版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
谷丙转氨酶活性测定第1页/共15页实验十七谷丙转氨酶活性测定
Exp.17ActivityDeterminationofGlutamicPyruvicTransaminase
第2页/共15页一、实验原理氨基移换酶也称转氨酶,为广泛存在于生物机体内的酶,其作用为催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮酸的α-酮基互换。因此在氨基酸的合成和分解,尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。转氨酶的种类甚多。任何一种氨基酸进行转氨作用时,都由其专一的转氨酶催化,它们的最适pH接近7.4。第3页/共15页在各种转氨酶中,谷氨酸-草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶)及谷氨酸-丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶)活力最强。上述两种转氨酶均广泛存在于机体组织内,在正常人血清中也有少量,机体发生肝炎。心肌梗塞等病变时,血清中转氨酶活力显著增加,所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。它们的催化反应如下:第4页/共15页COOHCOOHCOOHCOOHCHNH2+C=OC=O+CHNH2CH3(CH2)2CH3(CH2)2COOHCOOH转氨酶←→
丙氨酸α-酮戊二酸丙酮酸谷氨酸第5页/共15页→
测定转氨酶活力的方法很多,如分光光度法,纸上层析法等。在本方法中,谷丙转氨酶作用于丙氨酸和α-酮戊二酸后,生成的丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙。本方法中用分光光度法,根据硝基苯腙的生成量可以计算酶的活力。第6页/共15页二、实验用品
1、材料新鲜动物肝匀浆。2、试剂(1)0.1M磷酸缓冲液(pH=7.4)取0.1MKH2PO4液50ml,0.1NNaOH液39.3ml,再加蒸馏水10.7ml,混匀即得。(2)丙酮酸钠标准液(2.0微克分子/ml):取A·R丙酮酸钠11mg溶解于50ml0.1M磷酸缓冲液内(宜当日新配)。第7页/共15页(3)谷丙转氨酶底物:
取分析纯α-酮戊二酸29.2mg,DL—丙氨酸1.79g置于小烧杯内,加1NNaOH约10ml至完全溶解。用1NNaOH或1NHCl校正其pH=7.4,加0.1M磷酸缓冲液稀释至100ml,然后加氯仿数滴防腐,在冰箱内可保存一周。此溶液每1.0ml含α-酮戊二酸2.0微克分子,丙氨酸200微克分子。(4)2,4—二硝基苯肼溶液:
将A·R纯2,4—二硝基苯肼19.8mg加入200ml锥形瓶内,加100ml1NHCl液。2,4—二硝基苯肼溶解较慢,把锥形瓶放在暗处不时摇动,全部溶解后,滤入褐色玻璃瓶。并置于冰箱中保存。(5)0.4N氢氧化钠液。3、仪器设备试管、吸量管、恒温水浴锅、分光光度计第8页/共15页三、方法和步骤1、肝匀浆制备:取新鲜动物肝脏,用生理盐水冲洗,滤纸吸干,称取肝脏0.5g,剪成小块,置于玻璃匀浆管内,加入4.5ml预冷的pH7.40.1mol/L磷酸缓冲液,制成10%肝匀浆,冰冻保存。
第9页/共15页2、标准曲线的绘制取6支试管分别用0、1、2、3、5标号,按下表所列次序添加各试剂。将试管于37℃水浴中保温,平衡管内外温度,向各管内加0.5ml2,4—二硝基苯肼后再保温20分钟,最后分别向各管内加入0.4NNaOH5毫升,在室温下静置30分钟后,以0号管做“空白”用520nm进行比色,读出光吸收值,以丙酮酸的微摩数为横坐标,光吸收值为纵坐标,画出标准曲线。第10页/共15页管号试剂012345丙酮酸钠标准液/ml0.000.050.100.150.200.25谷丙转氨酶底物/ml0.500.450.400.350.300.25磷酸缓冲溶液(0.1MpH7.4)/ml0.100.100.100.100.100.1037℃水浴中保温,平衡管内外温度2,4-二硝基苯肼/ml0.500.500.50
0.50
0.50
0.50
保温20分钟NaOH(0.4N)/ml555555静置30分钟A520nm表1.丙酮酸钠标准曲线的绘制第11页/共15页1测定管2“空白”对照管谷丙转氨酶底物/ml0.500.5037℃水浴保温10min,使管内外温度平衡稀释肝匀浆/ml0.1037℃水浴保温30分钟2,4—二硝基苯肼试剂/ml0.500.50稀释肝匀浆/ml0.10保温20分钟,冷却NaOH(0.4N)/ml5.05.0室温下静置30分钟A520nm表2.谷丙转氨酶酶活力的测定2、谷丙转氨酶酶活力的测定第12页/共15页四、实验结果用光吸收值读数在操作曲线上查出转氨酶活力单位数,计
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 在乡村实习证明模板(6篇)
- 公司法务基础知识题库单选题100道及答案解析
- 语文统编版(2024)一年级上册识字4.日月山川 教案
- 《学前儿童卫生保健》 教案 12 项目二:学前儿童意外事故的急救1
- 第2章 第5节 营养学基础课件
- 学校传染病控制课件
- 2024-2025学年专题10.3 物体的浮沉条件及应用-八年级物理人教版(下册)含答案
- 2024届山西省太原市第四十八中学高三下学期3月线上教学数学试题检测试题卷二
- 第3章 圆的基本性质 浙教版数学九年级上册章末训练题(含答案)
- 招考《弯道跑》说课稿
- 浙江省9+1高中联盟2022-2023学年高一上学期11月期中化学试题 含解析
- 人教版七年级数学上学期《1.4-有理数的乘除法》同步练习卷
- 《中医基础理论》课程教案
- 北师大版生物八年级上册 第20章 第1节 遗传和变异现象(1)(教案)
- 2024年移动网格长认证考试题库大全及答案
- 2024-2030年中国机械计数器行业应用动态与发展前景预测报告
- 湖南省湘楚名校联考2024-2025学年高三上学期8月月考英语试题
- 2024年交通运输行政执法资格考试试题
- 承包蟹塘合同
- 小学思政课《爱国主义教育》
- 服务器设备到货验收
评论
0/150
提交评论