病毒感染诊断治疗和预防

第二十六章病毒感染的诊断检测病毒颗粒检测病毒成分（抗原、核酸）检测病毒抗体1第一节病毒的分离培养2

1、采集时间：用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本，应采集病人急性期标本。血清学检查的标本最好取双份。2、标本种类：根据不同病毒感染采集不同部位标本(如鼻咽拭子、脑脊液、血液、粪便或疱疹液)。

一、标本的采集31、标本运送：应立即送检，运送标本中注意冷藏。保存于含抗生素的运送液中。不能立即送检时应存放于-70℃低温冰箱或液氮内保存。2、标本处理：有杂菌标本应用高浓度抗生素处理（4℃）并离心。二、标本的处理和运送4细胞培养动物接种鸡胚接种三、分离培养5（一）细胞培养

是从机体中取出组织或细胞，模拟机体内的生理条件在体外进行培养，使之生存和生长。6倒置显微镜观察细胞7细胞培养的优点：来源方便，容易选择易感细胞。无免疫力，利于病毒生长。培养条件易于控制：可以用人工控制温度、气体、pH、培养基成分。接种量大：细胞可以大量生产，而且还可较久地持续培养。动物和鸡胚的接种均受数量、年龄、途径的限制。加速病毒分离过程：病毒分离采用细胞培养不仅阳性率高，而且分离过程可显著加速，早出结果。81、细胞类型原代细胞动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长。（人胚肺细胞，鸡胚细胞、猴肾细胞、兔肾细胞等）9二倍体细胞在体外连续培养50～60代仍保持其二倍染色体数目的细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。传代细胞能在体外连续传代，来自肿瘤细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。10

优点缺点用途原代细胞

多种V敏感来源困难分离二倍体细胞

多种V敏感诊断/疫苗制备来源易,50代传代细胞

无限传代，来源易致瘤性分离/鉴定/研究V112、病毒在细胞内增殖的指征（1）细胞的变化细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)：病毒在细胞内增殖后，可引起细胞形态学改变，如细胞肿胀、变圆、皱缩、融合或细胞聚集成葡萄串状，甚至细胞溶解或脱落等，这种可在普通光镜下看到的由病毒增殖引起的细胞形态变化，称为CPE。12细胞病变效应（CPE）1314定义：有些病毒感染细胞，在普通显微镜下可见胞浆或胞核内出现嗜酸性或嗜碱性，圆形、椭圆形或不规则形的斑块结构，称为包涵体。本质：病毒颗粒聚集体、病毒增殖留下的痕迹、病毒感染引起的细胞反应物。包涵体（inclusionbody）形成15意义：不障同的坛病毒南形成讽的包渴涵体期特征籍（大戏小、拒形态原、嗜分性等虚）各变异，坟故可浩作为山诊断纳依据态。如狂信犬病馒病毒睡在脑箱组织垂细胞鄙内形即成的公胞浆岩内嗜姿酸性膀的内辈基小卵体（Ne随gr麻ibo归dy），类可辅师助诊盒断狂丢犬病蜜。16包涵乱体17包涵找体形绒成18（2）红吼细胞习吸附娃现象某些教病毒乎感染娱的宿叠主细杰胞能此吸附衣脊椎援动物病的红烘细胞违。（3）干扰挠现象19最早皇的病赌毒培桥养方堤法；根据北病毒饱种类吸不同庆，选择障敏感缝动物洞及适洒宜接红种部席位。（二德）动近物接巩种20（三抓）鸡座胚培匹养21222324流感两病毒队分离量培养荡的最好旱方法唯是鸡军胚接涨种：初次低分离——羊膜居腔，传代吨培养——尿囊悉腔，然后券取羊叨水或脱尿囊匆液做血凝和血凝舟抑制试验仇鉴定江。25初步垮鉴定—血凝姐试验：羊水/尿囊仙液+鸡RB谅C红细聋胞凝骑集表明套可能杨有病益毒存寸在和么增殖救。确证—血凝遮抑制敢试验：已知酱流感旧病毒厌抗体+羊水/尿囊宋液+鸡RB接C无凝怎集凝扶集流感病毒增殖非流感病毒增殖26正常肉鸡红池细胞凝集窑红细搅胞27沉积凝集28四、转病毒阔的鉴盼定1、病悬毒种纠类与捉型别轻鉴定初步徐鉴定碌：动尽物感跨染范祥围及挨潜伏捉期、饭对鸡俯胚的昏敏感雪性、本细胞胳形态办变化踏类型距、红稿细胞仍吸附杠、病兵毒干万扰现扛象、户血凝像性质芝、理肿化性套质（兼核酸拘类型会测定及、大俱小形抢态、躁乙醚蹲敏感纱试验尿、耐特酸试升验）恰等。最后拜鉴定段：主攀要是墓血清敢学方娃法（北中和步试验赤、补寻体结做合试葡验、汇血凝任抑制雁试验亩、IF选A和EL鸣IS妙A等）峰和分耳子生辣物学咏方法蝇。292、病准毒感签染性执测定50粮%组织扑培养片感染类量（50刷%螺ti泼ss巷ue误c泛ul辩tu棚re贸i柳nf月ec脾ti奴ve枕d散os浇e，TC除ID50）：引起坦半数仇培养无细胞歉发生纪病变众（CP董E）的病校毒量支。蚀斑播形成抓单位（pl姨aq径ue蜓f巨or裕mi萌ng薯u叫ni丹t，PF嗓U）：在细源胞培猛养表判面覆昆盖一霸层半毁固体霉物质剧使细萄胞病纪变形毕成蚀钓斑。30病毒猜标本悔（充犬分稀热释）↓单层黎细胞↓37疼℃，60圾mi因n，吸附恳，洗逝涤覆盖矿琼脂↓37察℃，3～5d观察律蚀斑侨（中围性红/结晶慰紫染消色）PF剑U/视ml：定量牺测定技病毒信感染跪性311、光还学显薯微镜悠检查饥：两检查罚包涵菌体2、电狱子显眼微镜平检查冬：如轮秆状病沾毒、照冠状棕病毒辜等五、形态校学检企查32轮锁状殊病睛毒33第二轧节迹检测汤病毒揉抗原免疫饮荧光织检测溪（IF污A）放射利免疫裂测定砍（RI盐A）酶免史疫技虫术（EI捧A）等34第三乏节色检测旷病毒茄抗体1、中和艇试验鉴：中和伏试验孝是指劣病毒浆在活富体内辨或细胞培养逮中被羽特异旅性抗煮体中惯和而演失去盈感染篮性的萍一种皱试验委。可用慢来检翼查患节病后苍或人租工免狗疫后愤机体昆血清出中抗洗体的氏增长喊情况孝，也引可用护来鉴泪定病踢毒或扬研究杠其抗吸原结克构。外中和议抗体面特异破性高柜，维幻玉持时颤间较逼长，夫因此炎流行填病学冠常用世此法虚。352．血凝田抑制丧试验：许多铃病毒应能凝衔集鸡栽、豚假鼠、裹人等环的红贷细胞叙，称膏为血宽凝现私象。妻这种肺现象荒能被她相应杏抗体划所抑扣制，略称血客凝抑粮制试乓验。虚常用喜于含坝血凝垫素的家病毒寺（如邪流感止病毒蜡、乙耍脑病平毒）虎的辅招助诊充断和妙流行厕病学冰调查赚。3．补体轻结合译试验：可作向为近抵期感络染的巡寿指标染。4．EL陆IS识A：可检企测多掌种病序毒抗刊体，陪应用害广泛奸。36第四谨节重检测伴病毒戚核酸核酸失分子皮杂交问技术PC侄R如HB糟V、HC倒V、HS想V、CM挖V等的渴检测捆。37标本她采集分离陵培养准鉴定快速狭诊断鸡胚丹培养血凝请试验血凝节抑制鸽试验细胞向培养CP勇E电镜泪检测中和限试验免疫越荧光TC叙ID50测定Pf沾u测定动物蚕接种发病海情况中和禽试验免疫配学检维测ID50测定LD50测定形态只学电镜孕观察往病毒局颗粒光学绩显微炕镜观素察包卡涵体病毒腰成分殃检测抗原贼检测EL员IS采AIF鼠ARI第AWB核酸编检测核酸违电泳核酸映杂交PC市R基因搞芯片基因段测序抗体写检测中和荡试验EL贯IS滴AIF扑ARI眯AWB病毒群感染购的检匪查程障序38本章相学习兴重点机内容病毒千感染裁的检查查标庄本采走集和焰送检陶原则病毒怒分离耐培养族的方胖法用于棋培养迫病毒徒的三匠类细驻胞的毅优缺鸣点及惭主要克用途病毒告在细躬胞内盘增殖咐的主读要指阁标病毒劲感染备的常随用诊侄断方涛法39第27章之病誓毒感角染的差治疗誓和预梦防40第一件节韵病室毒感岩染的宪治疗一、司抗病律毒药盲物1、核楚苷类盏药物虫：是常最早钓用于愈抗病钱毒治沸疗的职药物可。无环崭鸟苷(a咐cy梦cl温ov起ir，AC宗V)及丙醉氧鸟比苷(ga最nc滔ic痒lo膀vi怎r，DH曾PG成)，是赚新一汽代的次核苷扬类药白物。碘尿袄苷(I悔DU，商怎品名隔疱疹平净)；3－氮掌唑核泳苷（语病毒领唑）412、非叛核苷蹈类：如DN烘A多聚竖酶抑葡制物剩、逆荷转录厦酶抑席制物辫。3、病酒毒蛋纽奉白酶鼓的抑爹制物4、免简疫制输剂：现有暖病毒摄的特郑异性摊免疫路球蛋脆白（宪抗-HB柴s）、评人免括疫球贫蛋白超、单薯克隆效抗体到等。干扰暂素或干翁扰素低诱生拼剂以衣及细扒胞因耀子IL献-1那2，TN厨F等。425、其识他：服一批盲中草亿药等填天然球药物傲如黄肿芪、奋板蓝字根、存大青单叶等因具有瞎抑制疼病毒圈复制饲作用租。金刚紫烷胺淡可抑瓜制流允感病厌毒脱芒衣壳轿。43吸附受体掀抑制夹剂配体窑抑制肢剂中和逐抗体穿入金刚养烷胺脱壳生物初合成装配张、释涨放核苷桂类似元物干扰乒素酶抑吧制剂44Fi芹g躲A)胖H叠IV召a锋tt域ac壳h宿to张a及C茂D4胀r唯ec穗ep雕to勺r.B)院A在s季ol嚷ub有le辰s宜yn膨th梅et查ic哑v喝er右si颠on寨o茫f良th创e窝re尿ce烫pt装or糟c葡an包p乌re爹ve票nt幼a荷tt速ac恨hm勺en带t贩of帮t生he循v盆ir恩us食.45二、萄治疗膛性疫葡苗三、季基因昂治疗RN吨A干扰顺（RN幸A意in躺te挽rf钻er效en销ce，RN瞧Ai）反义驶寡核倍苷酸46第二梨节哭免适疫预陕防人工盲免疫能对于出预防例病毒伶性感酿染有池重要断意义怨。47一、合被动环免疫天然魔被动迅免疫温：通滥过胎层盘及叹哺乳汉。人工荡被动汽免疫治：常用畅的制圣剂有丙种偿球蛋朗白、摇免疫制血清等。命注射夏入丙爷种球欲蛋白便对肝仓炎、瓣麻疹呀、脊州髓灰蔑质炎纲等可掏紧急离预防义。含揭有高陡滴度西抗-HB诱s的乙轿型肝糊炎特开异性从免疫庙球蛋剪白可姓预防燃乙型停肝炎厅。48传统丧疫苗1）灭逆活疫凳苗2）减摊毒活阔疫苗Fi京g奴Ed下wa悬rdJe皮nn狮erva程cc长in转at波in匙g睡(i黄no回cu擦la鬼ti固ng缘瑞)诱Ja泡me料s孙Ph乳ip尊ps辽w劈燕it委h军co缩慧wp硬ox柄m亲at北er位ia赞l.二、旱人工议主动捷免疫49目前贯常用后的灭活趟疫苗有流新行性那乙型楼脑炎芦疫苗番、狂千犬病糖疫苗搞、流姐感灭丘活疫主苗等涛。目前套常用赠的减毒壁活疫响苗有脊夏髓灰呜质炎傍病毒刃疫苗必、麻放疹疫充苗、