动物胚胎移植-胚胎移植的操作程序（动物繁殖技术）

胚胎移植的操作程序供体选择

供体应该是良种母畜，最好是青壮年母畜，具备遗传优势，生产性能或经济价值高，谱系清楚，健康无病，营养良好，体质健壮。

经产母畜应在生殖机能恢复正常后方可作为供体。受体选择

受体母畜可选用非优良品种的个体，但要求体格健壮，营养状况良好，处于未孕状态，无生殖系统疾病。青年母畜和经产母畜均可作为胚胎移植受体。

在一般情况下，难以找到足够数量的自然发情母畜作受体，所以多采用对受体母畜进行同期发情处理。同期发情利用某些外源激素人为控制并调整一群母畜发情周期的过程，使之在预定的时间内集中发情，以便有计划地合理组织胚胎移植所进行的同期化处理方法，也称同期发情。超数排卵在母畜（供体）发情周期的某一时期，用外源性的促性腺激素处理，从而促使其卵巢上较正常有更多个卵泡同时发育，并且能够同时或准同时排出多个具有受精能力的卵子，这一技术称为超数排卵。供体的超数排卵（图片来源于网络）供体的发情鉴定与配种

结束超数排卵处理后，密切观察供体的发情征状，每天早、中、晚至少观察3次。为了获得较多发育正常的胚胎，应根据育种的需要，使用活率高、密度大的优质精液，输精次数增加到2~3次，两次输精间隔为8~10h。胚胎的采集

胚胎的采集:在超数排卵动物发情配种后一定时间把受精卵或早期胚胎从超排配种动物的生殖道中冲洗出来，并收集在器皿内。

冲洗时必须考虑排卵时间、配种时间，根据发育阶段确定胚胎的具体位置，才能得到较高的收集率。胚胎的采集

胚胎采集方法：

（1）胚胎手术法：适用于羊、猪和其他中小动物；

（2）胚胎非手术法：适用于牛、马等大动物；

（3）胚胎离体生殖道回收法：小鼠、大鼠等实验动物。123畜别排卵时间发育速度2细胞4细胞8细胞桑葚胚囊胚期进入子宫牛发情结束后10~12h1~1.52~2.52.5~34~67~83~3.5绵羊发情开始后24~30h1~1.51.5~22~2.53~45~73~4猪发情开始后35~45h1~1.52.5~33~44~55~62~2.5兔交配后10~11h11~1.51.5~22.53~43~4排卵时间和胚胎发育速度123胚胎的采集手术法：通过手术操作直接从雌性动物输卵管或子宫角回收受精卵或不同发育阶段早期胚胎。

优点：回收胚胎的数量较多

缺点：操作复杂，易引起输卵管粘连，严重造成不孕。123胚胎的采集从子宫角顶端冲洗输卵管：牛、羊、兔从输卵管伞处冲洗输卵管：猪、马从子宫角上端向基部冲洗（张忠成，2004.家畜繁殖学）123胚胎的采集非手术法：

指借助胚胎非手术回收器械，经阴道和子宫颈回收子宫角胚胎的方法。该方法简单易行，对生殖器官伤害程度小。123（图片来源于网络）胚胎的采集123胚胎的采集胚胎离体生殖道回收法：

先将动物处死，分离输卵管或子宫角，在离体条件下采集输卵管内受精卵和早期卵裂阶段胚胎，或子宫角内不同发育阶段胚胎。123（图片来源于网络）胚胎的采集子宫角分离输卵管分离胚胎检查和鉴定

胚胎的检查和鉴定：在体视显微镜下，从回收的冲胚液中检出胚胎，经过胚胎净化处理和形态质量鉴定，选出符合胚胎移植或科学研究要求的胚胎，并对其质量和活力进行评定（或等级分类）。胚胎检查胚胎的检查：

（1）非手术法：收集回收液，静置后用缓慢吸除上部液体，或者在滤网之上吸去上部冲胚液，将最后剩余的50毫升左右回收冲胚液、倒入大检卵杯中，用胚胎吸管吸去液体表面泡沫后在体视显微镜下检出胚胎。胚胎检查胚胎的检查：

（2）手术法：由于使用的冲胚液总液体量较少，可以直接将集卵杯或将其他容器收集的回收液倒入检卵杯，在体视显微镜下检出胚胎。

（3）离体生殖道法回收胚胎：直接将表面皿放置在镜下检出胚胎。胚胎鉴定胚胎的鉴定：

（1）形态学法：观察胚胎的形态、卵裂球的形态、卵裂球的大小与均匀度、色泽、细胞密度与透明带间隙以及细胞变性等情况，将胚胎进行质量分级。

根据胚胎的形态特征将胚胎分为A（优）、B（良）、C（中）、D（劣）四个等级，只有A和B级胚胎可以用于鲜胚保存和远距离运输。A级B

级C

级D

级胚胎分级胚胎鉴定（图片来源于网络）级别标准A级胚胎发育阶段与胚龄一致，形态完整，轮廓清晰，呈球形，分裂球大小均匀，结构紧凑，色调和透明带适中，无游离的细胞和液泡（或很少），变性细胞比例<10%。B级胚胎发育阶段与胚龄基本一致，轮廓清晰，分裂球大小基本一致，色调和透明带及细胞密度良好，可见到一些游离的细胞和液泡，变性细胞比例10%~30%。C级胚胎发育阶段与胚龄不太一致，轮廓不清晰，色调变暗，结构较松散，游离的细胞和液泡较多，变性细胞比例30%~50%。D级有碎片的胚胎，细胞无组织结构，变性细胞占胚胎大部分，约75%。其中，A、B、C级胚胎为可用胚胎，D级为不可用胚胎。胚胎分级标准胚胎鉴定胚胎的鉴定：（2）荧光活体染色法：将二醋酸荧光素（FDA）加入待鉴定的胚胎中，培养3~6min，活胚胎显示荧光，死胚胎无荧光。（3）测定代谢活性法：即通过测定胚胎的代谢活性，鉴定胚胎的活力。其方法是将待鉴定的胚胎放入含有葡萄糖的培养液中，培养1h后，测定葡萄糖的消耗量，每培养1h消耗葡萄糖2~5μg以上者为活胚胎。胚胎的保存

胚胎的保存是指将胚胎在体内或体外正常发育温度下，暂时贮存起来而不使其活力丧失；或将其保存于低温或超低温情况下，使细胞处于新陈代谢和分裂速度减慢或停止，一旦恢复正常发育温度，又能继续发育。

目前，哺乳动物胚胎的保存方法有常温保存、低温保存和超低温冷冻保存。胚胎的保存（1）常温保存：将胚胎置于15~25℃的培养液中保存。这种温度下胚胎能保存24h，随时间的延长其活力下降，此方法只能做短暂的保存和运输。（2）低温保存：将胚胎置于0~10℃保存，此时，胚胎卵裂暂停，代谢减慢。这种方法使细胞的某些成分特别是酶处于不稳定状态，保存时间较短。但低温保存操作简便，设备简单，适宜野外应用。（3）超低温保存:将胚胎置于超低温环境中（-196℃