试验脑脊液检验

脑脊液检验实验一脑脊液理学检查（目的）掌握脑脊液理学检查的内容，方法。（标本）新鲜脑脊液。（操作）1．观察颜色肉眼观察脑脊液颜色变化，分别以无色，乳白色，红色，棕色，或黑色，绿色等文字如实描述报告。2．观察透明度肉眼观察脑脊液透明度变化。正常脑脊液清晰透明，病理情况下可出现不同程度浑浊，可分别以“清晰透明”。“微浑”，“浑浊”等如实报告。3．观察凝块或薄膜轻轻倾斜试管，肉眼仔细观察有无凝块或薄膜。正常脑脊液无凝块或薄膜，脑膜炎时可形成凝块或薄膜，分别以“无凝块”，“有凝块”，“有薄膜”等如实报告。（注意事项）

当标本颜色或透明度改变不明显时，应在灯光下以白色或黑色为背景仔细观察，同时观察有无凝块。

怀疑为结核性脑膜炎时，标本应在2~4℃环境中静置12~24h再观察脑脊液表面有无薄膜形成。参考值：无色，清晰透明，放置后无凝块或薄膜形成。实验二脑脊液显微镜检查（目的）掌握脑脊液显微镜检查的内容，方法。（器材）显微镜，改良牛鲍计数板，微量吸管。刻度吸管，小试管。（试剂）生理盐水或红细胞稀释液，冰乙酸，白细胞稀释液，瑞氏染液或瑞—吉染液。（标本）新鲜脑脊液。（操作）

细胞总数计数直接计数法（适用于清晰透明或微浑脑脊液）充池：微量吸管吸取混匀的脑脊液，充入血细胞计数板的上下2个计数池。计数：静置2~3min，低倍镜下计数2个计数池内四角和中央大方格共10个大方格内的细胞数。计算：10个大方格内的细胞总数即为每微升脑脊液细胞总数，再换算稀释计数法（适用于浑浊的脑脊液）稀释：如标本细胞过多，可根据标本内细胞多少，用生理盐水或红细胞稀释液对标本进行一定倍数稀释。充池：用微量吸管吸取混匀后的稀释脑脊液充入1个计数池。计数：静置2~3后，低倍镜计数1个计数池内四角和中央大方格共5个大方格内的细胞数。计算：根据5个大方格内细胞总数及稀释倍数，计算每升脑脊液的细胞总数。白细胞计数直接计数法（非血性清晰透明或微浑脑脊液）除去红细胞：在小试管内加入冰乙酸1~2滴，转动试管，使内壁粘附少许冰乙酸后倾去，滴加混匀的脑脊液3~4滴，混匀，放置数分钟，使红细胞破坏。充池：计数：计算：稀释计数法（浑浊脑脊液）稀释破坏红细胞：根据标本内白细胞多少情况，用白细胞稀释液对标本进行一定倍数的稀释，混匀，放置数分钟，破坏红细胞。充池：用微量吸管吸取混匀稀释后的脑脊液充入1个计数池。计数：静置2~3min后，低倍镜计数1个计数池内的四角和中央大方格内的白细胞数。计算：根据5个大方格内的白细胞总数和稀释倍数，计算每升脑脊液的白细胞总数白细胞分类计数直接分类法

白细胞计数后，转换高倍镜，根据细胞的形态和细胞核形态进行直接分类，共计数100个白细胞（包括内皮细胞），分别计数单（个）核细胞（包括淋巴细胞，单核细胞，内皮细胞）和多（个）核细胞（粒细胞系）的数量，结果以单核细胞百分比和多核细胞百分比报告。如白细胞不足100个，可直接写出单核细胞和多核细胞具体数，若白细胞数不足30个，可不做直接计数而改用涂片染色分类计数涂片染色分类法

若直接分类不易区别细胞时，可将脑脊液以1000r/min离心5min，取沉淀物，制成均匀薄片，置于室温或37℃恒温箱内尽快干燥，瑞氏或瑞—吉染色后，油镜下进行分类计数，结果报告与血液白细胞分类计数报告方式相同。若见激活型单核细胞（比普通单核细胞大，胞质边缘趁、呈花边状，胞质内有空泡），转化型淋巴细胞（形态似异型淋巴细胞）及室管膜细胞（形态似大淋巴细胞）应计入分类的百分比中（注意事项）直接白细胞计数时，也可用微量吸管吸取冰乙酸后尽可能全部吹出，仅使吸管内壁粘附少许冰乙酸，再吸取少量混匀的脑脊液于吸管中，数分钟后吸管内红细胞溶解，然后再充池计数。细胞计数时，如发现较多红细胞有皱缩或肿胀等异常现象，应如实报告，以协助临床医生鉴别是陈旧性出血或新鲜出血。血性脑脊液中的白细胞必须校正后才有价值白细胞校正数=脑脊液白细胞未校正数—脑脊液红细胞数×血液白细胞数/血液内红细胞数细胞涂片时，为了使细胞容易粘在玻片上，可取沉淀的细胞悬液2滴，加血清1滴，混匀后涂片。涂片染色分类时，如见内皮细胞或异常细胞，则另行描述报告，必要时用巴氏或HE染色查找肿瘤细胞。实验结束后，血细胞计数板用0.75％（V/V）乙醇浸泡消毒60min，忌用酚浸泡，以免损坏计数板。方法学评价脑脊液细胞计数和分类目前一般任用手工显微镜法。白细胞直接分类法简单，快速，但属粗略分类，其准确性差，且细胞较小，初学者难把握，尤其是陈旧性标本的细胞变形，分类更困难，误差较大。涂片染色分类法分类详细，结果准确可靠，尤其是可以发现异常细胞如肿瘤细胞。该法被推荐使用，但其操作较复杂，费时。血液分析仪也可进行脑脊液细胞计数和白细胞分类，此法简单，快速，但标本尤其是病理性，陈旧性标本中的组织，细胞的碎片以及细胞变形等都可以影响细胞分类和计数，故结果重复性，可靠性有待进一步探讨。另外，蛋白质含量高，尤其有凝块的脑脊液标本容易使仪器堵孔，故不推荐使用质量夫控制标本许采集嫁后应刺在1引h内数进行禁细胞缎计数袜，若农放置把太久店，细箭胞可今能凝由集成蔬团或躁破坏登，影慌响计觉数结险果。咏标本殿必须举混匀张方可滨充池班，否惨则影罗响计膨数结盏果因穿曾刺损可伤血江管，促引起农血性近脑脊半液，昆白细咱胞计且数结滨果必殃须校斧正，找以剔唤除因柔出血讲而带嚼来的谢白细篮胞。细胞描计数纠时应滴注意固新型报隐球络菌与麦白细怀胞，元红细巨胞区察别白细妇胞计略数直盗接法犬的试馋管或图吸管祥中的渴冰乙予酸要丸尽量寨去尽强，否歇则结叉果偏文低。若标疮本陈剥旧，邪细胞本变形劲时，置白细概胞直妖接分瘦类法秧误差府大，两推荐思用涂煮片染析色分滑类法涌分类嫁计数所。涂片辣染色纺分类旨计数拌时，猛离心日速度项不能恭太快顺，否微则细推胞形苦态受贸影响槐，有块条件剂的单筑位可除用玻质片离波心沉老淀法只，细得胞室半沉淀爆法等融收集择细胞雀。涂片末固定养时间匹不能乡丰太长，更白不能嗓高温造固定悼，以雷免细套胞皱卵缩。参考窜值①脑仆脊液系细胞腐总数迅：成鲜人（谜0~尚10漏）×挤106/L掘,儿睬童（斤0~淡15救）×蚂10舟6/疏L.②无卧红细辰胞，寸仅有获少数戴白细魔胞，皮以单剩个核诸细胞去为主炊，几把乎完债全为漆淋巴贵细胞木，偶股尔内登皮细钉胞。实验喇三滨脑脊网液蛋邮白质肿定性耗检查目的厚）腰掌仰握脑脊脊液页蛋白脆质定束性试厨验（涌潘迪炼试验穴）的朽方法躬。（原粒理）饺脑脊加液中屠球蛋若白与皂苯酚础结合腔，形说成不位溶性浓蛋白窝盐而渡产生聚白色根浑浊额或沉烛淀。（器催材）队小试捏管，泳刻度浊吸管秀，尖抹滴管交。（试孩剂）孤饱和痒苯酚猪溶液粥：取派苯酚兄10院ml挨（有戏结晶悟时，育先放衡入5寄6℃逃水浴渐箱中川加热蜓助溶柏），状加蒸数馏水野至1以00聚ml聚，充蚁分混仆匀，宏置入竿37扇℃温甘箱中较数小欲时，摊见底必层有帝苯酚样析出英，取态上层廉饱和令苯酚献溶液这于棕途色瓶滩中避肝光保盏存。（标胖本）余新鲜队脑脊构液。（操态作）1．肢加试辉剂邮取试广剂2前ml特于小乐试管省中。2．黑加标细本倘用尖匙滴管柱垂直衣滴加扔脑脊口液标陵本1穿—2倚滴。3．钱观察吉结果进在匆黑暗翼背景狗下立么即用甚肉眼取观察右结果鼓。4．伐判断脊结果（1悦）清屈晰透炮明，庭不呈初现云缠雾状爽为（签一）蔑。（2手）呈且微白尘雾状度，对企光不盐易看命见，似黑色镜背景樱下才狂能见荒到为炎（+询—）（3只）灰裹白色污云雾牧状为悉（+陶）。（4走）白浴色浑然浊或删白色咐薄云膝状沉确淀为兼（+恭+）葵。（5秘）白妈色絮扰状沉鸡淀或污白色参浓云讨块状截为（川++婶+）辞。（6弊）立帝即形少成白爬色凝起块为垂（+输++夜+）匆。注意絮事项当室推温在都10厨℃以棉下时欲，应砖将试旧剂保驰存在俭37犯℃温短箱中烂，否六则饱艇和度朋降低宝，可兰致假开阴性岸。试管院内径先以小雀为佳傅，一才般为院（1绑3+误-1舟）m思m，娘加入脂试剂元后立通即观缎察结袜果。标本旦中如努红细蒙胞过贩多，问应离艘心沉蹄淀取忧上清瓶液检忧测质量臣控制标本矛因穿害刺出姨血，腊有血似清蛋榜白混思入可垫引起铁假阳窜性。实验再中所摘用试渔管和盲滴管骂必须哥洁净份，否肝则易喘出现宇假阳语性。苯酚孤不纯脱可引现起假菠阳性句。室备温低栏于1尘0℃馆，苯佩酚饱纳和度广降低补可引弹起加谣阴性躬。人工梳配置趁含球棚蛋白情的溶宏液作敲阳性冒对照俗，