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文档简介

1实验一 DNA重组与细胞转化复旦大学上海医学院分子生物学室谢佐俊

;2一、实验目的1．CaCl2法制备感受态细胞；2．目的基因与载体的连接；

（c-myc＋pBR322；粘端连接）3．重组质粒转化大肠杆菌并筛选转化体。 （HB101；Ampr）

3二、实验原理质粒载体（pBR322）的构建目的基因（c-myc基因片段）的获取载体与目的基因的连接（粘端连接）感受态细胞的制备（CaCl2法）重组质粒转化感受态细胞4EcoRI：GAATT ClaI：ATCGATpBR322质粒图谱5pBR322pBR3224.3kb重组体EcoRIClaIEcoRIClaIc-mycDNA片段1.4kbT4DNA连接酶大肠杆菌HB101CaCl2法感受态细胞扩增、提取、鉴定••••••培养皿转化氨苄青霉素抗性LB板6三、实验器材与试剂（详见实验讲义）7恒温气浴摇床8电热恒温培养箱9无菌操作超净工作台10台式（低温）离心机11旋涡振荡器12移液枪和枪头13离心管14接种环、推棒15长玻璃试管、滴管16刻度吸管17四、实验步骤目的基因c-myc与pBR322质粒载体的粘端连接CaCl2法制备感受态细胞重组质粒转化感受态细胞（详见实验讲义）18五、注意事项无菌操作高压消毒器械、培养液等紫外线照射消毒实验空间酒精棉球擦手、台面等实验

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