockDown”时，单击Done。7500Real-TimePCRInstrument，然后拔下其电源电缆。允许仪器冷却157500Real-TimePCRInstrumenta.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔，然后推动以解开门栓。b.翻开仪器前门。b.翻开仪器前门。⑦抬起门栓，然后将受热的护盖门推到仪器的反面。⑦抬起门栓，然后将受热的护盖门推到仪器的反面。⑧使用少量的双蒸水，清洁样本块中被污染的反响孔：a.用移液管吸取少量双蒸水并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次，以冲洗反响孔。b.抽吸并滴入反响孔中的双蒸水数次，以冲洗反响孔。c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。c.将用过的双蒸水水吸入废液瓶中。d.使用棉花拭子，擦试每个被污染的反响孔的壁。e.使用无绒布料，吸出剩余的双蒸水。⑨7500⑨7500Real-TimePCRInstrument将受热的护盖门拉到仪器的正面。抬起门栓，然后将受热的护盖门紧固到穿插杆。7500Real-TimePCRInstrument7500Instrument。通过执行背景校准运行确认已消退污染〔参阅5.4.2。95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反响孔：95%乙醇溶液清洁样本块中受污染的反响孔：a.用移液管吸取少量95%乙醇溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。c.将用过的乙醇溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用双蒸水冲洗反响孔。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用双蒸水冲洗反响孔。重复步骤⑧至⑫，以冲洗样本块的反响孔，并验证已去除掉污染物。假设污染照旧存在，重复步骤②至⑦，然后使用10%漂白剂溶液清洁样本块中受污染的反响孔：a.10%漂白剂溶液并滴入每个受污染的反响孔中。b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用去离子水冲洗反响孔。重复步骤⑧至b.抽吸并滴入反响孔中的溶液数次，以冲洗反响孔。c.将用过的漂白剂溶液吸入废液瓶中。重要！使用漂白剂溶液或乙醇溶液清洁反响孔之后，应始终使用去离子水冲洗反响孔。重复步骤⑧至⑫，以冲洗样本块的反响孔，并验证已去除掉污染物。假设仍有污染，请与生产商技术支持联系。确保受热盖门完全关闭并上闩。假设没有，则7500Software移动PCR〔更换或移动光学器件的任何部件后，必需执行ROI校准、背景校准、光学校准、染料校准以及RNaseP〕更换卤素灯。①全程戴上一次性无粉手套操作。7500Instrument，然后拔下其电源电缆。允许仪器冷却7500Instrument，然后拔下其电源电缆。允许仪器冷却15a.留意！灼热。7500Instrument和灯具灼热！灯具在使用中会变得格外灼热。在处理灯具15分钟，并戴上无粉防护手套。b.重要！为避开灼伤及缩短灯具的使用寿命，处理灯具时请戴上一次性无粉手套。c.留意！7500Instrument12V、75W③翻开7500Instrument的检查门。a.将薄型螺丝刀插入检查门边缘处的键销孔，然后推动以解开门栓。b.翻开仪器前门。④从仪器中取出灯具：④从仪器中取出灯具：a.向下滑动灯具释放杆。b.用手紧紧地抓住卤素灯并向上提，使灯具从安装槽口中脱出。a.向下滑动灯具释放杆。b.用手紧紧地抓住卤素灯并向上提，使灯具从安装槽口中脱出。abab⑤查看灯具并确定有无故障迹象〔有故障的灯具壁上通常有碳黑层。⑥将灯具安装至仪器上：⑥将灯具安装至仪器上：a.向上滑动灯具释放杆。a.向上滑动灯具释放杆。b.b.⑦关闭仪器前门。⑦关闭仪器前门。7500Instrument。⑨翻开ROIInspector在7500Software中，选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManagerROI选项卡中，单击StartManualCalibration。ROIInspectorLampControl→Idle。当仪器运行时，通过检查门上的缝隙观看，确保灯具发光，然后单击Done。7500Software中选择Instrumen→LampStatus/ReplacemenResetLampLampTimer，然后单击OK。假设灯具不发光，则替换的卤素灯可能有缺陷。重更换灯具。如果再次更换灯具后仍不发光，检查仪器的保险丝是否存在故障〔果再次更换灯具后仍不发光，检查仪器的保险丝是否存在故障〔参阅第71页。更换灯具后，按挨次执行以下校准。请参阅：•5.4.1目标区〔ROI〕校准•5.4.2背景校准•5.4.3光学校准•5.4.4染料校准•5.4.5验证仪器性能5.3.4.475005.3.4.47500Instrument7500Real-TimePCRInstrument〔更换保险丝时请使用类型和额定值与仪器原始保险丝一样的经认可的保险丝〕②全程戴上一次性无粉手套操作。③关闭仪器电源，并拔下电源插头。④使用平口螺丝刀从仪器上旋松并卸下保险丝座。⑤将每一个保险丝从其保险丝座中取出12.5A、250V、5×20mm注：电压和电流额定值见保险丝座。⑦安装保险丝座。⑧插上电源插头，然后开启仪器。假设仪器接通了电源，说明保险丝已安装成功。注：保险丝损坏可能是由仪器供电电源波动导致。为了防止连续消灭故障，可以考虑安装电气保护设备，例如UPS5.3.4.5更Windows操作系统。5.3.4.67500Software。5.3.4.67500Software。5.3.4.7监控仪器状态〔使用FunctionTest7500Instrument状况下不需要执行功能测试LifeTechnologies〕7500Software中，选择Instrument→Function-Test。②依据需要执行功能测试。要测试：全部组件–单击All全部组件–单击AllTests，然后等候软件执行全部功能测试。一个或多个特定组件–单击以下其中一项或多项。USB–测试7500Real-TimePCRInstrument(USB)连接。7500USB–测试7500Real-TimePCRInstrument(USB)连接。7500Software7500Real-TimePCRInstrumentCCD7500Real-TimePCRInstrumentCCD则表示测试通过。FilterWheel7500Real-TimePCRInstrument的过滤轮。假设过滤轮把握器运行正确版本的固件，则表示测试通过。Shutter7500Real-TimePCRInstrument确版本的固件，则表示测试通过。Lamp7500Real-TimePCRInstrument的固件，则表示测试通过。ThermalCycler7500Real-TimePCRInstrument的热循环仪样本块。假设热循环仪的把握器运行正确版本的固件，则表示测试通过。7500Software/失败状态，并供给结果描述。③完毕测试时，单击Close。③完毕测试时，单击Close。仪器校准目标区〔ROI〕校准全程戴上一次性无粉手套操作。从贮存在冷冻柜的光谱校准套件中取出ROI校准反响板。ROI〔5出ROI校准反响板。反响孔中的荧光染料具有光敏感特性。长时间曝光可降低染料在反响板中的荧光。5.4.1.4从包装袋中取出出ROI校准反响板。反响孔中的荧光染料具有光敏感特性。长时间曝光可降低染料在反响板中的荧光。5.4.1.4从包装袋中取出ROI校准反响板。将光学薄膜留在反响板上。不要丢弃存放ROI包装袋。假设贮存于原始包袋中，反响板最多可重复使用三次。5.4.1.5振荡ROI52分钟。ROI确认ROI校准反响板每个反响孔中的液体均位于反响孔底部。假设不是，则以更高的转速及更长的时间离心反响板。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。确保放置时反响板在反响孔板适配〔装入标准反响板，使A12凹口位置位于托盘的右上角〕5.4.1.9以确定角度向托盘右侧施加压力，从而关闭托盘门。〔装入标准反响板，使A12凹口位置位于托盘的右上角〕5.4.1.9以确定角度向托盘右侧施加压力，从而关闭托盘门。5.4.1.10执行自动ROI7500Software中，选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager。②在InstrumentMaintenanceManagerROI选项卡中，单击StartCalibration。③依据向导的指示，完成校准。ROICalibrationSetupSetup–显示ROI校准设置说明。单击Next提示可以翻开Run选项卡。Run–单击STARTRun–单击STARTRUN可以开头校准流程并显示处理消息。单击Next提示可以翻开AnalysisAnalysi–指明校准状态Passed/Faile。5.4.1.13“排解ROI执行手动ROI7500Software中，选择Instrument→Instrument7500Software中，选择Instrument→InstrumentMaintenanceManager。②在InstrumentMaintenanceManagerROIStartManualCalibration③在ROIInspector对话框中〔如图1：a.ExposureTime2048。b.选择Filter〔滤光器1。1④单击Snapshot，生成一ROI⑤确定ROI〔以以下图所示为未饱和以及过饱和的图像在不过饱和的前提下，必需尽可能光明〔生成在不过饱和的前提下，必需尽可能光明〔生成ROI校准时，假设反响孔过饱和，则显〕可以含有但不是必需含有红色像素〔表示饱和。未饱和正常饱和过度饱和可承受不行承受⑥假设⑥假设ROIROIExposureTime后单击Snapshot后单击SnapshotROI图像。假设无法获得可承受的图像，5.4.1.13“排解ROI⑦单击GenerateCalibration7500Software采集一截图然后显示一个消息框或ROI图像：假设软件显示： 执行：单击OK。ExposureTime〔参阅5.4.1.11a。重复步骤③和⑤。或ROI图像格外模糊或者无法成功校准。 请参阅5.4.1.13“排解ROI校准故障。可承受的校准图像注：在全部反响孔四周消灭绿色圆圈，表示反响孔成功校准。注：绿色圆圈表示反响孔位置的目标区已足够亮。

验证以下各项：WellsFound96。成功校准–WellsFound96。在ROI问题/病症可能缘由行动问题/病症可能缘由行动当全部滤光器的FilterMasksLoaded都是OK的四周显示绿色圆圈。⑧单击⑧单击SaveCalibration。软件保存滤光器1软件保存滤光器1产生的ROIROIInspector的FilterMasksLoadedO”1⑨对其余滤光器重复步骤③至⑧ExposureTime重置为204当全部滤光器的FilterMasksLoaded都显示OKROI⑩点击Done。①取出校准反响板：拆卸反响板〔留意！灼热。仪器工作期间，样本块温度可能超过100°C。假设刚使用过仪器，在样本块恢复至室温之前，请勿触摸样本块〕①取出校准反响板：a.按压托盘门，将其翻开。b.取出校准反响板。c.按压托盘门，将其关闭。②将校准反响板放入其包装套中。假设要执行背景和光学校准：a.8小时，将ROIa.按压托盘门，将其翻开。b.取出校准反响板。c.按压托盘门，将其关闭。②将校准反响板放入其包装套中。假设要执行背景和光学校准：a.8小时，将ROIROIb.其次天将放入包装套的反响板放回贮存在冷冻柜的光谱校准套件中。c.3d.重要！执行ROI校准后，也必需执行背景校准、光学校准、染料校准以及仪器验证。5.4.1.13排解ROIROIROI校准失败样本块可能位于降假设CCDControl/SettingsBlockROI图像模糊低的位置。被正确推入。假设7500Instrument认盖栓处于锁定位置。3.假设ROI7500Instrument态〔参阅5.3.3.1，然后，假设需要时，更换灯具〔5.3.4.3。5.4.25.4.2背景校准5.4.2.15.4.2.1全程戴上一次性无粉手套操作。从贮存在冷冻柜的光谱校准套件中取出预备好的背景反响板。让背景反响板温度上升至室温〔至少需要5分钟。从包装袋中取出背景反响板〔原始包装套，背景反响板最多可重复使用三次〕55.4.2.6用板式离心机将反响板离心2分钟。反响板必需充分混合并离心。确认反响板每个背景反响孔中的液体均位于反响孔底部。假设不是，则以更长的时间离心反响板。5.4.2.7按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。确保放置时反响板在反响孔板适配5.4.2.6用板式离心机将反响板离心2分钟。反响板必需充分混合并离心。确认反响板每个背景反响孔中的液体均位于反响孔底部。假设不是，则以更长的时间离心反响板。5.4.2.7按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。确保放置时反响板在反响孔板适配〔样本块可能位于其“上升”位置，锁定了托盘门位置。要降低样本块，选择Instrument→CalibrateCalibrate，然后退出ROIInspector〕5.4.2.85.4.2.8在7500SoftwareInstrument→InstrumentMaintenanceManagerInstrumentMaintenanceManager中，选择Background选项卡。在Background选项卡中，单击StartCalibration。依据向导的指示，完成校准。BackgroundCalibrationOverview–显示校准相关信息。Setup–显示背景校准设置说明。单击Next提示可以翻开Run选项卡。Setup–显示背景校准设置说明。单击Next提示可以翻开Run选项卡。Run–单击STARTRUNNext提示可以翻开Analysis选项卡。Analysis–指明校准状态(Passed/Failed)。5.4.2.12“排解背景校准故障注：开头校准之前，仪器可能暂停一段时间〔最多可达10分钟温度。校准完成后，取出校准反响板：①按压托盘门，将其翻开。②取出校准反响板。③按压托盘门，使其滑入仪器。5.4.2.11〔重要！不③按压托盘门，使其滑入仪器。5.4.2.11〔重要！不3〕5.4.2.12排解背景校准故障问题/病症可能缘由行动背景校准失败背景反响板上的一个或多1.使用一样的背景反响板重复执行校准。个反响孔产生的光谱超过2仪器的最高限度。应板重复执行校准。3的说明，确定污染源。5.4.2.13如何确定污染包括记号笔中残存的油墨、一次性手套洒落的粉末及灰尘。欲确定污染来源和位置：①在查看原始数据时，选择反响板布局中数块连续的较小区域，以找出受污染反响孔①在查看原始数据时，选择反响板布局中数块连续的较小区域，以找出受污染反响孔的位置。的位置。180°，然后再次执行背景校准。③重复步骤①以找出污染物的位置。假设步骤①和③中找到的包含污染物的反响孔位置：一样–则说明样本块中含有污染物。请依据“5.3.4.1样本块污染去除”的说明，除去样本块中的污染物。相反–则说明背景反响板中含有污染物。丢弃当前使用的背景反响板，并使用背景反响相反–则说明背景反响板中含有污染物。丢弃当前使用的背景反响板，并使用背景反响板执行背景校准程序。假设更换背景反响板并且取出样本块的污染后校准失败：7500板执行背景校准程序。假设更换背景反响板并且取出样本块的污染后校准失败：7500Instrument。⑤依据本章的说明，执行背景校准程序。⑥校准完成后，选择反响板布局中的全部反响孔。⑦查看光谱图谱中的峰值。假设峰值：7500Instrument5.4.3光学校准5.4.3.1全程戴上一次性无粉手套操作。5.4.3.2从贮存在冷冻柜的光谱校准套件中取出ROI5.4.3光学校准5.4.3.1全程戴上一次性无粉手套操作。5.4.3.2从贮存在冷冻柜的光谱校准套件中取出ROI5.4.3.3让ROI〔至少需要5。5.4.3.4从包装袋中取出ROI5〔重要！不要丢弃存放反响板的包装袋。假设将ROIROI〕〔ROIROI5.4.3.5，以削减在反响板在室温时形成的冷凝。假设ROI校准反响板位于冷冻柜中，转至步骤5.4.3.2。5.4.3.52ROIROI板每个反响孔中的液体均位于反响孔底部。假设不是，则以更长的时间离心反响板。5.4.3.6按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。确保放置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。以确定角度向托盘右侧施加压力，从而关闭托盘门。5.4.3.7在板每个反响孔中的液体均位于反响孔底部。假设不是，则以更长的时间离心反响板。5.4.3.6按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。确保放置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。以确定角度向托盘右侧施加压力，从而关闭托盘门。5.4.3.7在7500SoftwareInstrument→InstrumentMaintenanceManagerInstrumentMaintenanceManagerOpticalOpticalStartCalibration。依据向导的指示，完成校准。OpticalCalibrationOverview–显示校准相关信息。Overview–显示校准相关信息。SetupSetup–显示光学校准设置说明。单击Next提示可以翻开Run选项卡。Run–单击STARTRUNNext提示可以翻开Analysis选项卡。Analysis–指明校准状态(Passed/Failed)。5.4.2.12“排解背景校准故障注：开头校准之前，仪器可能暂停一段时间〔10分钟注：开头校准之前，仪器可能暂停一段时间〔10分钟度。5.4.3.9取出校准反响板：①按压托盘门，将其翻开。②取出校准反响板。③按压托盘门，使其滑入仪器。5.4.3.10将校准反响板放入其包装套中。将放入包装套的反响板放回贮存在冷冻柜的光谱校准套件中。〔3〕5.4.4染料校准5.4.4.1全程戴上一次性无粉手套操作。5.4.4.2从冷冻柜中取出光谱校准套件，并从套件取出全部染料反响板。5.4.4.3将光谱校准套件放回冷冻柜贮藏。5.4.4.1全程戴上一次性无粉手套操作。5.4.4.2从冷冻柜中取出光谱校准套件，并从套件取出全部染料反响板。5.4.4.3将光谱校准套件放回冷冻柜贮藏。5.4.4.4让染料反响板温度上升至室温度〔约需5。〔重要！在马上运行之前，请勿从包装袋取出染料反响板。在每个染料反响板上，反响孔中的荧光染料具有光敏感特性。长时间暴露在光线中会降低反响板的荧光信号强度〕注：假设将7500Real-TimePCRInstrument67500Real-TimePCRInstrument37500SoftwareInstrument→InstrumentMaintenanceManagerInstrumentMaintenanceManager中，选择DyeMaintenanceManager中，选择Dye选项卡。在Dye屏幕上，选择SystemDyeCalibration。StartCalibration。5.4.4.6依据向导的指示，完成每个反响板的校准〔重要！在每个校准中，向导将单独指示。必需独立设置、运行和分析每个染料反响板〕DyeCalibrationOverview–显示校准相关信息。当软件提示猎取需要的材料时，选择要校准的染料。SetupNext提示可以翻开Run①①②a②b③5.4.4.10RunRun–单击STARTRUNNext提示可以翻开Analysis选项卡。Analysis–指明校准状态(Passed/Failed)。当软件提示分析从每个染料反响板采集的光谱时，核实校准的状态：Passed－7500Instrument5.4.4.11Failed－7500Instrument5.4.4.15Failed－7500Instrument5.4.4.15“排解染料校准故障注：开头校准之前，仪器可能暂停一段时间〔最多可达10分钟，以允许受热的护盖到达正确温度。5.4.4.75〔包装袋。假设贮存于原包袋中，反响板最多可重复使用3次。用板式离心机将反响板离心2分钟。反响板必需充分混合并离心。确认反响板每个背景反响孔中的液体均位于反响孔底部。假设不是，则以更长的时间离心反响板。检查并确保要装入的染料反响板与在7500SoftwareInstrument→Calibrate，器中被正确对齐。关闭托盘门。以确定角度向托盘右侧施加压力〔注：假设无法翻开托盘，Instrument→Calibrate，然后退出ROI然后退出ROIInspector〕5.4.4.11由于向导对每个染料校准单独供给指示，所以请对校准的每个染料执行以下程序。①验证校准状态：①验证校准状态：滤光器滤光器峰值(nm)染料/光谱1-520FAMSYBRGreen2-550JOEVICPassePasse－7500Instrument校准通过。转到b。Failed－7500Failed－7500Instrument5.4.4.15“排解染料校准故障②核实染料光谱的分组：a.在反响板布局中，选择反响板的孔。b.检查原始数据。对于每个光谱，请确认峰值：7500Instrument无不规格光谱峰值。a.在反响板布局中，选择反响板的孔。b.检查原始数据。对于每个光谱，请确认峰值：7500Instrument无不规格光谱峰值。消灭在染料的正确通道上。假设某光谱不符合上述标准，请参阅5.4.4.15“排解染料校准故障注：在含有一样染料的各反响孔中，光谱位置和峰值位置的差异是由于不同反响孔之间的光学属性及激发能存在微小差异而引起的。③假设全部光谱均可承受，则单击Next。5.4.4.12〔留意！灼热。仪器工作期间，样本块温度可能超过10°C仪器，在样本块恢复至室温之前，请勿触摸样本块〕①按压托盘门，将其翻开。②取出校准反响板。③按压托盘门，将其关闭。〔7500③按压托盘门，将其关闭。〔7500Real-TimePCRInstrument67500Real-TimePCRInstrument3〕5.4.4.13在依据指示将染料反响板取出后，单击Finish。5.4.4.145.4.4.1-580 CY3染料 NED染料 TAMRA染料-610 ROX染料 TEXASRED染料5 -670 CY5染料5.4.4.155.4.4.15排解染料校准故障问题/病症 可能缘由 行动一个或多个原始光•光谱校准反响板未充分别谱到达或低于校准 心。的可检测阈值。 •光谱校准反响板含有旧试剂或试剂体积缺乏。假设正运行定制光谱校准反响板，染料可能浓度缺乏。

卸载7500Instrument并查看光谱校准反响板的反响孔。假设反响孔中的液体不是：位于反响孔底部，请将反响板离心更长时间，然后重复执行校准。体积相等，则说明反响板未密封致使试剂挥发。请将其丢弃，并运行另一反响板。假设光谱校准反响板显示正常，则丢弃该反响板并运行另一块反响板。假设问题照旧存在，请与生产商联系。一个或多个原始光•样本块或光谱校准反响板含谱超过 7500 有荧光污染物。Instrument的最高•假设正运行定制光谱校准反响限量。 板，染料可能浓度过大。光谱在一个以上的样本块或光谱校准反响板含滤光器中含有峰有荧光污染物。值。

注：假设正运行定制光谱校准反响板，请创立另一反响板但要增加产生缺乏信号的染料的浓度。5.4.2“背景校准”操作，以确认是否存在污染物。假设背景校准未显示样本块含有污染物，则光谱校准反响板可能含有污染物。注：假设正运行定制光谱校准反响板，请创立另一反响板但要降低超过可检测限量的染料的浓度。5.4.55.4.5验证仪器性能5.4.5.1全程戴上一次性无粉手套操作。5.4.5.25.4.5.1全程戴上一次性无粉手套操作。5.4.5.2冷冻柜中取出TaqManRNaseP96-WellInstrumentVerificationPlate，然后让反响板温度上升到室温〔5。从包装袋中取出RNaseP52分钟。反响板必需充分混合并离心。确认液体位于反响板每个反响孔底部。假设不是，则再次以更长的时间离心反响板〔重要！留意不要让RNaseP〕RNaseRNasePRNaseP物〔1250、2500、5000、10,00020,000、两个未知重复组〔500010,000〕和阴性比照反响孔(NC)。按压托盘门，将其翻开。将反响板装入仪器中的反响板架。确保放置时反响板在反响孔板适配器中被正确对齐。关闭托盘门。以确定角度向托盘右侧施加压力。7500SoftwareInstrument→InstrumentMaintenanceManager。InstrumentMaintenanceManager中，选择RNasePRNasePStartRNasePRNasePRun。5.4.5.7依据向导的指示，完成校准。RNasePOverview–显示校准相关信息。SetupSetup–显示RNaseP运行设置说明。单击Next提示可以翻开RunRunRun–单击STARTRUNNext提示可以翻开Analysis选项卡。Analysis–指明运行状态(Passed/Failed)。注：开头运行之前，仪器可能暂停〔最长10分钟，以允许受热的护盖到达正确温度。注：7500Software完成RNasePAnalysis5.4.5.8RNaseP5.4.5.8RNasePRun向导的AnalysisPassed–7500Instrument