机能学专题知识讲座

机能学专题知识讲座机能学专题知识讲座第1页目标

为适应当代素质教育需要，培养学生科学思维，获取知识、独立开展实际工作、利用新技术能、和创新意识与开拓精神和提升学生学习主动性与创造性，最终到达提升综合素质目标，有机融合生理、药理和病理生理学试验而新设置一门新型独立试验教学课程《机能学试验》。本门课是我校医学生必修基础课程之一.机能学专题知识讲座第2页生理、药理、病生教学试验过程机能试验学试验生理科学或机能学专题知识讲座第3页依据新开课程特点与要求编写机能学专题知识讲座第4页基础医学试验室机能学试验室机能学试验教学课程实施与准备生化与分子生物学试验室病原生物学试验室计算机试验中心形态学试验室管理机能学专题知识讲座第5页网络化多媒体机能学试验室1234设备机能学专题知识讲座第6页MS-4000生物机能试验系统设备是配置在微机上四通道生物信号采集、放大、显示、统计与处理系统,可同时输入4个生物机能信号，适合用于生理、药理、毒理和病理等试验。MS-4000计算机生物机能试验系统机能学专题知识讲座第7页机能试验室特色

机能试验学课是一门试验教学课程，专门针对学生进行系统、规范试验技能训练，为学生提供理论联络实际、大胆实际操作和主动思索机会。本课程经过对各种生理现象观察、动物病理模型制备和药品救治等方法系统学习，将三门学科知识融会贯通。愈加贴近临床实践。机能学专题知识讲座第8页

机能学试验课结合相关学科理论知识形成了本身特色，试验教学是本课程主要教学形式，并独立开课、单独考评，试验教学内容有基础知识和基础技能训练项目、综合性试验项目和探索性试验设计项目等三类试验项目。经过学习机能学试验课，掌握机能学科试验基础规律和基础技能、养成科学思维方法、提升实际工作能力，将为进行临床医学实践和医学科学研究打下坚实基础。机能学专题知识讲座第9页动物机能学

李荣教授机能学专题知识讲座第10页第一章、绪论第二章、常见试验动物基础知识第五章、医学试验设计第六章、安全试验和毒性试验机能学专题知识讲座第11页

一、动物试验学概述动物试验学Animalexperimentscience——是指在试验室内，经过动物试验进行科学试验研究，还包含各种试验技术，试验方法及技术标准科学。是一门新兴基础医学试验课程，综合了生理学、病理生理学、药理学三门学科理论知识和试验技能，使它们成为一个有机整体一门试验课程。研究对象——动物目标：经过试验教学锻炼和加强学生基础操作技能，培养和树立血色思念感严谨科学态度，启发和诱导学生科学思维方式，最大程度地调动学生主观能动性。第一章绪论机能学专题知识讲座第12页任务：（1）经过各种动物试验观察动物体中各种生命指征产生并探讨这些生命指征产生并滔滔这些生命指征产生原理，以及动物体在疾病状态写病理生理过程和药品处理前后这些生命指标改变。（2）使学生经过这种综合性试验既能看到试验中生理现象及其原理，又能看到疾病状态下疾病发生、发展、转归规律以及药品治疗疾病状态作用机能。（3）机能学试验是整个医学教学中主要组成个别，是“三基”培养中必不可少个别。机能学专题知识讲座第13页意义：生理学、药理学和病理生理学都是理论性和实践性较强学科，它们试验课以动物试验课为主。为了更加好地适应教育形势发展，落实“教育要面向当代化、面向未来”指示，更加好地按照国家教委“二十一世纪教学内容和课程体系改革”精神，以突出主干课、降低必修课、丰富选修课、加强试验课为标准，把生理、药理、病生学科试验课程精简、综合和提升，统筹安排而形成机能学，对加强学生试验操作、试验设计和综合分析等方面能力培养、完善学科间交叉与渗透，有效地发挥人力和物力作用。机能学专题知识讲座第14页动物试验学特点：内容丰富性——经过动物试验探讨机体正常、病理或药品干预情况下，相关器官功效改变及其规律。综合性能力提升——同学们经过学生相关理论、操作仪设备，进行试验（包含经典性、综合性和探索性试验）、设计试验病例分析，力争使本身综合能力有显著提升。这些能力包含摄取知识能力，动手操作能力，观察、比较、分析和综合能力，逻辑思维和处理问题能力，口头和书面表示能力，科学创新能力机能学专题知识讲座第15页动物试验学分类：依据教学与科研需要分为：教学试验和科研试验。教学试验——明确教学目标、观察试验反应和结果，分析讨论。科研试验——立题前准备、试验设计、试验方法确定、试验动物选择、试验技术、技巧要求和要求、统计、总结，对各项指标、数据进行统计学处理，撰写论文。机能学专题知识讲座第16页依据时间长短，可分为：急性试验和慢性试验。急性试验——普通是施以致病原因便于观察试验或者在麻醉情况下施以手术，将器官暴露、取出，在较短时间内，观察细小步骤改变。影响原因：因为受麻醉、手术创伤影响，试验结果常不完全真实，需要慢性试验和临床研究校正。慢性试验——是在较长时间内施以致病原因，使动物逐步致病，或者先在无菌条件下给动物施以手术并待手术创口愈合后，再进行试验观察。有利条件——动物情况较为靠近自然生活条件，能较长时间内连续观察，取得较为系统试验资料，有利于揭露疾病过程中整个生命活动改变规律或者药品作用。机能学专题知识讲座第17页依据试验对象可分为：在体试验——呼吸、休克。离体试验——蛙心、消化系统离体肠管。细胞培养

1）在体试验——是指整体动物作为试验对象试验，如在复制疾病动物模型基础上观察处理原因效应。

2）离体试验——是指经过手术把所需要器官从动物体内取出，再观察处理原因效应这么一类试验。优点：离体试验能排除动物神经体液等原因对试验效应影响，尤其适合观察药品作用试验。

3）细胞培养——是在培养组织细胞株基础上观察处理原因效应这么一类试验，它要求试验条件较多，多用于科学研究。机能学专题知识讲座第18页机能学课程主要内容及程序分三步：（一）基础技能训练一室—蛙脊髓破坏、蛙心插管

4h蛙坐骨神经腓肠肌标本制备

二室—手术器械认识及操作方法

4h静脉麻醉、气管切开、神经分离、颈静脉（动脉）插管、股动脉插管

三室—微机基础操作

4h（MS4000多媒体生物信号统计分4h析系统）

四室—胸腹部手术

4h心肺摘出、胆总管插管、离体肠管肠管结扎、股动脉插管机能学专题知识讲座第19页（二）难度较小综合性试验一室—骨骼肌单收缩、复合收缩和强直收缩及神经干动作电位4h

二室—水杨酸钠血浆半衰期T1/2测定4h

三室—急性右心衰竭4h

四室—消化系统功效调整及药品对肠管影响4h

（三）难度较大综合性试验一室—蛙心灌流及药品对离体蛙心作用4h

二室—尼可刹米LD50测定4h

三室—呼吸运动调整与试验性肺水肿抢救4h

四室—血压调整与失血性休克抢救4h

机能学专题知识讲座第20页动物试验学课程基础要求：为了更加好地表达老师主导作用和学生主体作用，老师和同学们都要认真严厉态度带好和学好机能学这门课程，这里着重谈对同学们要求。（一）、试验前1、认真预习试验指导相关内容，了解试验目标操作方法及试验操作重点领会试验设计原理。2、结合该次试验复习或者学习相关理论。3、做好小组组员分工，使每位同学都有机会训练基础操作和一起使用。4、依据观察指标设计统计试验数据表格。5、依据相关理论，预测试验结果。6、着手试验前要检验试验用具（器材和药品是否齐全）机能学专题知识讲座第21页（二）、试验时1、恪守课堂纪律和试验室守则2、严格按照实习指导步骤进行操作爱护试验动物器械和要品尽可能降低动物损伤和药品器械损耗，对珍贵仪器要倍加爱护，严格恪守操作规程。3、同学之间要亲密配合，认真观察试验中出现现象及时客观地统计试验数据必要时加上文字注释，不允许私自修改试验数据和凭空臆造，倘若出现与预期结果不一样时，要分析其原因，观察统计过程也就是培养严谨科学态度过程。4、试验过程要依据试验思索题进行思索问题，培养科学思维和处理问题能力。5、保持试验室平静，不做与试验无关活动，不谈与试验无关话题。6、注意安全严防触电火灾中毒及被动物咬伤等事故发生，万一出现事故，要马上汇报快速处理。7、讨论时要主动讲话，语言简练言之有理，言之有据。机能学专题知识讲座第22页（三）、试验后1、清洗擦干试验器械并放回原位，如有损坏和遗失要进行登记并寻找或赔偿。2、存活动物、动物尸体、标本及其它废弃物品等要放到指定地方，不得随意放置。3、值班同学要做好试验室清洁卫生工作，关好门窗水、电方能离开试验室。4、整理试验数据，认真地独立地撰写试验汇报，按时交给老师。机能学专题知识讲座第23页四、试验结果统计和处理

1、试验结果统计。试验统计是试验结果客观反应，也是分析试验结果依据，试验时要仔细观察，即使统计。要做到客观、完整、详细、清楚、如刺激种类、时间、强度、药品名称。剂量和给药时间。动物或标本对刺激发生反应表现、特征、强度与连续时间等。需指示是在试验中每次刺激或给药前对照。方便与刺激或给药后改变相比较。试验时要有耐性，要等前一项试验基础恢复正常后才可进行下一项试验要控制统计仪器走纸速度，不使统计曲线太密而不易区分和分析，也不要太疏而浪费纸张。同时，还要保持走纸速度前后一致。如试验中必需调整走速时一定要注明速度，方便在分析结果时换算成统一标准，以防作犯错误判断。机能学专题知识讲座第24页

试验中为研究某生理现象改变规律及特征，需用科学方法将新观察统计到结果转变成可测定性资料，所以需对试验结果进行整理和分析。首先，要对试验结果本质进行定性。比如。对引导电位要必定其是场电位还是动作电位，是细胞内还是细胞外，其方向是正还是负？是否为一个伪变等。凡属定量资料。如：高低、长短、快慢、大小等。均应以法定国际计量单位和数值表示，并依据需要进行统计学处理。有些结果可绘制成统计表或图形表示。再者如试验结果是一个随时间而改变过程，则应考虑其速度周期和频率。另外，还要考虑这种结果在机体何部位产生它空间范围。形态大小和分布等情况以确定现象和结构关系。试验结果处理机能学专题知识讲座第25页

试验汇报是对试验全方面总结。学生经过书写试验汇报，将掌握书写科学论文基础格式及绘图制表方法。为以后撰写科学论文等打下良好基础；经过对试验资料全方面总结。将深入提升分析综合概括问题能力；经过复习相关理论或查阅资料，对试验结果作出正确分析和解释，将有利于培养理论联络实际和应用知识能力。所以，每次试验结束后，完成试验汇报是非常主要。（一）、试验汇报写作要求1、凡是独立操作试验，均要求每位学生按照每一试验详细要求认真独立完成试验汇报书写。2、实眼汇报应按要求用统一标准试验汇报纸。写汇报应文字简练，条理清楚，观点明确，字迹整齐，并正确使用标点符号。试验汇报书写机能学专题知识讲座第26页（二）书写试验汇报详细内容

1、姓名，班级，组别（此内容写在试验汇报封面）

2、试验题目（名称）

3、试验目标与要求（目标）

4、试验方法和步骤——包含试验用动物，主要器材，药品等。

5、试验结果——这是试验汇报中最主要个别，应将试验过程观察到现象及时、忠实、正确，详细统计试验结果后，依据统计填写试验汇报。不可单凭记忆，不然易发生错误和遗漏。当前，医学论文多采取三线表、直方图、曲线或文字等方式表示试验结果。同学们要把试验过程取得数据、曲线、文字等原始资料加以整理，填入试验汇报适当位置。如用表格方式，就采取三线表。机能学专题知识讲座第27页6、讨论和结论——这是试验汇报质量高低主要个别。讨论要从试验结果出发，对试验结果进行科学分析、推理。分析要有理有据，推理要符合逻辑。可能话在分析推理基础上提出恰如其分结论。讨论时不应从书本上抄一段理论，对试验结果做普通解释，更不应剽窃他人试验汇报。如有参考资料应注明出处。出现与理论推倒不符试验结果时，应寻找原因（是操作失误？试验误差？个体差异？还是预测试验结果不科学？）。不允许私自改动数据，要在试验和书写试验汇报过程中培养严谨细致工作作风和实是求是科学态度。机能学专题知识讲座第28页所选试验动物中一个为啮齿类动物，另一个为非啮齿类动物。常见试验序列是小鼠、大鼠、狗、猴或小型猪。第二章常见试验动物基础知识机能学专题知识讲座第29页一常见试验动物生物特征（一）蟾蜍Toad—属于两栖纲，无尾目。1、生物学特征—蟾蜍(Bufbuiogargerizans)属于两栖类，无尾目。品种很多。属于两栖类变温动物，皮肤光滑湿润，有腺体无鳞片。幼年生活于水中，用鳃呼吸，食物以水中植物为主。蟾蜍经过变态后转入陆栖或半陆栖生活，有不发达肺，用肺和皮肤呼吸。以昆虫等幼小动物为食。有五趾形跗肢，适合爬行和跳跃。心脏有两个心房，一个心室，心房、心室区分不显著，动静脉血液混合。有冬眠习性。蟾蜍身体背腹扁平，头呈三角形，左右对称，眼大，突出于头部两侧，有上、下眼睑和瞬膜，有鼻、耳等感受器官。幼年为蝌蚪，有尾，变态后尾消失，前肢四趾，后肢五趾。蟾蜍无鸣囊，背部皮肤有许多疣状突起毒腺，可分泌蟾蜍毒，以耳后椭圆形耳腺分泌最多。和捕捉。机能学专题知识讲座第30页(2)试验应用

蟾蜍广泛用于生理学科研和教学中。用蟾蜍腓肠肌和坐骨神经可观察外周神经及其肌肉功效，刺激蟾蜍皮肤观察反射弧，用蟾蜍作脊休克、脊髓反射、微循环等试验。利用蟾蜍离体心脏，研究心脏生理功效。蟾蜍还可用于生殖生理、药理学、胚胎发育、免疫学等研究。机能学专题知识讲座第31页（二）兔Rabbit—属哺乳纲。啮齿目。兔科。1、生物学特征—草食动物，性情温顺，胆小易惊，耳大，血管清楚。颈部减压神经，交感神经和迷走神经分开。喉部狭窄。家兔正常体温在38．5—39．5~C。静态时以腹式呼吸为主，每分钟35—56次。胃常处于排空状态，小肠吸收功效与人一样。钙磷代谢主要是经过肾脏。2、试验应用—家兔广泛应用于医学研究中，尤其是用于科研和教学中。在机能教学试验中，因为兔耳缘静脉浅表，易暴露，是静脉给药最正确部位。兔减压神经在颈部与迷走神经、交感神经分开走行而单独成为一束，常见于研究减压神经与心血管活动关系。家兔用于心血管反射调整、呼吸运动调整、泌尿功效调整以及神经放电活动试验等。另外，家兔还用于免疫学、药理学、毒理学、生殖生理学、眼科以及临床疾病研究。机能学专题知识讲座第32页

家兔复制疾病模型与其它试验动物比较有以下特点：①体型较鼠大；比狗体型小，性温驯，易喂养，繁殖率高。所以，当试验中须用较大动物时，常见家兔。②在血液循环方面，轻易做到直接描记动脉血压，股动脉压，肺小动脉楔入压，中心静脉压等。观察血压反应不如狗，猫。兔减压神经则是独立走向，便于观察减压神经对心、血管系统作用。家兔心脏在离体情况下，搏动很久，是观察有害因子对哺乳类动物心脏直接作用较适合一个模式。离体兔耳，又可作为观察有害因子对血管直接作用一个模型。③家兔适宜于研究发烧，解热药和检验致热源。④消化系统：与人类相差较远，不宜做这方面研究⑤其它：对组织胺不敏感，注射组织胺并不引发血压下降，不能造成过敏性休克模型。机能学专题知识讲座第33页（三）小鼠Mouse—小鼠属于啮齿类动物，体型较小，普通体重在50g以内。小鼠性情温顺，易于捕捉，胆小怕惊，对外来刺激敏感。喜群居于阴暗环境，昼伏夜动。小鼠为杂食性动物，胃容量小，不耐饥渴，随时采食。体温改变大，对环境湿、温度改变很敏感。适宜温度为18℃，相对湿度为50％—60％。小鼠成熟早，繁殖力强，寿命1—3年。机能学专题知识讲座第34页(2)试验应用小鼠在试验中用量大，用途广。小鼠试验研究资料丰富、参考对比性强；其试验结果科学性、可靠性和重复性高，被广泛用于各类科研试验中，如用于生理学小脑功效障碍试验等，用于药理学、肿瘤学、遗传学、免疫学以及临床疾病试验研究。小鼠复制疾病模型，较其它动物含有以下主要特点：①小鼠价格低廉，便于大量繁殖，适适用于需要大量动物试验，轻易满足统计学要求。比如：药品半致死量测定。②小鼠对许多疾病有易感性，因而适适用于研究如血吸虫、疟疾、流感、脑炎等这类疾病；小鼠纯品系甚多，每系有其独特生物特征，对一些疾病易感。小鼠广泛用于各种肿瘤研究。③器官小。研究组织学电镜观察时节约人力，物力。④有发达神经系统，应用于复制神经官能症模型．

机能学专题知识讲座第35页（四）猫(Cat)学名Feliscatus(1)生物学特征猫属于哺乳类动物。喜爱孤独而自由生活，喜居于清洁、明亮、干燥环境。猫大脑和小脑均很发达，猫眼能按照光线强弱改变而灵敏地调整瞳孔大小。

(2)试验应用猫是医学研究中常见试验动物之一。尤其在国外试验研究中较普遍使用。在生理学试验中，因为猫含有极为敏感神经系统，头盖骨和脑形状固定，是脑神经生理学很好试验动物。在电极探针插人大脑各部位生理学研究方面现已完全标准化，能够在清醒条件下研究神经递质等活性物质释放和条件反射，外周神经与中枢神经联络。还可做去大脑僵直、交感神经瞬膜和虹膜反应以及呼吸、心血管反射调整试验等。另外，猫也用于药理学和临床疾病试验研究。

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狗(Dog)学名Canisfamiliaris(1)生物学特征狗属于哺乳类动物。狗品种多，个体差异大。狗听觉、嗅觉灵敏，反应灵敏，对外界环境适应能力强。易喂养，可调教，能很好地配合试验研究需要。狗喜食肉、骨，生性好动，有良好耐力。狗含有发达血液循环与神经系统，脏结构及其百分比与人相同，是比较理想试验动物。

(2)试验应用狗是当前基础医学研究和教学中常见试验动物之一。在生理与常见于心血管系统、脊髓传导、大脑皮层功效定位、条件反射、内分泌腺摘除和各种消化系统功效试验研究。狗还用于药理学、毒理学、行为学、肿瘤学、核医学以及临床一些疾病研究。狗尤其应用于机能学专题知识讲座第37页

一、试验设计目标试验设计(experimentaldesign)是科学研究一个组成个别。在整个科研过程中，普通是依据对事物认识提出某一问题，经过文件查阅归纳前人成就和看法，进行逻辑推理，从而形成一个有科学依据构想和假设。在此基础上设计用以证实该构想技术路线，并选择适当试验方法，安排试验步骤、然后进行试验观察和累积资料。经过数据处理和统计分析，最终得出结论来验证当初构想和假说。试验设计是否严密，直接关系到试验结果准确性和结论可靠性。良好试验设计是由比较经济人力、物力和时间，取得较为可靠结果。使误差减至最低程度。还可使各种处理原因包含在极少几个试验中，到达高效目标。不重视试验设计和设计不周密，可因取得数据不完全或不可靠而使试验失败；也可能是大量浪费人力而事倍功半。第五章机能学试验设计机能学专题知识讲座第38页进行新课题研究或初做科学试验者，极难一开始就做出周密设计。所以需要做预备试验。预备试验是依据原始假说作初步探索，也是对原始假说作非正式验证。同时也是对初步确定采取试验方法和操作步骤进行演练。预备试验结果对原始假说，试验方法和技术操作做必要修改，为正式试验设计做好准备。二、试验设计题目标选择选题好坏决定该研究工作价值和试验成功率。选题好坏标准主要有以下几方面。

1．创新性科学研究为创新性工作，仅仅重复他人试验不是科研，所以研究问题必须是他人没有研究过，或虽有些人研究过但还不能做结论问题。所以必须检索我国外相关文件和科研新资料，以确保课题新奇。

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2．科学性研究问题必须有一个构想，再设计试验去证实构想是否正确，构想不是凭空瞎想，而应有一定科学依据，也就是要有科学性。

3．目标性医学研究目标是为了说明生理现象、病理改变、探索疾病发生发展规律和机制、探索疾病防治方法、药品作用机制等等，有一定理论或实用意义科学研究才有研究价值。

4．可行性必须具备进行该课题研究所需试验条件，再好课题假如不具备研究条件也无法进行。三、试验设计几个基础问题

1．试验设计三大标准：试验设计三大标准是指对照、随机和重复。原由Fisher氏提出，现被普遍接收。机能学专题知识讲座第40页(1)对照(Control)

普通来说，试验都应有试验组(处理组)和对照组，对照组与试验组含有同等主要意义。这是因为在试验中极难防止非试验原因干扰而造成误差。用对照组方法能比较有效地消除各种非试验原因干扰所造成误差。

①同体对照：即同一动物试验前后(或施加特定影响前后)取得结果及数据作对照。这种对照能够最大程度地降低抽样误差。②异体对照：在动物试验中，普通是选取体重相近，性别相同者进行配对或分组。③空白对照：指不给任何处理对照。但在大多数情况下，都必须给对照组一个与试验组条件相同但不加特定影响处理。④资料对照：即以文件资料或历史、他地、他人资料作为对照。但因为时间、地点和条件不一样，差异相当大，动物试验普通不采取。

机能学专题知识讲座第41页(2)随机化(randomization)

随机不是随便而是随机遇而定，也就是指被研究样本是总体中任意抽取，即在抽取时要使每一样本有同等机会被抽取，随机抽样是缩小抽样误差基础方法。在试验中，对照组与试验组除某种特定处理原因不一样外，其它非特定原因最好是完全一样，均衡。实际上完全一致和绝对均衡是不可能，只做到基础上一致和均衡，这主要经过随机抽样来完成。随机抽样方法很多，如抽签法、模球法。也可查随机数字来确定，详细方法请参考相关书刊。

机能学专题知识讲座第42页(3)重复(replication)

每一试验应有足够例数和重复数。样本所含数目越大或重复次数越多，则越能反应机遇变异客观真实情况，所以重复可反应试验结果可靠性，不过样本例数很多或试验重复次数很大，非但在试验上有一定困难而且也是无须要，试验设计就是要使样本重复次数降低到不影响试验结果最小程度。试验结果重现率最少要超出95％，这么做出假阳性错误判断可能性小于5％(P<0．05)。假如一定数量样本就能取得P<0．05水平试验，当然要比过量样本取得P<0．05试验更可取。决定样本例数取决于：①处理效果大小，效果越显著所需重复数越小；②试验误差，误差越小所需样本数降低；③抽样误差，样本个体差越小，反应越一致，所需样本数就小；④资料性质，计数资料样本数要多些，计量资料则对应降低。

机能学专题知识讲座第43页2．试验对象选择：在基础医学研究中，试验对象包含动物、离体脏器或游离肢体、分离而得活细胞成份、在试验室中已长久培养细胞或细菌。生理科学试验课程中试验对象以试验动物为主。试验动物选择适当是否与试验成败及误差大小有很大关系。其选择关键点是：

(1)动物种类尽可能选择靠近于人类而又经济动物；

(2)依据试验要求进行品种和纯度选择。在有些试验中，需用纯种(近交系)动物；

(3)动物状态和营养情况良好；

(4)最好选取年纪一致或靠近动物，体重一致或相近动物。

(5)动物性别最好相同，如对性别要求不高试验可雌雄混用，分组时应雌雄搭配开。与性别相关者，只能用某一性别动物。

机能学专题知识讲座第44页3．观察指标选择：指标是在试验观察中用来指示(反应)研究对象中一些特征(如对药品效应)可被研究者或仪器感知一个现象标志，也就是说，医学试验指标是反应试验对象所发生生理现象或病理现象标志，指标可分为计数指标和计量指标，或主观指标和客观指标等等。所定指标，最少要符合下述基础条件：

(1)特异性指标应特异地反应所观察事物(现象)本质，即指标特异地反应某一特定现象，不至于与其它现象混同。如高血压中血压尤其是舒张压就可作为高血压病特异指标。

(2)客观性最好选取可详细数值或图形表示指标(如脑电图、心电图、血压和呼吸描记、化验检验等等)。因为主观指标(如肝脾触诊。目力比色等)易受主观性原因影响而造成较大误差。

机能学专题知识讲座第45页3)重现性普通来说，客观性指标在相同条件下能够重现，重现性高指标普通意味着无偏性或偏性小，误差小，从而较正确反应实际情况。重现性小可能与仪器稳定性、操作误差，受试动物机能状态和试验环境条件影响相关。若非这些原因影响而重现性小指标不宜采取。

4)灵敏性指标测量技术方法或仪器灵敏是极其主要。方法不灵敏，该测出改变测不出来，就会得出“假阴性结果”，仪器不精密，所获阴性数值不真实。当前常见分光光度计，放射免疫法等，因为灵敏度较高常被采取。

5)技术和设备可能性尽可能选取即灵敏客观，又切合本单位和研究者技术和设备实际指标。

6)指标选定必须有依据现成(定型)指标，必须有文件依据：自己创建指标必须经过专门试验判定。

机能学专题知识讲座第46页4．指标观察和统计：观察和统计在科学试验活动中，占有十分主要地位，为了正确地观察和统计，试验统计时要严谨、细致、实事求是，力戒主观偏性。要重视原始统计、在试验设计中应预先要求或设计好原始统计方式。原始统计时要及时、完整、正确和整齐，禁止撕页或涂改。原始统计不论是什么统计方式都必需写明试验目、试验对象、试验方法、试验条件、试验者、试验日期、统计好观察测量结果和数据机能学专题知识讲座第47页

对照可分为：①同体对照：即同一动物试验前后(或施加特定影响前后)取得结果及数据作对照。这种对照能够最大程度地降低抽样误差。②异体对照：在动物试验中，普通是选取体重相近，性别相同者进行配对或分组。③空白对照：指不给任何处理对照。但在大多数情况下，都必须给对照组一个与试验组条件相同但不加特定影响处理。④资料对照：即以文件资料或历史、他地、他人资料作为对照。但因为时间、地点和条件不一样，差异相当大，动物试验普通不采取。

机能学专题知识讲座第48页(2)随机化(randomization)

随机不是随便而是随机遇而定，也就是指被研究样本是总体中任意抽取，即在抽取时要使每一样本有同等机会被抽取，随机抽样是缩小抽样误差基础方法。在试验中，对照组与试验组除某种特定处理原因不一样外，其它非特定原因最好是完全一样，均衡。实际上完全一致和绝对均衡是不可能，只做到基础上一致和均衡，这主要经过随机抽样来完成。随机抽样方法很多，如抽签法、模球法。也可查随机数字来确定，详细方法请参考相关书刊。机能学专题知识讲座第49页

(3)重复(replication)

每一试验应有足够例数和重复数。样本所含数目越大或重复次数越多，则越能反应机遇变异客观真实情况，所以重复可反应试验结果可靠性，不过样本例数很多或试验重复次数很大，非但在试验上有一定困难而且也是无须要，试验设计就是要使样本重复次数降低到不影响试验结果最小程度。试验结果重现率最少要超出95％，这么做出假阳性错误判断可能性小于5％(P<0．05)。假如一定数量样本就能取得P<0．05水平试验，当然要比过量样本取得

P<0．05试验更可取。决定样本例数取决于：①处理效果大小，效果越显著所需重复数越小；②试验误差，误差越小所需样本数降低；③抽样误差，样本个体差越小，反应越一致，所需样本数就小；④资料性质，计数资料样本数要多些，计量资料则对应降低。机能学专题知识讲座第50页

2．试验对象选择：在基础医学研究中，试验对象包含动物、离体脏器或游离肢体、分离而得活细胞成份、在试验室中已长久培养细胞或细菌。生理科学试验课程中试验对象以试验动物为主。试验动物选择适当是否与试验成败及误差大小有很大关系。其选择关键点是：

(1)动物种类尽可能选择靠近于人类而又经济动物；

(2)依据试验要求进行品种和纯度选择。在有些试验中，需用纯种(近交系)动物；

(3)动物状态和营养情况良好；

(4)最好选取年纪一致或靠近动物，体重一致或相近动物。

(5)动物性别最好相同，如对性别要求不高试验可雌雄混用，分组时应雌雄搭配开。与性别相关者，只能用某一性别动物。

机能学专题知识讲座第51页3．观察指标选择：指标是在试验观察中用来指示(反应)研究对象中一些特征(如对药品效应)可被研究者或仪器感知一个现象标志，也就是说，医学试验指标是反应试验对象所发生生理现象或病理现象标志，指标可分为计数指标和计量指标，或主观指标和客观指标等等。机能学专题知识讲座第52页

所定指标，最少要符合下述基础条件：

(1)特异性指标应特异地反应所观察事物(现象)本质，即指标特异地反应某一特定现象，不至于与其它现象混同。如高血压中血压尤其是舒张压就可作为高血压病特异指标。

(2)客观性最好选取可详细数值或图形表示指标(如脑电图、心电图、血压和呼吸描记、化验检验等等)。因为主观指标(如肝脾触诊。目力比色等)易受主观性原因影响而造成较大误差。

(3)重现性普通来说，客观性指标在相同条件下能够重现，重现性高指标普通意味着无偏性或偏性小，误差小，从而较正确反应实际情况。重现性小可能与仪器稳定性、操作误差，受试动物机能状态和试验环境条件影响相关。若非这些原因影响而重现性小指标不宜采取。机能学专题知识讲座第53页(4)灵敏性指标测量技术方法或仪器灵敏是极其主要。方法不灵敏，该测出改变测不出来，就会得出“假阴性结果”，仪器不精密，所获阴性数值不真实。当前常见分光光度计，放射免疫法等，因为灵敏度较高常被采取。(5)技术和设备可能性尽可能选取即灵敏客观，又切合本单位和研究者技术和设备实际指标。(6)指标选定必须有依据现成(定型)指标，必须有文件依据：自己创建指标必须经过专门试验判定。机能学专题知识讲座第54页

4．指标观察和统计：观察和统计在科学试验活动中，占有十分主要地位，为了正确地观察和统计，试验统计时要严谨、细致、实事求是，力戒主观偏性。要重视原始统计、在试验设计中应预先要求或设计好原始统计方式。原始统计时要及时、完整、正确和整齐，禁止撕页或涂改。原始统计不论是什么统计方式都必需写明试验题目、试验对象、试验方法、试验条件、试验者、试验日期、统计好观察测量结果和数据。要求填写项目要及时、完整、正确地填写好。图形、图片一定要整理保留。

机能学专题知识讲座第55页

研究者不但要设法取得原始资料或数据。而且要应用数理统计学原理和方法来处理数据和对数据进行分析判断。

(1)首先必须把试验中原始资料或数据完整地搜集起来，经过归纳、整理使之系统化、标准化。

(2)其次进行统计指标计算，算出各组数据均值或百分数(率或比)。如是计数指标，普通用百分数表示之；若为计量指标，则计算出均值，最好还标明均数标准差，进而标明百分数或均数标准误。

机能学专题知识讲座第56页

(3)最终进行统计学显著性测验，测量均值或百分数对预计总体可能程度；比较两组以上统计数值之差异是否显著，以此推论事物普通规律，或否定原先假说或使上升为结论或理论。

5．填写试验设计书研究题目：理论依据及研究现实状况：研究内容：研究方法：试验对象：性别:规格：数量：试验组与对照组处理：观察指标：试验步骤：仪器与药品：预期试验结果：设计人：机能学专题知识讲座第57页四、试验设计初步练习高等医学院校学生应初步含有对生理过程或疾病进行试验研究能力。学生自行设计生理学科试验是依据已掌握理论知识和技能，经过逻辑推理，拟出在课程时间范围内实际条件允许下主要以动物为对象试验方法，来验证某一问题，以培养初步掌握试验设计标准，以提升教学质量。

机能学专题知识讲座第58页

试验设计中需要注意问题设计是严密直接关系到试验结果准确和结论可靠性。不重视试验设计或设计不周密都会使试验结果资料紊乱或残缺不全，得犯错误结论，造成试验失败。机能学专题知识讲座第59页

对学生自己设计试验除了参考前面试验设计一些标准和方法外，必须注意以下几点：

1．目标明确：经过试验需要处理问题必须明确。题目简练，内容不宜大不宜杂。一个试验处理一个问题或1—2个主要问题。

2．科学性强：试验设计要充分理论依据和试验依据。包含前人已经有成就，已经指出问题或得出结论。

3．指标明确可靠：易观察、易客观统计、重复性好，得出结果和结论能说明问题。

4．切实可行：试验对象是易得常见小试验动物(兔、大鼠、小鼠、蛙或蟾蜍等)。机能学专题知识讲座第60页

试验器材、药品试剂等宜简易价廉。试验普通控制在4—5小时内完成。试验分组和对照动物试验是一个特定处理(急性失血、缺氧)作用于动物后观察某种或一些反应(如血压、呼吸改变)以确定处理与反应间因果关系。若处理强度、处理连续时间不一样，或用同一方法处理不一样对象(动物种属、性别、年纪不一样)，则将试验分设若干组，每组有一定数量动物。除试验组外，必须设置对照组，在试验中有非特定原因如抓捉、体位、手术暴露、温度及其它种种原因影响。为使这些非特定原因影响降低最低程度设置对照组，对照可在自体身上也可在异体动物身上进行，注意事项可参阅试验设计和统计分析介绍。机能学专题知识讲座第61页五、试验设计项目1．请设计一离体回肠试验，证实一个药品经过阻断M胆碱受体而抑制肠平滑肌收缩。2．请设计一试验，证实Adrenaline对兔血压作用及可能机制。3．试设计一动物试验，证实Diazepam预防性抗惊厥作用。4．减压反射传出神经及其效应分析。5．骨骼肌不定时测定。6．神经干动作电位产生与Na+关系。7．迷走神经对胆囊收缩作用。8．某一未知药品对动物呼吸影响。

机能学专题知识讲座第62页

第一节安全试验一、凝血时测定方法血液自体内流出体外为溶胶样，在体外变为凝胶样，谓之血凝；由溶胶样变为凝胶样所需时间，称为凝血时。测定凝血时方法有：

(一)玻璃片方法取兔作受试对象。在兔耳中央动脉处剃去被毛、消毒。用手术刀片把动脉切开一个小口，使其自然流出血液，开始流出血，用棉球擦去，接着从血管流出血，取下后分别滴在清洁载玻片上。血滴直径应在5—lOmm，血液滴在玻璃片上就开始记时，每隔30秒就用干燥针头挑动血滴一次，直至针头能挑起纤维蛋白丝为止。发觉有纤维蛋白丝，就马上停表。从开始到停表，所经过时间就是凝血时。此法可作同体对照。给药前和给药后，用一样方法采血，一样方法测定血凝时间。这么，就能够测出被测这种药品是否对血液凝固有所影响。此法不足之处为每挑动一次，就促使血液凝固加速一些，从而测出凝血时准确性有误差。此法只可作筛选止血药品初步方法。第六章安全试验和毒性试验机能学专题知识讲座第63页(二)试管法用内径8mm试管一支，在兔心脏取血2ml马上拿下针头，针管靠近试管壁，缓缓地把血倾人试管lml，马上记时。然后把这支试管放入水温37℃水浴槽。约经过约3分钟之后，每隔30秒将试管倾斜一次，观察血液流动情况，直至出现血凝为止，出现后，马上记下凝血时间。以血液注入试管开始，至凝血出现为止。这段时间就是凝血时。在此之后，用一样方法再作第二管。以第二管凝血时间为凝血时。用此方法时，一定要注意载玻片、试管、针头、针管等都要清洁洁净、干燥。倾斜试管要迟缓，倾斜度不要过大。机能学专题知识讲座第64页

不论从兔耳中央动脉、耳缘静脉，还是从兔心脏取血，动作一定要快，不要使血液凝结在注射器内。室温对凝血有影响。测试血凝室温当在15℃，水浴槽中水温一定要保持37℃。温度过高或过低，都会影响血液凝固时间。此法能够进行一样对照，即用同一动物给药之前测一次凝血时，然后给药。通常在给药后一小时再次测试凝血时。两次相对照，能够测定该药是否对血凝过程有影响。取血用内径为1mm毛细玻璃管，将此管直接插人眼后静脉丛。方法是从眼角球后穿刺。毛细玻璃管内血柱升至5cm即可。然后，每隔30秒，折断一段毛细玻璃管，观察是否出现血凝。这么一直连续到出现血凝丝时间为止。从毛细玻璃管内血柱到达5em之际开始到出现血凝丝为止，这段时间即为凝血时。机能学专题知识讲座第65页

(四)血浆复钙凝血时间测定方法在用脱钙剂抗凝血液中，再加入钙离子，使其重新恢复凝血作用，此时凝血时间与血液中全部凝血因子都相关。药品或其它处理原因只要对其中任一个凝血因子起作用，都会造成凝血时间改变。这种方法是用血浆进行，所以可称之为血浆凝血时间测定法。操作过程：以家兔为受试对象。从其颈动脉或股动脉，从静脉或直接从心脏取血均可。取血量4．5ml将其放人装有浓度为3．8％枸橼酸钠浴液0．5ml离心管中，以防凝血。与此同时，取另一支离心管，放人同等数量血加入0．5ml生理盐水。将此两个离心管混匀之后，放人离心机内对称位置上，开动离心机，以1000r／分速度离心10分钟。停机取出。取两支直径为8mm试管，其第一支管内放人lml血浆，第二支管则放入同第一支离心管等重蒸馏水。两支试管各加入0．025mol／1CaCl2然后把它们同时放入水温37℃水溶槽中，马上计时，到纤维蛋白形成，这段时间就两支试管作一样试验，方便对照比较不一样情况下溶液钙凝血时间差异。机能学专题知识讲座第66页二、出血时测定方法穿破试验动物毛细血管，然后观察，自开始出血，到自然止血，这一段时间为出血时间。详细操作方法是：取18—22g体重小白鼠，雌雄皆可。将其固定后，把尾部剪去一段，其截面直径大约为3mm处为宜。自尾端断面出血开始记时，血止住后停顿记时。这段时间为出血时。出血时与毛细血管收缩功效、组织因子血小板功效、钙离子等原因相关。机能学专题知识讲座第67页三、创面止血方法

(一)动物动脉切口止血试验选取试验动物能够是狗、猫、兔、豚鼠、大鼠。甚至可选取猪、牛、羊等大动物。详细操作方法是：动物麻醉后，将股动脉剥离出4—5em。用动脉夹将这段动脉两端夹住，阻断血流。取手术刀或眼科剪刀将暴露出股动脉在两动脉夹之间切或剪一小口，切口大小为动脉管1／3。切开后，放开两端动脉夹，擦去喷出血液，马上敷止血剂。在敷药创口压上500g砝码，压1分钟，观察止血效果。观察3分钟，假如依然出血，可撒止血药粉(药膜)继续加压。每隔30秒观察一次。假如超出5分钟，出血仍不止，则能够认为所测止血剂“未能止血”。假如试验用狗，其动脉加压可为500g砝码，可加压3—5分钟。给家兔加压3分钟后血仍未止，即可认为此药“未能止血”。机能学专题知识讲座第68页

(二)犬或兔肝、脾等器官止血试验常规消毒后，切开腹腔，暴露出肝脏或脾脏。用纱布将其牢牢靠定，以防脏器回缩，但固定时亦不宜用力过大、固定过紧会影响动物血液循环。在纱布固定部位，切下一小块肝(或脾)组织，造成创面。假如所切是肝则应长4cra以上，宽1．5—2cm，高1—1．5cm以上，创口处最少应有一个或一个以上小动脉喷射状或喷泉样出血。假如是脾脏创面应长3cm以上，宽、高各lcm以上，创面应有血液涌出，而且伴有一个以上小动脉喷血或喷泉样出血。此时应马上撒上止血药粉或药膜，敷盖上纱布，稍加压力或不加压。除此以外未用其它方法止血条件下，肝(或脾)创面短时间内止血，而且经过屡次重复试验，80％以上试验结果是能够止血，那么这种药品被证实为有止血效果。机能学专题知识讲座第69页四、兔眼结膜微循环观察取家兔一只，雌雄不限，体重应为2—3kg。麻醉后倒卧固定。用开眼器将左眼睑分开，在落射光源照射下用6X8倍显微镜观察。观察指标是：正常眼球结膜微动脉交叉成网，与静脉基础平行，但血流方向相反。微动脉血流快，微静脉血流慢。前者走行直，后者呈波浪式。在病理情况下，血管显著扭曲，甚至有打结现象。而微动脉弯曲呈直角，或者为乱麻式。观察动、静脉收缩与扩张改变情况：正常情况下动、静脉口径百分比为1：2。高血压、动脉硬化等疾病使微动脉口径变小。长久高血糖和红斑狼疮等疾病使血管显著扩张。正常情况下，微血管光滑，口径由粗变细。病态时，血管有瘤状膨大处，局部微血管可能也出现棱形或三角形。正常情况下血管清楚，病理情况下有渗血或出血现象。正常血流多见为粒线流态。假如出现血球聚集现象，则为病态。若出现在微静脉和毛细血管，则说明是局部病变；若出现在微动脉，则说明病变已扩及全身。机能学专题知识讲座第70页五、家兔肠系膜微循环观察取家兔一只，雌雄不限，体重为2—3kg。常规消毒后，局麻或全麻，从腹部正中切开，轻轻将游离肠袢拉出体外，把肠系膜放人灌流盒内，置于显微镜载物台上，用6X8或10X40倍显微镜进行观察。操作时手动作要轻，以免拉破膜，造成出血或者刺激过大，产生反射性血压下降。观察指标是：肠系膜微动脉与微静脉伴行，交叉成网状。同时可观察内皮细胞是否有肿胀，损伤和脱落现象，是否有白细胞粘附、血小板粘附等现象。操作过程中灌流液一定要使用生理盐水或复方生理盐水。灌流液配方是：(配制1000ml溶液)NaCl9．02g、KCl4．2g、CaCl20．24g、葡萄糖粉0．90g、明胶10g、加水至1000ml，然后用0．5mol／1NaHC03PH至7．35—7．45，渗透压295—305mEg／l。如有条件，灌流液中应与6．5％026％C02及N2平衡。机能学专题知识讲座第71页六、大鼠软脑膜微循环观察大鼠1只，体重为220—320g，麻醉后将其固定在手术台上。切开头皮，暴露顶骨。先在小脑延髓池用4号针穿刺，抽出0．2ml脑脊液、降低脑压。然后在左顶骨中间，用颅骨钻开窗，形成0．5em直径圆形骨孔，用骨胶止血，或用温盐水棉球压迫止血。剪去硬脑膜暴露出软脑膜，用37℃人工脑脊液作间断灌注，以防干燥。固定大鼠头部，在落射光源下用6X8倍显微镜观察。观察指标为：脑膜微动脉呈鲜红色，微静脉为暗紫色。微动脉相互贯通。在微动脉中常有血液倒流现象。微动脉与对应微静脉不平行。微动脉管较细。位置较浅表，分支较少。不曾发觉动、静脉有吻合支存在。机能学专题知识讲座第72页

人工脑脊液配方为：Na+150mmol、K+3mmol、Ca2+2．5mmol、Mg2+1．2mmol、Cl—132mmol、葡萄糖3．7mmol、尿素6mmol、HC03—25mmol、加水至1000ml。如有条件，须与6．5％02、6％C02和N2平衡，并保持温度为37℃。七、小鼠耐低压缺氧试验低压缺氧装置由密闭玻璃容器、压力表、平衡桶和抽气泵等4个别组成。取用小鼠10只将其分为给药组和对照组，各5只，作好标志。然后放入密闭玻璃容器内。以抽气泵抽平衡桶内空气，直至一定负压。通常调整压力表(真空表)，使表针指向负70．49kPa(53-0mmHg)后，停顿抽气。在此之后，打开活塞，开动秒表计时，统计下小鼠死亡时间；或者观察到小鼠死亡到半数(4—6只)时，即打开容器，统计下两组小鼠存活数。这种试验重复数次，将两组总存活率进行x2测验。机能学专题知识讲座第73页

试验中应注意以下几点：第一、小鼠体重相差不得超出2g最好用同一性别。假如雌雄各半，两组搭配应该均匀。第二、如试验目标是突出心肌作用，能够同常压缺氧法，注射异丙肾上腺素。为了不使小鼠突然进入低压缺氧状态，可在抽气时同时开B、C两个活塞，经过C活塞控制负压，使之逐步增高。这种方法称逐步减压法，亦称登高试验法。比如，每隔10分钟左右，降气压13．3kPa(100mmHg)，使小鼠因逐步缺氧而死亡。至死亡二分之一时，打开瓶塞，计算存活率。评价基础同常测氧法。机能学专题知识讲座第74页八、小鼠耐缺氧试验将体重相等或体重相差不超出2g小鼠随机分组，分别放入容积相同(150—250g)密闭广口瓶内。瓶内装有同等数量(5—l0g)钠石灰，以吸收水份和二氧化碳。瓶口涂以凡士林，放入小鼠后将瓶密闭。以秒表统计呼吸停顿时间。每次试验均应设空白对照组和试验组。每瓶小鼠不应少于10只。计算死亡时间平均数±标准差。作死亡测验，比较组间显著性。

机能学专题知识讲座第75页操作中应注意：第一、要求选择体重相近小鼠，体重相差不得超出2go要求性别相同；如雌雄各半，则应搭配均匀。第二、要求各瓶容积相等，瓶口严密。第三、钠石灰应是新鲜，颜色改变后，应马上更换。第四、因为本方法特异性不高，影响原因较多，所以在作本试验时，可同时用补充方法以突出观察心脏作用。在试验前15分钟给小鼠皮下注射5—20mg／kg异丙肾上腺素，增加其心肌耗氧，从而增加心肌缺氧在死亡原因中比重。亦可在密闭橡皮塞上安装缺氧电极，使之与瓶内空气相接触，用测氧仪测定不一样时间氧消耗速度和死亡时氧余存量(％)。以存活时间、氧耗数率、死亡时氧余存量机能学专题知识讲座第76页九、热原试验这三者综合判断效果。热原又名致热原，是革兰氏阴性菌细胞壁内毒素。药品，尤其是注射剂若含有热原就会使人发烧。当前各国检测热原方法主要是“家兔发烧试验法”，通常见于药品检定试验，现已人药典法定热原检验法。

(一)器具准备，试验用注射器、针头及一切与供试晶溶液接触器皿，均应置于烘箱内，以250~C高温加热30分钟，或以180~C高温加热2小时，待其冷却后使用。亦可使其它适当方法，除去所用器物热原。机能学专题知识讲座第77页

(二)试验动物要求和准备选择体重在1．7—3．Okg健康试验家兔，雌雄均可(如是雌兔，应是无孕者)。测温前7天一切条件(饮食、环境等)应保持一致，使试验动物精神、食欲、排便、排尿等均正常。未经使用热原检验家兔，应在试验前7日内预测体温，进行挑选。挑选试验条件，与检验供试品时相同，但不注射药液。每隔1小时测量体温1次，共测4次。假如4次测温均在38．0—39．60℃范围之内，而且最高和最低体温相差不超出0．4℃家兔方可供试验使用。用于热原检验之后家兔，如供试品判定为符合要求，最少应让其休息2日，方可第二次选来做检验使用。其中升温达0．6℃家兔，如需再用时，应按从未经过测温家兔来挑选。假如供试品被判定不符合要求，而且全组家兔平均升温高达0．8cC或更高时，则该组全部家不再使用。如平均升温未到达0．8℃时，则这组家兔最少应休息两周，而且再使用时按未经测温挑选家兔论。

机能学专题知识讲座第78页

每只家兔使用次数，假如是用于普通药品检验，则不应超出10次。两次使用间隔时间超出3周时，应按未经测温挑选家兔论。在作热原检验之前1—2天，全部供试用家兔应处于同一个环境之中，试验室温差不得大于5℃，试验室温度应保持在17—28℃。在试验过程中，应尤其注意室温改变，上下波动幅度不得大于3t。要防止家兔骚动。在停顿给药2个小时以后，用肛温计(或用其它准确测温装置)测量肛门内体温。肛温计插入肛门深度应各兔相同；通常为6cm左右，每隔30—60分钟，即测量体温1次。通常测2—3次。最终两次所测体温之差不得超出0．2℃。以此两次体温平均值作为该免正常体温。当日使用家兔，其正常体温应在38．O℃，3只家兔之中有1只体温升高0．6℃或0．6℃以上，或者3只家兔体温升高度数虽都低于0．6℃，但它们体温升高总度数却到达1．4℃或以上时，则应另取5只家兔进行复试。其检验方法同上。机能学专题知识讲座第79页(三)检验方法取用适当家兔3只，测定其正常体温后15分钟之内，自其耳缘静脉注入要求剂量供试品溶液，此时溶液必须已温热到38℃。在此之后，每隔1小时便按前法测其体温1次，先后共测3次。3次体温中最高1次减去正常体温，得出该家兔体温增高度数，以此指标来综合判断试验结果。可用乌拉坦(氨基甲酸乙酯)腹腔麻醉，分离气管，用动脉夹阻塞气管，然后专心电第Ⅱ导联观察心脏停跳时间，作为死亡指标。机能学专题知识讲座第80页(四)结果判定．

1．初试3只家兔体温升高均在0．6℃以下，它们体温升高总度数在1.4~C时，应认为供试品符合要求。

2．假如3只家兔中仅有1只体温升高超出0．6℃或0。6℃以上，或者3只家兔体温升高均低于0．6cc，但升高总度数达1．4℃或1．4℃以上，则应另取5只家免复试。假如在复试时，5只家兔中体温升高0．6cC或0．6~C以上家兔数仅有1只，而且初试和复试8只家兔体温升高总度数不超出3．5℃，则可认为复试供试品符合要求。

机能学专题知识讲座第81页3．假如初试3只家兔当中，体温升高0．6℃或0．6℃以上家兔数超出1只，或者复试5只家兔当中，体温升高0．6℃或0．6℃以上家兔数超出1只，或者初试和复试8只家兔体温升高总度数超出3.5℃，则应认为供试品不符合要求。

4．假如供试品是放射性药品，而测试3只家兔体温升高总度数在1．4℃以下，其中体温升高0．6℃或0．6℃以上家兔仅有1只，则能够认为供试品符合热原检验要求，不然，均应认为供试品不符合热原检验要求。机能学专题知识讲座第82页十、局部刺激性试验有些中草药或制剂因含有杂质较多，对人体组织有刺激性，严重者可能引发炎症、水肿、组织改变或坏死，对用药局部刺激尤其巨大。所以，应依据使用情况进行刺激性试验，方便掌握该药品特点，为选择给药路径提供依据，或者据以采取适当办法，降低或消除该药品刺激性。试验方法以下：

(一)兔角膜法取家兔2只。试验前先检验眼结膜血管，角膜透明度及眼分泌物等。选取一切正常家兔供试。把被试药品用氯化钠调整至靠近等渗。取药液2滴(0．05—0．1m1)滴入左眼结膜囊中，让其停留2分钟；右眼滴人同量生理盐水作为对照。观察1至数小时，必要时，须观察到作用消失为止。

机能学专题知识讲座第83页(二)兔耳皮下注射法取家兔2—3只，将两耳中部被毛剪光，在左耳中部皮下注射被试药液0.lml右耳中部皮下注射生理盐水0．1ml。注射时应避开小血管。然后，观察注射局部有没有红肿，充血等受刺激现象。如每只家兔受药耳与对照耳比较，都有较重红肿和充血现象，这说明该物有刺激作用。还能够测量注药部位充血直径，以比较各药品刺激性大小。本试验应一直观察到作用完全消失为止。同时，还应该注意局部药品吸收情况，有没有结或坏死现象。机能学专题知识讲座第84页

(三)腿肌注射法可供试验动物有家兔、大鼠、小鼠。将被试药品1ml，分别注射人家兔左、右后臀部股四头肌部位(如系小鼠则注射0．1ml；大鼠注射0．2ml左右)。24小时后(必要时，待2—3天后)将动物处死，切开注射部位肌肉，观察有没有充血、水肿、变性或坏死等现象，必要时要取出小块组织，作病理切片。

(四)结果判定标志无刺激，以“—”表示；极轻度刺激，以“±”表示；轻度刺激，以“+”表示；中度刺激，以“++”表示；重度刺激，以“+++’表示；；。严重度刺激，以“++++”表示；极严重度刺激，以“+++++”表示机能学专题知识讲座第85页十一、溶血试验一些中药注射剂，因为含有皂甙或因为其它物理、化学与生物学方面原因，注入血液内以后，可能产生溶血作用。也有些注射剂中含有少许鞣质等杂质，注入局部后会引发胀痛；注入血液后可引发血球凝集，造成血液循环机能障碍等不良反应。所以，在使用这类注射剂，尤其是供静脉注射用中草药注射剂之前，必须作溶血试验。普通说来，肌肉注射剂因为剂量相对少些，肌肉注射后能逐步吸收，逐步被血液稀释，影响不致太大。操作过程以下：

机能学专题知识讲座第86页(一)配制血液悬浮液取兔血(或羊血、犬血)5—lOml，放入洁净干燥小烧杯中，用竹管或玻璃棒搅拌出去纤维蛋白。然后加入生理盐水5—lOml，摇摆均匀，离心，倾倒出上层清液。如此重复数次，直至上层清液不再是红色为止。量取血球。加生理盐水稀释成2％悬浮液，供试验用。机能学专题知识讲座第87页

(二)测试方法取试管6只，编号，按以下次序加入各种溶液：表药品溶血试验

试管编号123456试验药液（ml）生理盐水（ml）2%（ml）机能学专题知识讲座第88页第6试管为对照管。将各管溶液轻轻摇匀，置于37℃恒温箱中(或25—27℃室温中)观察并统计1／2、1、2、3小时结果。如溶液变清并染红色，即表示溶血。必要时，可用显微镜观察红血细胞是否破裂。如0．3ml药液在半小时内引发溶血者，即不宜作注射用。最好是0．3ml药液在3小时内不引发溶血。如有血细胞凝集现象，可按下法深入判定，即凝集物在试管振摇后均匀分散，或将凝集物放在载玻片上，在波动边缘滴上2滴生理盐水，在显微镜下观察。如凝集红细胞能被冲散者，称为假凝集，此供试品可临床应用。如凝集物不能被摇散或在玻璃斤上小板／VBI者，称为真凝集，其制品不宜临床使用。机能学专题知识讲座第89页

十二、过敏试验过敏，多数是机体对药品变态反应，可强烈地表现于机体各个系统，引发血管神经水肿、红斑、皮疹等，严重者胸闷气短，血压下降，甚至休克或死亡。通常含异性蛋白质注射剂易引发过敏反应。必须按详细情况决定，是否要作过敏试验。详细作法以下：取豚鼠6只，体重250—350g，最好是雄性。已做过敏试验豚鼠不得再用作此项试验。间日腹腔注射0．3ml药液(应取用没有附加剂原药液)连续3次。将试验豚鼠分为两组。第一次注射后，过14天和21天再注射第二、三次。可由耳缘静脉或股静脉注射供试药液1—2ml。注射后15分钟，观察有没有过敏反应，如蜷缩、竖毛、呼吸困难，甚至死亡。如注射后15分钟内无上述症状，则可认为过敏试验阴性。如仅有个别症状，不易判断时，应重作试验。机能学专题知识讲座第90页第二节毒性试验新药(中西药制剂)研制过程中，为确保用药安全，在临床试用前，应进行系统药品毒性试验。经过毒性试验，可全方面了解新药毒性和副作用，中毒和致死量等，为临床试用提供参考和依据。依据新药用药次数或周期，药品性质或应用特点，可进行急性毒性和长久毒性试验等。一、急性毒性试验

(一)小鼠或大鼠急性毒性试验

1．半数致死量(LD5o)测定目标：观察受试物一次给予动物后，所产生毒性反应和死亡情况。动物分组和剂量动物：普通用小白鼠6—8周龄，体重18—22g，同次试验体重相差不超出2g8周龄，体重120—150g同次试验体重相差不超出10g。受试物：溶于水做成溶液，不溶于水做成混悬液。机能学专题知识讲座第91页

试验方法剂量：普通选取3—5个剂量，各剂量间剂依据受试物情况和预试结果而定。大白鼠6

给药路径：应与临床试验路径相一致。口服药品应灌胃给药，水溶性好药品应测定静脉给药急性毒性。绐药容积：小白鼠禁食(12—16小时)，不禁水。按体重计算：灌胃不超出0．4ml／10g体重：静脉内、腹腔内和皮下，不超出0．5ml／只。大白鼠禁食(12—16小时)，不禁水。灌胃不超出3mi／只；腹腔1．5ml／只：静脉和皮下测定LD50：将动物按体重随机分组，每组最少10只，雌雄各半。给受试物后，马上观察动物反应情况，天天观察一次，连续观察七天。逐天详细统计动物毒性反应情况及死亡分布，并用适当统计方法(简化机率单位法，寇氏法等)计算出LD5o值及95％可信限。列表表示。机能学专题知识讲座第92页试验资料按下表列出，用适当统计方法计算LD5o值

表LD50统计表受试物剂量对数剂量动物数死亡动物数死亡率机率单位LD50及可信限（mg/kg）（x）（只）（只）（%）（Y）机能学专题知识讲座第93页观察毒性反应：给受试物后应严密观察反应情况，并统计动物外观，行为活动，精神状态，食欲(饲料消耗量)，大、小便及其颜色、被毛、肤色、呼吸、鼻、眼、口腔有没有异常分泌物，体重改变以及死亡等情况。死亡动物应及时进行尸检，发觉病变器官应做病理组织学检验。若发觉中毒反应或死亡率与动物性别显著相关时，则应选择性别敏感动物进行复试。试验汇报和结果评价应详细详细，包含试验日期，动物规格、性别、数量、受试物起源及含量，试验方法。LD50值及其95％可信限，以及各剂量组死亡率，或最大耐受量值及其相当于临床剂量倍数。详细汇报试验过程中动物出现中毒表现及致死症状，综合评价受试物毒性大机能学专题知识讲座第94页2．最大耐受量(MTD)测定目标：当受试物(如中药制剂)毒性较低，测不出LD5o时，能够做一次或一日最大耐受量测定，也可反应受试物毒性情况。方法：受试物可用临床试验给药路径，以动物能耐受最大浓度、最大容积剂量，一次或一日内2—3次给予动物(小白鼠最少20只雌雄各半)。连续观察七天，统计动物反应情况，以不产生死亡最大剂量为最大耐受量。计算出总给予药量g／kg(中药制剂相当于生药量g／kg)表示，推算出相当于临床用药量倍数。测定最大耐受量，一样也应严密观察动物毒性反应情况，要求与观察单次给药毒性应相同。机能学专题知识讲座第95页(二)狗急性毒性试验目标：测定单次给以受试物近似致死量(ALD)最大耐受量(MTD)和急性中毒表现。受试物：应写明名称、批号、起源、纯度、质量规格、保留条件、配制方法。给药路径