免疫学检测与抗体技术

免疫学检测与免疫学技术一、抗原抗体的检测技术二、免疫细胞的检测三、细胞因子的检测四、免疫相关基因分析五、免疫标记技术六、免疫PCR(IM-PCR)技术

七、杂交瘤技术与T细胞克隆技术八、新型抗体的制备技术九、抗原的制备技术

一、概述免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究中的应用。

免疫学技术的应用极为广泛,疾病的诊断、疗效评价及理论研究等。

二、抗原抗体的检测技术*根据反应的基本原理与表现主要分为凝集反应、沉淀反应和补体参与的各种反应*根据抗原抗体反应设计的试验还有标记抗原(或抗体)检测相应物质的标记技术。对机体参与免疫应答的细胞进行鉴定,计数及功能测定(一)细胞计数1.荧光抗体染色2.免疫酶染色技术:*ABC法*APAAP法3.免疫金银染色法(IGSS)4．免疫细胞化学法5．四聚体法6．TCR链测定三、免疫细胞的检测

(二)免疫细胞功能的测定1.T细胞功能测定：肿瘤，病毒感染，免疫缺陷，自身免疫病等(1)细胞增殖(转化)试验：可分为非特异性丝裂原和特异性抗原两类。*丝裂原主要有PHA、ConA和PWM；*抗原刺激物有破伤风类毒素、PPD和白色念珠菌等；*同种MHC及抗CD3单抗等*肿瘤细胞-自体淋巴细胞混合培养(2)T细胞介导的细胞毒试验：CTL(3)分泌功能检测

(4)T细胞功能的体内检测法*接触性超敏反应*移植物抗宿主反应(GVHR)*迟发型超敏反应(DTH)

2.B细胞功能判定(1)B细胞增殖(转化)试验：*PWM、SAC，LPS（对小鼠B细胞）；*抗IgM抗体及EB病毒等(2)溶血空斑形成试验(3)反向溶血空斑试验(4)酶联免疫斑点法(ELISPOT):ELISPOT是一种可检测抗体分泌细胞，又可测定抗体分泌量的体外实验方法。*此法的主要优点是:①

稳定、特异，且抗原用量少；②可同时检测不同抗原诱导的抗体分泌，并可定量测定；③可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。

3.NK细胞活性测定体外检测NK细胞活性的方法有形态学检查法，放射性核素释放法，酶释放法，化学发光法及流式细胞术等。测定人NK细胞活性常以K562细胞株作为靶细胞，测定小鼠NK细胞活性常用YAC－1细胞为靶细胞。(1)形态学检查法(2)放射性核素释放法：用放射性核素(51Cr、125I－UdR)标记靶细胞。(3)酶释放法：测定靶细胞膜受损后从胞浆内释放至介质中的乳酸脱氢酶(LDH)活性。*NAG酶荧光比色法:NAG酶是细胞浆中存在的一种溶酶体酶,与其底物作用后,生成荧光产物,应用荧光分光光度计测定，敏感性明显高于LDH比色法。而且方法简单，结果稳定，重复性好。(4)化学发光法(5)流式细胞术：应用FCM检测NK细胞活性是根据PI染料排斥法。PI渗入死亡细胞内与DNA和RNA结合，在488nm波长激发下产生绿色荧光。此法既可以测定单个细胞毒活性，也可以用于总细胞毒活性试验。*还可利用荧光染料法,细胞光扫描法，双标记细胞毒法测定细胞毒性细胞的杀伤效应。

4．吞噬细胞功能测定(1)中性粒细胞趋化功能测定：一般采用滤膜渗透法(Boyden小室法)或琼脂糖平板法。(2)中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定1)显微镜检法2)NBT试验：此项试验是测定中性粒细胞吞噬、杀菌功能的一种简易方法。3)化学发光测定法：中性粒细胞在吞噬过程中出现呼吸爆发,产生活性氧代谢产物。此类活性氧化基团与细胞内杀菌作用密切相关，同时又能激发细胞内某些物质产生化学发光。(4)巨噬细胞细胞毒测定:通常取小鼠腹腔巨噬细胞，以-干扰素为激活剂使其活化，作为效应细胞。用125I-UdR标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815作为靶细胞。(3)巨噬细胞吞噬功能测定：中药斑蝥酒精浸液敷贴法诱发无菌性皮炎，从皮肤水泡渗出液中收集巨噬细胞，在体外进行鸡红细胞吞噬试验，计算吞噬率和吞噬指数，作为判断巨噬细胞吞噬功能的指标。四、细胞因子的检测（一）免疫学检测法免疫学检测的基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。某些细胞因子含量甚微的样品(如脑脊液)可用免疫聚合酶链反应(immuno-PCR)进行检测。（二）生物学测定法根据细胞因子对特定的生物学活性,应用相应的指示系统,同时与标准品对比测定,从而得知样品中细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/ml)表示。靶细胞可直接从组织中分离,如骨髓细胞的集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验,或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为靶细胞。1.促进细胞增殖和增殖抑制法*多种IL、表皮生长因子、转化生长因子α、神经生长因子、血小板衍生生长因子、成纤维细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子*各种CSF作用于造血系统的不同细胞,可促进其增殖及在半固体琼脂凝胶系统中克隆培养骨髓细胞的集落形成,故可采用集落形成试验研究CSF的水平*常用的检测细胞增殖的方法有3H-TdR掺入法、比色法、染色法和直接计数法等。其中测定细胞代谢酶反应细胞增殖数的比色法包括MTT、XTT、MTS和NAG等方法。

2.细胞毒活性测定法许多细胞因子(TNF)针对转化的细胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制细胞生长的活性。3.抗病毒活性测定法常用于检测抗病毒活性的细胞株有WISH,Hep2/c,L929,A549和MDBK等。其中WISH和Hep2/c细胞株用以检测人干扰素,L929细胞株用于检测小鼠干扰素,Ratec细胞株用于检测大鼠干扰素,而MDBK细胞株则可用于检测多种族的IFN-α和IFN-γ。常用于攻击细胞的病毒有滤泡性口炎病毒(VSV)、鼠脑心肌炎病毒(EMCV)以及Sindbisvirus等病毒。检测抗病毒活性的方法:测定细胞因子抑制病毒的致细胞病变效应(CPE)、抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量等。

4.趋化活性测定法多种细胞因子具有趋化活性，分别能诱导中性粒细胞、单核/巨噬细胞和淋巴细胞定向迁移趋化因子诱导细胞移动的方式包括趋化性和化学增活现象。趋化性(chemotaxis)是指诱导细胞向趋化因子化学浓度高的方向作定向移动,可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验测定细胞因子的趋化活性；化学增活现象(chemokinesis)是指增强细胞的随机运动,可采用琼脂糖小滴化学动力学试验检测。

(三)姿分子途生物卵学测屡定法RN亚A印迹渠法、遥核酸袭酶保涂护分恢析、养原位漆杂交位、PC滑R和Re荷al躬T而im成e群PC革R等。音亦可妈通过大检测哗细胞停内细缝胞因触子的蛛基因爷组成王或mR肉NA量，渴推算傻出细侮胞因卡子的西合成完量。(四非)单个蜓细胞该产生诊细胞振因子衰测定根法常用量的方口法有筹反向剩溶血府空斑惑试验辜(RH倍PA土)和反兆向EL性IS沸A斑点饰试验(1忽)反态向溶做血空豆斑试醒验(RH郊PA欠):事RH殿PA是一供种体痛外检面测抗户体分渡泌细物胞的称试验甘,亦菜可用阁于检坐测细筝胞因鹅子。(2请)酶陶联免更疫斑努点试绍验(EL陵IS犹PO嚼T)崭:所用惜的包唐被抗恩体与敬酶标我抗体悼应分埋别针液对细碗胞因揉子的遣不同芳抗原数决定梦簇(五纷)细胞扛内细峡胞因捷子的状检测采用FC吉M免疫滑荧光法技术倡可从耍单细发胞水说平检寒测不识同细猎胞亚杨群中偶的细挣胞因室子,膜用两哗种标品记的畏荧光摆抗体洽可在摆一种蓝细胞雪内同欠时测惜定两财种不完同的葵细胞贩因子济。细胞禾因子竹受体伯检测善的基咸本技漫术细胞望因子资的广概泛生敬物学幅活性仔是通躬过与夹各自抗相应焦的受钓体结植合而暑发挥耻的。钉因此爬细胞游因子赌受体崭的检场测与离细胞滑因子按检测腿一样栗，已扒成为她基础狗理论惧和临腹床免需疫学蒜研究愿的一允个重软要内急容。五、荣粘附远分子冶的检甚测某些筝粘附命分子岭除表围达于者细胞惠膜表牛面外占，还彩以可笋溶性庄形式立存在井于体竟液中箱。粘壁附分皆子的垫检测尿方法获目前泛大多椒采用隶免疫骆学技管术检严查其殿在细驴胞膜傅上的谦分布钳和测巡寿定某故些样闪品中述的含傻量。六、控免疫戴相关由基因燃分析*包储括各我种类紫型的亡杂交走技术治，如您转印怕杂交熟、斑盯点杂贴交、因原位绿杂交访等以粘及PC猪R技术画等。杂交墓技术渣主要欲工具司是核仙酸探歪针，漏它是东指一慎段用租放射望性核攻素或拾其他丘标记宗物(幸生物凡素、毁荧光膀素、双地高姥辛等哲)标棉记，谋并与柄目的聪基因育互补籍的DN蜜A片段傻或单滤链DN毛A、迁RN激A。分为cD以NA探针庭、寡黄核苷壮酸探墨针、惰基因爬组DN寺A探针贯及RN煎A探针朽等。*核偷酸探次针技扭术的努操作未主要糕包括动：①苏质粒DN素A的提惰取；语②靶DN破A片段改的分辣离；犁③靶DN竹A片段狐的标浸记；祝④待兆测样鲁品mR薪NA的提戚取；竿⑤标台记cD离NA探针望与待共测样陪品进编行杂钢交；密⑥放芽射自多显影垦或显恶色分恨析。(一垒)细朗胞因售子基阅因组DN雅A或mR立NA的检吨测1.No馋rt之he锦rn杂交债分析2.侮斑静点杂狼交法3.结原北位杂忧交法4.PC醒R扩增既产物果杂交雀分析断是将薄细胞吩因子闲的mR耻NA经过易逆转舰录为cD融NA，用特蛮异性兔细胞略因子浩引物殊进行PC食R扩增特，通况过So翻ut洒he套rn炮b束lo升t后，龄再用夜标记咳探针摔检测逮特异办细胞近因子DN合A的水辫平。5．So药ut钳he抖rn印迹批杂交6.共斑斯点及与狭缝兼印迹灶杂交顽:文将DN懒A变性辩后直血接点梅样于创硝酸单纤维易膜上麦再进吧行杂咱交7.细胞限因子mR咬NA表达股的测推定还洋可采匹用RT跪-P仙CR、原位遥杂交则与原绳位PC抢R,亿RN顾A半寿颈期的园检测,进行贴中的苍转录败分析绿等。(二围)BC哨R及TC姻R克隆种性基滑因重湾排分金析1．So值ut勒he兆rn印迹士杂交垂法：绞仅适堪用于激科研碌，而屡不适付用于比临床犯诊断披。2.PC炎R扩增堂技术宋:正塌常多旬克隆躬淋巴步细胞顺群DN滋A的扩占增产汗物含版有不雀同长茄度的肥片段鸟，电志泳检糠查呈管现弥究漫涂仆片状肺结构疑或多窑条带忠。而租单克外隆性托基因蝴重排牌经PC淹R扩增左后，梁产生芒明显虑相同姻长度娘的片章段，框电泳纵呈现冤单一芝紧密我折带蓄状结浙构*应避用PC快R扩增盈技术雀进行叨基因夫诊断交具有宁特异咬、敏则感(夺1/科104~1昂/1膊05克隆察性细抄胞)摇、快粮速(捉24h可完死成)滤等优固点。*用奏于恶录性淋麻巴瘤朝和白坛血病育等的帝临床纳诊断泪以及决白血链病治靠疗后山微小惊残留株病灶湾的检损测。(三愧)HL摸A基因守分型猎技术1．钢序列带特异慎性寡查核苷查酸探怨针PC落R(再PC槐R-轰SS姐OP蒸)或PC野R-缎AS纠O:搅PC呼R-船SS型OP是目观前应宜用最饲多的勤一种检简单党、快作速而外又精科确的HL唤A-遍Ⅱ类抗筛原分吃型方梢法，生能鉴环定所翼有已肃知序冰列的HL叹A-暗DR贪、D浙Q、雁DP等位洗基因许，精民确地无分析DN失A的多狂态性驴。2．杨限制抓性片屡段长骆度多桃态性勇(PC段R-裂RF绘LP院)技术射：此荐项技制术特义别适盏用于雹个别截标本孟和小造样本本的检脸测。3．雷单链榜构象及多态筹性PC焰R（盆PC谢R-视SS布CP蚁）：藉此御可鉴荐别编石码HL走A-端Ⅱ类抗壶原基习因的顺多态步性。应用PC营R-诞SS斑CP可以虹直接君比较喉供、橡受体焰之间HL各A-芒Ⅱ类基旦因是星否完危全一华致，底且可食精确历到12个爬碱基哀之差岛，具鲜有相铁对简宵捷而淋精确硬的特抖点。思在异鄙基因忠骨髓具移植刚的配粉型中魔已初雷步应买用于主临床喜。4．膀序列痕特异拿性引昏物PC车R技术堪(PC摩R-拖SS混P)砖：该法朝操作供简单柳、快吵速、帝实验贱结果摸容易蒙判断容，杂匙合子点也很只易检呢出。虫不足嗽之处后在于稼，为蚂检出栋所有蛇的等怕位基内因必字须用车多个肥引物饭进行攻扩增奏。5．受指纹贴图谱殿(PC猛R-捐fi寇ng亿er的pr触in公ti恢ng杜)技术酱|：腿进行HL寒A-基因的分型使鉴定执时，弦将供想、受仆体的DN祝A扩增遥产物宇混合钳，电类泳后节得出然一指峰纹图约，再筑与二胖者各喘自的PC书R指纹测图谱通进行绍比较套，从薪中选愈择出略指纹裁图一踩致的德供、太受体墨进行穗移植携。*PC牺R指纹稍图谱京在选勾择非自亲缘突关系钞的供技、受孩体进馆行骨询髓和输器官耀移植行配型肢时，蛾可以察节省尝大量秘时间浓。6.SN挑P(单个竟核苷疾酸多侮态性逆)分缠析(四辩)补感体基怪因分士析(五明)抗辨体基侍因分幕析(六庭)细宴胞膜便分子座基因卡分析七、维免疫拣标记括技术(一冶)免堂疫荧年光技育术(二北)放糕射免治疫分蚊析法(三蛇)酶叼免疫造技术(四倦)发停光免鱼疫测款定八、欣免疫PC愈R(康IM棚-P仪CR胃)技术免疫PC稼R是将顶抗原换抗体怨的特腐异性肠反应桂与PC滩R技术道结合删起来血,用嗓以检自测微就量蛋喇白质葛的方佳法。戏免疫PC踩R是用DN株A分子舱标记中特异相性抗润体，穷利用PC巡寿R可大宾量扩辰增DN店A片段慎的特糊点，掉从而卷将检嗽测灵宏敏度炊大大击提高劲，最钞低检志测值以可达请10-2跨1mo哨l/供L。1.直接伤免疫PC夹R是将蕉抗原搜包被翻在固金相载丛体上越,用酿特异焦性单绸抗结刷合此恩抗原省,再熔用生突物素危化抗挎体通乱过亲勤合素腔连接偶生物快素化DN耻A,然后扫将后率者进帜行PC拢R2.间接飞免疫PC捕R系将泥所测浊物的膜单抗泄包被卡在固跃相载曾体上,然后伤使所鞠测抗泡原与预之结粪合,再将邪特异筋性抗昏体生钱物素变化,并通战过亲巧合素掩连结捏生物踢素化DN奋A分子盆而将尿后者锯进行PC冻R九、便新型滤抗体重的制侮备技龄术(一葛)对年鼠源烛性抗适体的咱改造1．人-鼠嵌笨合抗顷体(ch签im促er偶ican括ti庙bo铲dy社)：鼠源云性单鸣抗的V区，字人免晓疫球立蛋白扮的C区。2．岔人源贿化抗乘体卵将籍鼠抗圾体的疲互补锯决定休区(CD轻R)与人Ig嘉FR和C连接序构建汉“人茫源化旋抗体颠”。(1仪)趁模板秆替换升:使领用与借鼠对环应部续分有您较大秋同源哭性的催人FR替换轮鼠FR区,坦例愤如可俗通过CD匪R移植画构建经“改仅型抗肯体”(2词)表俭面重担塑:秘对鼠CD效R及FR表面销残基涛进行劈燕重塑霸或镶汗饰,答使之扫类似尿于人值抗体CD躁R的轮缎廓或北人FR的型厦式。(3足)补米偿变嘴换:伴在人FR选择沾与CD在R有互岁补作墨用、兼与抗脉体的劣亲和蛋力有拍密切局关系哗或对FR空间读结构影折叠渐起关晚键作喂用的置残基阵进行孙改变妻,以赚补偿炒完全京的CD怕R移植(4奖)定忘位保译留:众通过族计算唐机模纷建从奸现有锈的人衰源抗存体保误守序晌列中设搜寻蛋与鼠FR区最抹类似交的序陆列,掩根据俊最简邀位置苗模板庭确定众鼠可淋变区门的关孙键位惯置残液基,筐并保李留所穷有这馋些位雨置而狂将其弹余部扇分进变行人屋源化渡。3.孝小分暑子抗见体(1灰)Sc泰Fv：由VH和VL中间敌连以历1415记个小封肽,内常用具的连稠接肽绞为(Gl雹y4铃Se散r)3(2邻)V热H与VL适当称部位爷各引拒入一芽个半季胱氨误酸形系成以狼二硫牢键固浮定的Fv段而拉构成歼的Ds歉Fv(3岔)将Sc鬼Fv中两描个可奸变区蜜之间收的接明头缩辩短,弱使两帅分子贼间VH和VL配对党形成撇双价直小分村子抗浴体(Di张ab苹od战y)(4适)将两中种不粉同特会异性增的V基因扭交叉蓄配对凯,则洋可得优到双勾特异真性Di杯ab困od搭y(5招)在Sc弦Fv的一秩端加援上一栋个双挖聚化床结构拣亦可同构建述不同锤类型兼的双尤价或贵双特平异性技小分侍子抗顶体,说如Mi妄ni矿bo惹dy等(二脑)抗身体库勇技术(三果)产河生嵌响合抗素体的纯小鼠膀和产序生人饥抗体浑的小惹鼠利用挪基因摇打靶星和取净代的故方法谦以及雕转基后因技扬术产舱生嵌晋合抗虎体。通过锯转基代因、愿基因甩缺失谨及杂显交和省选择吩等一宽系列横过程纺，获邪得双渡转染谋基因(人H、链基均因)的纯顺合小回鼠。隔其脾揪、淋坟巴结控、骨匀髓中卧的B细胞港可表歼达人器的链。(四阀)细胖胞内雷抗体*细依胞内钻抗体舞是指利在细杀胞内僚合成染并作愉用于造细胞朽内组位分的蕉抗体咐,亦纲称为掘内抗趁体(in枝tr造ab团od螺y)。*若在殿抗体反基因才的N端或C端加帽入引细导序吴列就伙能使掀抗体愿表达芦定位次亚细依胞部膜位,滥如胞奸浆、见线粒皆体、池内质捧网或营细胞携核部忌位。*若敏在细恭胞内隐表达邀特异谜识别音与肿挑瘤发呼生有镰关的罢癌基泡因编凝码的浆抗体长,即姥可抑恼制癌此基因促编码偏产物亚的表徐达,药可用爷于肿狡瘤的士治疗雁。*细宵胞内牧免疫末用于墙病毒敲性疾楚病的靠治疗*抗EG津FR胞外是区的Sc挺Fv-R桂I序R,并在Sc洪Fv-R费I毒R的C-末端血连接KD分EL肽,提供ER滞留(五欧)基径因工颗程抗裤体衍偶生技济术1．器双特肝异性便抗体莫(Bs宵Ab)或称父双功傍能抗蓄体(Bf姑A)。2.抗体石的抗惊原化羞技术流：借阶助人墓源化侧抗体肺的构泽建方利法，名以抗宏体V区作果为分怨子载肺体来泄表达惑生物指学相略关的遭多肽阀或外甲源性脂抗原尾表位洪，即唉抗原茎化抗锦体(an店ti雅ge炸ni犹ze四dan谨ti类bo阳dy喜,Ab律Ag)。3．抗体坑重组鸡免疫壮毒素4.催化台抗体(ca驾ta朝ly判ti件c避an疼ti贞bo退dy咳)或抗鼻体酶(ab宇zy腔me)：将催盈化活姨性引杨入抗昆体的做结合夹部位,产生暗一种酱具有芹抗体霜和酶墓双功把能的犬蛋白贵质,称为毛抗体谣酶或涝程序唯性酶(pr巩og像ra说mm咬ab毫le股e回nz概ym酬e)。十、角杂交娇瘤技奶术与T细胞你克隆疗技术一、杂交邻瘤技碍术1.B细胞枕杂交基瘤技临术与浴单抗改的制盛备2.T细胞直杂交勿瘤技腐术与愧其功毯能的门研究二、T细胞葡克隆虑技术*按渴其特绪异性页分为婆抗原各特异唯性和秧非特罢异性T细胞密克隆施。*按担其功凭能则今可分班为辅叛助性删和细暮胞毒奋性T细胞浊克隆杯。(一寄)抗疯原特致异性T细胞岸克隆(二阀)抗爱原非案特异缝性T细胞哥克隆荒的制预备(三膏)同轧种反旺应性TH和CT凑L克隆畜的制码备(四)肿瘤拨抗原匆特异女性CT编L克隆细胞蒸凋亡泥的检谅测一、裙概述细胞傲凋亡纯(ap赴op孩to解si宫s,Ap国o)是生黎物体朽内无返用的睡、老竞化的桥一些简损伤掌细胞骑自动皇死亡灾的一逮种形披式，海是指福在一爆定的初生理币和病肃理情摊况下累,机默体为飘维护内内环辩境的椅稳定窜,通绣过基怀因调茂控而宝使细国胞自船动消鸽亡的货过程男。二、男细胞册凋亡绍与细典胞坏组死的莲区别*细拢胞坏嗽死是提细胞穴膜,剖线粒释体膜言结构就、流仗动性业、渗顷透性誓及受凯体等便均受奴损,石进轧而细流胞溶昂解、候坏死避；而傻细胞样凋亡油时上林述结侵构和芹功能屈均保尚持不呜变；*细漂胞坏泡死时御,AT木P和蛋诸白质穴合成追抑制渡及终忌止;哈细胞烤凋亡伐时,AT槐P、mR晃NA和蛋草白质示合成半依旧礼,细或胞第坟二信拴号系妇统仍嗓活动耳;*细枕胞坏忌死时移,细惠胞DN胳A随机捎降解酸,电杨泳不泰呈梯玩状图珍谱;摆细胞券凋亡丸时,DN奖A多降同解成呼18疫0～完20棒0bp或其欺倍数两的梯姻状片金段,津电泳剧呈梯欢状图第谱;*细洁胞坏茧死时哄,细叉胞内晌容物筐外溢坦,引跨起局计部炎碧症反璃应或黑组织迈损伤惯;细尼胞凋赤亡时虎,细首胞内滨容物深不外欲溢,淘所扫以不层引起赛炎症旨反应林或局密部损膝伤;*细胞叙坏死团时,往往惩是成依团细轧胞死扭亡;细胞录凋亡惕时,在组汗织中伶呈分亡散状述态分爽布。三、崖研究妹细胞贷凋亡棕的意冻义1.偷细测胞凋助亡在晌肿瘤糊形成载和治崇疗中嫂具有猎重要剂作用较。*凋傍亡基袜因与同抗凋住亡基侦因突临变→→溉易形虎成肿巡寿瘤；*免可疫效寨应细糕胞表港达Fa其sL,肿瘤妥细胞箱表达Fa笼s→→诱导分肿瘤协细胞穴凋亡→→苦抗肿僻瘤*肿盛瘤细手胞高痛表达Fa洗sL→→诱导巴免疫疾细胞葵凋亡→→卡抑制富免疫热功能派→→闷逃避评免疫辟监视*肿瘤挠细胞堡低表宜达或具不表纪达Fa咬s→→逃避离免疫蝴监视2.恐细胞贸凋亡却与免防疫学图的关赔系*细缘瑞胞凋岗亡与T细胞杯在胸以腺的泳发育*细恶胞凋或亡与趟成熟T细胞排：AI铺CD*细胞厦凋亡灭与与B细胞*细述胞凋逆亡与姥胞毒醉效应3.消细胞摸凋亡日参与汽自身妈免疫蛋病的希发生4.馆细胞贩凋亡呀与病捆毒感陈染*抗岁病毒签免疫混防御*细张胞凋弊亡与AI更DS*细胞尝凋亡皆与病为毒性魂肝炎细胞转凋亡袜的检荒测方寨法一、秒形态驰学方拾法1．障普通贺光学疲显微喊镜检蹲测法2．道荧光铸显微运镜检六测法材料娘：①悦石蜡将切片弦;②物冰冻友切片沸;③饱细胞寨学涂夺片。方法昏一：蜜①PI染液猜：碘跳化丙怜啶(pr啄op携id欲iu净mio题di充de瓣,P缠I)门；②渐DA创PI染液脆；③AO染液恒：*荧榆光显境微镜施下观伍察。PI染色光选用叔>6冤00nm的激违发光韵,DA陈PI选用像46奇0～爹50辩0nm的激陷发光畏,AO染色匹选用劣52驰0nm的激摩发光课。*HE染色般核DN篇A呈蓝秒色,床而PI染色酿呈红腥色,DA味PI染色然呈蓝疼白色竟,AO染色疲呈黄遗绿色斤。凋狡亡细劈燕胞呈亿现核凭浓缩狼,染厚色加钓深,添或核拾染色帅质呈京新月纱形聚尿集于写核膜圾一边踪蝶;晚蹄期凋棉亡细帮胞表哭现为局核碎纺裂成鬼大小巡寿不等真的圆辆形小挨体被闻细胞哈膜包仔绕,逐即凋尊亡小贷体。方法哥二：Ho逐ec爱hs层t鸟33导34泼2/尸PI双标醋记法*在答荧光喘显微睛镜下屋观察腥，凋腐亡细怨胞的呼蓝色亮荧光普比活芒细胞励和非须凋亡浸细胞头都要短强，兔其光嘉散射洞能力苏则降镜低，角将二蛛者结帮合起块来，条可以首很好止地鉴葱定凋创亡细油胞。景坏死决细胞国则由脑于PI复染柳，呈只红色雾荧光犹。是济目前现细胞圣凋亡幼最满狱意的失形态扎学分妙析方嫁法。*样拉品来缺源鸡培稍养细记胞或扯离体漫细胞病制成漆的单斗个细绳胞悬男液。方法罪三：昏碘化冤丙啶（PI高）和Ho怕ec超hs炉t离33沟34椒2(取HO纲)双染过法PI和HO均可晕使用峰紫外畏光激术发，拦其荧敲光分辈别为市红光灿和蓝染光。凯对照线活细洞胞的HO蓝色我荧光握最强四，而绍早期巷凋亡筝细胞烘由于船其DN物A降解堡和丢罩失，腹其HO蓝色滥荧光外较弱斗，也拖有很书弱的PI红色节荧光问。晚矛期凋都亡细咐胞PI红色朋荧光率增强傲，坏春死细它胞PI红色做荧光部最强钳，而HO蓝色购荧光描较弱览。3．袋凋亡筒小体尽的电访镜观添察有小楚体系披由细倚胞膜叛卷曲石、脱呈落形隙成的部小泡弦,其庙内包罩含有丝式完整下的细味胞器迟及核及片段仇。二、啄生物搂化学盟方法电泳精法DN益A梯带哈(DN桐A还la广dd超er方)。三、说免