HE制片质量控制-常见HE切片染色缺陷的成因与对策

病理检验技术

常规组织病理技术HE制片质量控制常见HE切片染色缺陷的成因与对策常见HE切片染色缺陷的成因与对策1.切片污染包括染液污染和组织污染。

染液污染是由于苏木精染液的氧化膜或伊红染液的絮状沉淀和其他试剂中的沉淀物所致。污染物遮盖该部位的细胞或组织而难以观察其形态改变。对策：通过定期过滤各种染液和试剂而避免。

组织污染是由于切片和贴片过程中，被其他病例的组织和细胞污染。如不同类型的组织，易在镜下发现；如相同类型而不同病变组织污染，不易在镜下发现，可致误诊。对策：摊片时，恒温贴片盆的水要常更换或在每例贴片后用纸在水面上把残余蜡片拖走，以保证不污染；取材时，甲例取材后，要及时将蜡板和刀剪冲洗干净，以防止在乙例取材时把甲例残余组织误作乙例取材。常见HE切片染色缺陷的成因与对策2.染色不均匀

成因：是由于染色时二甲苯脱蜡不彻底，切片部分着色不好。常见于冬季室温低时，二甲苯的脱蜡力度降低，或使用已多次脱蜡的二甲苯所致。对策：冬季室温低(14℃以下)时，应把二甲苯盛缸在水浴中适当加温至30℃脱蜡，或更换新的二甲苯，在脱蜡时把染色抽提起放下2～3次，可加速脱蜡。如使用自动染色机有恒温装置时，应及时更换二甲苯。

3.切片呈云雾状

成因：是由于染片后脱水不彻底，切片内含有水分所致。对策：脱去盖玻片，用二甲苯洗去树胶，再用乙醇洗去二甲苯，重新脱水透明。如有条件，最好能在自动封片机内封片。常见HE切片染色缺陷的成因与对策4.组织“发白”，镜下见细胞模糊不清，核不着染，呈灰白色。常见于淋巴结和鼻咽等组织。成因：组织固定不当，如组织固定不及时，固定液不足或浓度过淡，也与组织的致密度和天气寒冷有关。淋巴结有一个致密的包膜,影响甲醛液的浸透；对策：固定前先把淋巴结对半切开，再行固定。

5.组织和细胞过度固缩

镜下见细胞和纤维都比正常缩小，排列致密，核深染，核染色质成团块状。成因：是由于组织在浸蜡时电热恒温箱温度过高，时间过长，则易使组织过度固缩。对策：检查电热恒温箱的温度是否恒定，最好是维持在60～62℃，不要超过70℃或以上。常见HE切片染色缺陷的成因与对策6.组织“龟裂”“龟裂”是组织切片在镜下不是均匀一致，而是像久旱后的田地爆开的很多裂痕，如同龟背上的裂纹一样。成因：切片染色过程中干涸或染色后把切片置入烤箱中烤干，高温干燥使组织收缩割裂；特别是在脾、淋巴结等组织易发生。对策：在染色过程中不让切片干涸，染色后不把切片置入烤箱中烤干，需经脱水透明后封片。

7.胞核“炭化”

“炭化”是指切片染色后在镜下见到有些胞核不是蓝色而呈黑色，像木炭样。成因：染片在封片前过度干燥，部分胞核透明不良，呈黑色。对策：该切片重新投入二甲苯，脱下盖玻片，再在二甲苯稍浸片刻后取出，趁染片内二甲苯未完全挥发，立即滴树胶加盖玻片封固，则胞核“炭化”消失。常见HE切片染色缺陷的成因与对策8.切片内有大小不一的气泡

成因：气泡产生多与封片的树胶有关，树胶过浓或封片前用玻璃棒搅动树胶产生气泡所致；气泡的出现也与封片时的技巧有关。对策：封片用的树胶浓度要适中，以提起玻璃棒时胶如珠滴状慢慢滴下为宜，临封片时不要随意搅动树胶；滴树胶后把盖玻片倾斜成一定角度放下，即盖玻片一侧先接触树胶后再慢慢把盖玻片放下，可避免气泡出现。9.切片不完整

成因：是由于组织脱水不充分，组织块中部仍残留水分。对策：把蜡块投入熔化的蜡缸内使蜡彻底熔化，再把组织转投入二甲苯内溶解和清除石蜡（用Ⅱ级二甲苯，时间约30分钟，并轻轻搅动多次），然后投入无水乙醇内洗去二甲苯，再移入新的无水乙醇按常规重新脱水、透明和浸蜡、包埋，就能切出完整切片。常见HE切片染色缺陷的成因与对策

10.切片时不成片，整片易破碎

成因：组织含血过多，含血块过多的组织很脆，包埋后切片时易破碎不成片,常见于子宫刮出的血块和输卵管妊娠组织等。对策：可向蜡块呵口气再切片会有所改善。最好是组织在二甲苯透明前,改用香柏油或丁香油透明，再经二甲苯短时处理后，浸蜡、包埋再行切片，就能切出整片。11.切片时裂开不成片

成因：一方面组织内有较大的钙化灶，切片时出现大的刀痕，甚或使蜡片裂开分离；另一方面包埋时，包埋石蜡温度较低，包埋动作不够快，使组织与石蜡融合不好。对策：包埋石蜡的温度要比组织浸蜡的温度高4～6℃，包埋时操作要快，不要把组织翻来翻去。常见HE切片染色缺陷的成因与对策12.刀痕

成因：切片刀或一次性刀片切过含钙化灶的组织或切过手术缝线的组织而出现缺口。对策：切片有刀痕，应移开有缺口的刀锋，选取无缺口的刀锋再切片，或更换新的刀片。为避免切片时出现刀痕，首先在取材时注意每一例组织内是否有钙化灶或像沙粒样的钙化点，如有先进行脱钙处理，如为骨组织更需要彻底脱钙处理后才进行脱水、透明和包埋。

13.筛状小空洞

组织内出现筛状小空洞，常见于较软的组织如脑、子宫内膜和鼻咽黏膜等。成因：切片时过度冷冻蜡块使其过硬，立即进行切片，则开始切出的二、三张蜡片，常出现筛状空洞。对策：避免组织蜡块在切片之前冷冻过硬，在修平蜡块后，应多切数片使组织蜡块稍回暖后才开始选取蜡片。常见HE切片染色缺陷的成因与对策14.切片一截厚一截薄,呈阶梯状,染色后深浅不一。成因：组织过硬(如子宫肌瘤)，或切片机的样品夹头和刀座上的螺旋没有拧紧所致。对策：注意对较硬的组织在无水乙醇内脱水时间不可过长，更不能在高温中浸蜡，以免组织更硬固；切片前要注意把每一个螺旋拧紧。

15.切片太厚或厚薄不均

成因：切片刀或刀片太钝或切片机内机械磨损，造成轴承松动；其次切片时余隙角太小。对策：切片刀磨锋利或更换新的刀片，对切片机要尽快修理或重新购买；调试刀座内刻度盘，边切片边调试，当余隙角为2°～4°时，就不会出现过厚过薄的情况。常见HE切片染色缺陷的成因与对策

16.切片有皱褶

成因：一方面是在摊片时恒温贴片盆的水温过高或过低，又或使用镊子撑开切片时的操作不够熟练，切片未能平整伸展；另一方面如包埋用的石蜡熔点过低,蜡软,在切片时蜡片易皱褶。对策：调整好恒温贴片盆的水温；更换熔点适当的石蜡进行包埋。

17.切片组织自溶

切片着色淡，细胞模糊不清，仅见组织轮廓。成因：组织离体后，没及定时固，或尸体防腐不当，引起组织自溶所致。对策：活体组织离体后,必须立即用适量的10%甲醛液固定；尸体要及时防腐，没有防腐处理的尸体，死后至解剖间隔的时间一般不要超过48小时。常见HE切片染色缺陷的成因与对策18.人为挤压组织变形

镜下组织细胞狭长，呈深染、平行排列的条索状。常见于鼻咽黏膜、胃黏膜等组织。成因：组织在钳取时受机械性挤压造成。对策：钳取组织时,勿用镊子重力挤压或用强力牵拉组织。

19.组织表层固缩成壳

镜下表层细胞融合和深染，与其下组织分界清楚。成因：用高浓度乙醇固定组织造成的。对策：应采用10%甲醛固定组织。常见HE切片染色缺陷的成因与对策20.甲醛色素沉积

成因：含血丰富的组织，在带酸性的甲醛液固定后，酸性甲醛作用于组织内的血红蛋白形成酸性甲醛正铁血红素复合物所致。对策：用中性缓冲甲醛液固定组织,可防止这种色素形成。如在组织上已形成这种色素,可在切片脱蜡至水化后,置入95%的乙醇苦味酸饱和液内处理5～30分钟即可溶解消失。

21.组织高温烧灼变形

镜下结构不清，淡蓝染，核溶解，部分组织呈深蓝色线状。成因：电灼高温引起的组织变形。常见于黏膜组织息肉电灼、前列腺经尿道电切、子宫颈锥状电切等组织。对策：电切组织取材时，应远离切缘。常见HE切片染色缺陷的成因与对策

22.冷冻切片出现冰结晶

冰结晶的出现，仅见于未经固定的冷冻切片，在镜下可见组织细胞中大小不一的空泡，破坏了正常的组织结构。成因：组织在冷冻过程中,冷冻的温度不够低，组织未能快速冷冻，使组织细胞中的水分聚集形成冰结晶。对策：要求低温恒冷切片机的冷冻效果好，能使组织快速冷冻。如果低温恒冷切片机的冷冻功能不佳，可以使用专用的喷雾冷冻剂辅助冷冻组织，也可以用液氮快速冷冻组织后再进行切片，液氢的温度约为-190℃，故冷冻后的组织需要