医科考研药分3杂质检查

第三章药物的杂质检查学习要求掌握药物中杂质的来源、分类、杂质限量的概念和计算，一般杂质和特殊杂质检查方法熟悉药物中杂质鉴定方法了解热分析法基本原理及其中杂质研究中的应用一、药物的杂质与纯度第一节药物的杂质与限量1.药物纯度：指药物的纯净程度。2.杂质：药物中存在的无治疗作用的、影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。例：外消旋氧氟沙星

左氧氟沙星有抗感染作用3对药物纯度的认识是在防治疾病的实践中积累起来的如：ASA中除了SA外，还存在乙酰水杨酸酐、乙酰水杨酰水杨酸等SA的衍生物，具有致敏作用。4.对药物纯度的要求随着临床应用的实践和分析测试技术的发展，在不断改进，使之更加完善如：度冷丁（Ⅰ）1948年收入BP，1970年经GC分离鉴定出两种无效异构体（Ⅱ）和（Ⅲ），有时高达20%～30%。5.药物纯度的评价：应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。（低血钾，使肌肉组织先兴奋，再转为抑制而致麻痹）6.不能用化学试剂的规格代替药品标准，更不能将化学试剂当作药品直接用于临床如：试剂规格的BaSO4,允许存在可溶性钡盐药品中不允许：可导致医疗事故杂质的来源：生产过程中引入贮藏过程中产生二、杂质的来源A+B→C→D+E①原料中间产物副产物产品③试剂溶剂催化剂⑤金属容器、管道、装置②制剂过程中产生新杂质④异构体多晶型在贮藏过程中，受外界条件如：温度、湿度、光线、空气或微生物的影响，发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化，产生相关杂质。

依杂质来源分类：一般杂质：含义，品种特殊杂质：含义依杂质毒性分类：信号杂质有害杂质依杂质理化性质分类：有机杂质无机杂质残留溶剂三、杂质的分类一般杂质:在自然界分布比较广泛,在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质。如：pH值、溶液的澄清度、氯化物、硫酸盐、重金属等特殊杂质：在特定药物的生产和贮存过程中，因其生产工艺或药物本身的性质可能引入的杂质。如：乙酰水杨酸中的水杨酸四、杂质的限量在不对人体有害、不影响疗效的情况下，允许药物中存在一定量的杂质1.杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量表示方法：％或百万分之几2.限量检查：药物中杂质的检查，一般不要求测定其含量，而只是检查杂质的量是否超过限量3.方法供试液对照液合格不合格（被检杂质对照品按照限量标准配制而成）（1）对照法相同条件下反应比较供试液＜对照液现象现象供试液＞对照液现象现象（2）灵敏度法：在供试品溶液中加入一定量试剂，在一定条件下反应，不得有正反应出现（3）比较法：取供试品一定量依法检查，测定特定的杂质参数，与规定的限量相比，不得更大如：UV法检查肾上腺素中的肾上腺素酮配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.05

4.计算公式杂质限量=杂质最大允许量／供试品量×100％例题※※※注意：统一单位求的目的（L？C？V?S?）是否稀释限量表示方法第二节杂质的检查方法专属性强方法：利用药物和杂质在物理和化学性质上的差异进行物理:外观性状、分配或吸附、对光的吸收的差异化学:对某一化学反应的差异杂质与试剂反应药物无反应一、杂质的研究规范二、杂质的常用检查方法（一）化学方法利用药物和杂质在化学性质上的差异，选择合适的试剂，使之与杂质反应产生颜色、沉淀或气体，而药物不发生反应1.比色法2.比浊法3.滴定法或指示剂法（1）滴定法：以滴定至终点消耗滴定液的体积杂来检查药物中杂质的量（2）指示剂法：根据加入定量滴定液与指示剂后，溶液应显示或不应显示特定颜色的方法（二）色谱方法1、TLC（1）杂质对照品法判断结果：供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深特点：分离效能高，分离的同时进行测定，应用广泛需要对照品供试品A对照品BA？B（2）供试品溶液自身稀释对照法当杂质结构不能确定、或无杂质对照品时，采用此法要求：杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近供试液稀释对照液点样、展开、干燥、显色（高）（低）1供试品2对照品前沿原点

••12结果判断：供试液所显杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深（3）1法与2法并用适用：当药物中存在多个杂质时，其中有的杂质有对照品，有的杂质没有对照品或结构未知（4）对照药物法适用：无合适杂质对照品，或供试品杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异可用与供试品相同的药物作为对照品，此药物所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好（1）外标法测定需要杂质对照品，进样量能够精确控制供试液：A杂对照液：A对2.高效液相色谱法(HPLC)(2)加校正因子的主成分自身对照法建立方法时，需要杂质对照品杂质检查时，不需杂质对照品①杂质对照品＋药物对照品f校正因子直接载入各品种质量标准中②供试液对照液：供试液稀释成与L相当的溶液

分别测定C杂(3)不加校正因子主成分对照法用于没有杂质对照品时杂质的检查对照液：供试品的稀释液，进样测得A主

供试液：进样测得杂质∑Ai，杂质∑Ai＜A主即为合格.例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:对照液(0.01mg/ml)进样20μl,调灵敏度，使主峰达10%～30%样品液(0.14mg/ml)进样20μl,杂质∑Ai＜A主的1.0%.（4）内标法加校正因子测定法

需要杂质对照品①校正因子的测定杂质对照品+内标物质→测定②供试品+内标物质→测定(5)峰面积归一化法适用于粗略测量杂质含量L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%例如：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液(5μg/ml)进样10μl,调灵敏度，使主峰达满量程的20%～25%样品液(0.4mg/ml)进样10μl,杂质∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%利用药物和杂质对光选择性吸收性质的差异1.可见-紫外分光光度法在药物无吸收而杂质有吸收的波长测定吸收度，规定测得的吸收度不得超过某一限值（三）光谱方法例：肾上腺素中肾上腺素酮的检查肾上腺素酮

220260300nm肾上腺素及肾上腺素酮的紫外吸收曲线λmax310nm310nm处，肾上腺素无吸收，酮体有吸收采用UV法检查：肾上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.05

盐酸去氧肾上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.20盐酸异丙肾上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.152.红外分光光度法用于药物中无效或低效晶型的测定晶型结构不同，化学键的键长、键角等发生不同程度的变化，导致红外吸收光谱中某些特征峰的频率、峰形、强度等出现显著差异。1.热分析法在程序控制温度下，测定物质的物理、化学性质与温度关系的一类技术①热重分析法（TGA）在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系（四）其他方法特点：样品用量少、灵敏、快速②差热分析法（DTA)

是在程序升温下，测量供试品和参比物之间的温度差与温度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化。因此温差(△T)只与被测物质的量质变化有关。△T=0被测物未发生吸热或放热反应△T=-为吸热峰，峰顶向下△T=+为放热峰，峰顶向上③差示扫描量热法(DSC)

是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统所需输给待测物质和参比物的能量差随温度（或时间）变化的热分析技术。

供试品吸热：系统供能增加供试品放热：系统供能减少应用：鉴别、晶型鉴别、纯度检查、测定熔点或水分2.酸碱度检查法酸碱滴定法：以消耗酸或碱滴定液的毫升数为限度指标指示液法：将一定量指示液的变色pH范围作为限度指标pH测定法：测定供试液的pH值3.物理性状检查法：

利用药物和杂质在物理性质上的差异臭味及挥发性的差异若存在具有特殊气味的杂质，可由气味判断颜色的差异药物无色有色杂质有色分解产物溶液颜色检查法溶解行为的差异药物溶于水、有机溶剂、酸、碱杂质不溶于···································或反之旋光性质的差异例：ChP规定黄体酮在乙醇中的比旋度为:＋186～198°

黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇）化合物

浓度%

温度℃

比旋度

黄体酮1～1.4

20～25

+193°±4°

醋酸双烯醇酮0.920-31°±2°

醋酸妊娠烯醇酮1常温+20°±2°一．氯化物检查法：1.原理：供试液：Ag＋+Cl－→AgCl↓（白色混浊）对照液：标准氯化钠溶液……………

2.方法：比浊第三节药物中一般杂质的检查3.讨论黑色背景下，从上至下观察氯化物适宜浓度：50~80μg/50ml硝酸酸性：避免弱酸银盐的干扰，加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊避光：避免光线使Ag析出供试液若不澄清：用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后过滤暗处5min硝酸银1.0ml暗处5min供试液若有色：内消色法二、硫酸盐检查法1.原理：供试液：SO４2－＋Ba2＋→BaSO４↓（白色混浊）对照液：标准硫酸钾溶液………比浊2.方法3.讨论黑色背景下，从上至下观察硫酸盐适宜比浊浓度：100~500μg/50ml盐酸酸性供试液如需滤过供试液若有色三．铁盐检查法（一）硫氰酸盐法1.原理：供试液：Fe3＋＋6SCN－→[Fe(SCN)6]3－（红色）

对照液：标准铁溶液………………比色2.方法3.讨论白色背景下，从侧面观察对照液供试液对照液供试液盐酸酸性：防止铁盐水解过硫酸铵：防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色Fe3＋的适宜比色范围：10~50μg/50ml色调不一致时：正丁醇提取实验：葡萄糖中铁盐的检查，+HNO3处理四、重金属检查法重金属：在实验条件下与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，检查时以铅作为代表

ChP(2010年版)共三法第一法(硫代乙酰胺法):用于溶于水、稀酸和乙醇的药物1.原理：供试液：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2＋→PbS↓+2H＋（黄～棕黑）对照液：标准铅溶液……………2.方法：比浊3.讨论白色背景下，从上至下观察pH3.5醋酸盐缓冲液：沉淀完全Pb2＋适宜比色范围：10~20μg/27ml供试品有微量Fe3+:氧化硫化氢析出S处理方法：加Vc供试液有色时：稀焦糖调色第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法用于在水、稀酸、乙醇中难溶，或含芳环、杂环（能与重金属离子形成配位化合物）的有机药物

1.原理：C-M炽灼破坏后→Mn＋→第一法检查

2.方法：500～600℃炽灼勘误第三法：硫化钠法溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物（磺胺类、巴比妥类）

供试液：Pb2＋＋Na2S→PbS↓＋２Na＋（灰黑色）对照液：标准铅溶液………………比浊五．砷盐检查法古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）（一）古蔡氏法：※※※

1.原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，氢与药物中微量砷盐反应，生成具挥发性的砷化氢气体，遇溴化汞试纸产生黄至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液在同样条件下生成的砷斑比较，颜色不得更深As3++3Zn+3H+→3Zn2++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+

→3Zn2++3H2O+AsH3AsO43-+4Zn+11H+

→4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr2

→3HBr+As(HgBr)3(黄色)2As(HgBr)3+AsH3

→

3AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3+AsH3

→3HBr+As2Hg3(黑色)2.仪器装置

3.方法：

醋酸铅棉花的作用

KI和酸性SnCl2的作用标准砷斑用2ml的标准砷溶液制成供试品、HCl、Zn、KI、SnCl2Pb(Ac)2棉HgBr2试纸返回样品砷斑标准砷斑KI和酸性SnCl2的作用：

AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2O②I2+Sn2+→2I-+Sn4+

4I-+Zn2+→[ZnI4]2-AsO43-AsO33-AsH3慢快KISnCl2①将五价砷还原为三价砷，加快反应速度＋5＋3③抑制锑化氢的生成促进AsH3的生成④形成Zn-Sn齐，去极化返回Pb(AC)2棉的作用：消除锌粒和供试品中可能含有的少量的硫化物的影响。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(Ac)2PbS+2HAc

返回4.供试品处理（1）供试品为S2-,SO32-,S2O32-等:在酸中生成H2S/SO2,与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫酸盐可消除。（2）供试品为Fe3+，能消耗KI、SnCl2，先加足量SnCl2（3）环状结构有机药物，先有机破坏（4）含锑药物，改用白田道夫（Betterdorff）法2As3++3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H+棕褐色胶态（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法

（silverdiethyldithiocarbamate)（Ag-DDC法）

1.原理：供试液：AsH3+6Ag（DDC）→６Ag＋…

（红色胶态）对照液：标准砷溶液………2.仪器装置：

比色或测定A改错Ag(DDC)的吡啶溶液(USP)三乙胺-氯仿溶液(ChP)3.方法：白色背景下，从上至下观察；或在510nm处，测定吸收度线性范围：1～10μg/40ml含锑药物不干扰测定用于砷盐的限量检查和微量砷盐的含量测定比较古蔡法优点：灵敏度高（1μg）；简便、成本低缺点：Sb有干扰；不可做定量分析Ag-DDC法优点：灵敏度高（0.5μg)；仪器测定、重现性好;

500μgSb无干扰缺点：吡啶恶臭、有毒白田道夫法优点：可消除Sb的干扰缺点：灵敏度低（20μg）六、干燥失重测定法干燥失重：药品在规定条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示检查：药物中的水分和挥发性物质1.常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物；温度：105℃2.减压干燥法适用于熔点低、受热分解的药物3.干燥剂干燥法适用于受热易分解或升华的药物干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷七、水分测定法卡尔·费休法费休氏液：I2、SO2、无水甲醇、无水吡啶原理：I2+SO2+H2O2HI+SO3

终点：费休氏液：淡黄→红棕色永停法八、炽灼残渣检查法炽灼残渣：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐加硫酸炽灼法：700～800℃;如炽灼残渣需留作重金属检查，500～600℃恒重：供试品连续两次炽灼或干燥后的重量差异在0.3mg以下九、易炭化物检查法检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，常采用加硫酸呈色后与对照液比较的方法进行检查。对照液为：标准比色液

由CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4

配制

KMnO4液十、残留溶剂测定法

主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂