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文档简介

《遗传学》植物RNA的提取主要内容一二实验目的实验原理实验材料实验步骤实验注意事项三四五一、实验目的本实验旨在了解和掌握植物总RNA的分离和纯化方法。二、实验原理在液氮中研磨植物材料,使部分细胞破碎,进一步使植物细胞在裂解液中裂解,用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质,异丙醇沉淀核酸,溶解后经氯化锂沉淀总RNA,洗涤后得到高质量的RNA。三、实验材料（一）实验材料

新鲜植物叶片组织。（二）实验试剂

尿素、错酸钠、氯仿-异戊醇、异丙醇、TE缓冲液、乙醇、Tris饱和酚、SDS、LDS、Tris-Hcl、Na2EDTA、Nacl、Licl（三）实验仪器

研钵、离心机、冰浴盒四、实验步骤（1）取5～10g材料放入研钵中,加入过量液氮,迅速研磨成均匀的粉末(在研磨过程中,保证材料始终浸在液氮中,研磨约30min)。

（2）待液氮自然挥发干净后,将材料转入100ml的离心管中,加入6～8倍体积的裂解液1,轻轻搅拌后,0℃冰浴20min。12000r/min,4℃离心15min。

四、实验步骤

（3）取上清,加入1/3体积的3mol/L醋酸钠,1/5的氯仿异戊醇,轻轻摇匀,0℃冰浴20min。

（4）2000r/min,4℃离心15

min(加5倍体积裂解液2溶解沉淀以提取DNA)。

（5）取上清,加入等体积冰浴冷却的异丙醇,混匀且冰浴10min。

四、实验步骤

（6）5000r/min,4℃离心10min,将沉淀溶于5ml含有0.1%SDS的TE缓冲液中,加入8mol/LLiCl使终浓度至2.5mol/L,冰浴3h或4℃过夜。

（7）12000r/min,4℃离心10min。

（8)70%乙醇洗涤沉淀两次,空气干燥10min,溶于无菌水(DEPC焦碳酸二乙酯,处理),加入1/10体积10%的SDS,重复第4～6步骤,进一步除去蛋白质,70%乙醇20℃长期保存。五、实验注意事项(1)操作环境干净无灰尘，严格戴好口罩，手套。 (2)实验所涉及的离心管，Tip 头，移液器，实验台面等要彻底处理。(3)实验

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