电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用专家讲座

电子显微镜技术及在病理诊疗上作用小组组员高玉梅于虹郭峰刘阳张杰

指导教师吴岩教授

级电子显微镜技术硕士硕士课程电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第1页电子显微镜技术及在病理诊疗上作用一、电子显微镜技术

二、诊疗病理学三、电子显微镜技术在病理诊疗上作用四、讨论电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第2页（一）概念电子显微镜技术：也称电子显微技术或电子显微术电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第3页概念电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第4页1、电子显微镜：是用电子束成像显微镜，电子显微镜是一个高精密度电子光学仪器，它含有较高分辨率本事和放大倍数，是观察和研究物质微观结构主要工具。

创造背景：它是在发觉电子束含有波动性质及利用磁场改变电子束行径，在上述理论指导下创造出。电子显微镜主要分为两种类型：一个是观察样品内部超微结构透射电子显微镜，另一个是揭示样品表面形貌扫描电子显微镜。电子显微镜特征：电镜与光镜区分扫描电镜与透射电镜比较：（见下表）电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第5页扫描电镜和透射电镜比较项目扫描电镜透射电镜分辨本事70～100Å2Å发大倍数20～40万倍100万倍加速电压1～50KV几十千伏～几百千伏图像特点景深长、三维立体结构景深小、两维平面结构样品制备固定-脱水-临界点干燥-喷涂金属固定-脱水-包埋-超薄切片-重金属染色样品尺寸1cm350～100nm切片样品损伤光斑直径只有几十埃电子束在样品上扫描，对样品损伤极小大约1μm直径电子束打到样品上，造成一定程度损伤样品成像信号二次电子、背散射电子透射电子发大倍数调整用衰减器改变扫描线圈电流，进行放大率调整调整中间镜电流改变放大率决定分辨率原因入射电子束直径决定图像分辨率。加速电压、透镜缩小率、电源稳定度及像差决定电子束斑直径加速电压、电源稳定度、像差、样品厚度等影响分辨率电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第6页本图片来自中科科仪电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第7页本图片来自中科科仪电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第8页2、样品制备透射电镜样品制备惯用方法：包含超薄切片、冷冻复型、负染色等。扫描电镜样品制备：比透射电镜样品制备简单。除保留样品表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和切片。制备方法与透射电镜样品制备方法一样。电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第9页电子显微镜技术及在病理诊疗上作用一、电子显微镜技术二、诊疗病理学三、电子显微镜技术在病理诊疗上作用四、讨论电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第10页二．诊疗病理学概述病理学是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功效、代谢改变一门基础医学及其与临床医学之间桥梁学科。主要包含基础病理学、试验病理学及诊疗病理学(以往称外科病理学或临床病理学)。各级医院病理科所从事工作主要是诊疗病理学。病理检验内容通常包含活体组织检验、手术切除标本检验、术中冰冻检验、细胞学检验、尸体解剖检验等。病理检验伎俩很多,如:HE常规检验、特殊染色(组织化学)、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应(PCR)、电子显微镜检验、病理图像分析、流式细胞仪检验、细胞培养、传真病理学(telepathology)等。电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第11页电子显微镜技术及在病理诊疗上作用一、电子显微镜技术二、诊疗病理学三、电子显微镜技术在病理诊疗上作用四、讨论电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第12页三．电子显微镜技术在病理诊疗上作用（一）电镜检验起决定性作用（二）电镜检验起参考和修正作用（三）电镜检验起验正作用电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第13页三．电子显微镜技术在病理诊疗上作用（一）电镜检验起决定性作用：电镜发觉特异性超微结构信息做出最终病理诊疗。例：男,39岁,发觉右侧颈部无痛肿物1年余,花生米大,取肿物做活检。光镜:增大淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富嗜伊红细胞,直径约20μm。核圆,卵圆或扭曲状。间有增生淋巴细胞及嗜酸性粒细胞。电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质宽广,见有似网球拍或柄双膜结构(Birbeck颗粒),证实光镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞(图1)。诊疗为淋巴结朗格汉斯细胞组织细胞增生症。电镜诊疗含有独特确实诊价值。电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第14页图1

朗格汉斯细胞组织细胞增生症:见双模组成似网球拍状Birbeck颗粒。EM×10000注：图片取自张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等.235例疑难病理标本电镜诊疗价值.临床与试验病理学杂志;;15（5）电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第15页（二）电镜检验起参考和修正作用：电镜取得信息对光镜结果给予补充或修正,最终做出最终病理诊疗。

例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检,病理诊疗为淋巴组织增生。很快颌下淋巴结又肿大,再次淋巴结(颌下)活检病理诊疗为恶性淋巴瘤(免疫母细胞型)。电镜:瘤细胞大、多边形或不规则形,核质比大,核膜弯曲,不规则或奇特内陷,核常染色质丰富,网栏状大核仁。少许胞质突,胞质内核糖体丰富,其它细胞器稀少。质膜间见发育不良桥粒样连接(图2)。最终病理诊疗为颌下淋巴结转移癌。随即临床发觉鼻咽癌原发灶。此例电镜有确诊价值。电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第16页图2

转移癌:瘤细胞大、长圆形,胞核大、梭形,核膜不平滑,显著增大核质比质膜间有桥粒样连接,胞质含少许欠发达细胞器,网栏状大核仁,两团染色质间颗粒。EM×10000注：图片取自张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等.235例疑难病理标本电镜诊疗价值.临床与试验病理学杂志;;15（5）电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第17页（三）电镜检验起验正作用：超微结构信息深入证实、丰富了光镜组织学诊疗

例：男,30岁,肝穿活检。光镜诊疗:慢迁肝。虽未见经典碎屑样坏死,但不除外活动性改变。电镜见肝细胞大,疏松,细胞周围间隙加大,有微绒毛化,滑面内质网增生,内含管状体,肝窦内充塞胶原纤维。有区域见部分肝细胞胞质有胞溶,周围有淋巴细胞浸润。最终电镜诊疗:慢性迁延性乙型病毒性肝炎有轻微活动(图3)。电镜有确诊价值。电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第18页图3

慢性迁延性乙型病毒性肝炎:滑面内质网增生,腔内含量多乙肝表面抗原管状体。EM×8000注：图片取自张瑞祥,齐洁敏,张洁茹等.235例疑难病理标本电镜诊疗价值.临床与试验病理学杂志;;15（5）电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第19页电子显微镜技术及在病理诊疗上作用一、电子显微镜技术二、诊疗病理学三、电子显微镜技术在病理诊疗上作用四、讨论电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第20页四、讨论国内外对电镜诊疗价值,在肿瘤应用方面报道较多,Gyorkey等65%。文件中电镜诊疗价值比率高低不一样。主要原因是病例选择不太相同,使用标准、统计方法也不一样还有检验者光镜诊疗水平或侧重点不一样等原因也相关电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第21页应用电镜做最终病理诊疗工作,有以下几点注意：(1)因为电镜费用较高,制作程序繁杂,应有选择地送电镜检验。有临床医师,认为电镜是优于光镜先进技术而盲目送检,如胃镜取胃黏膜活检无选择送电镜检验,造成资源、人力和财力浪费。(2)电镜标本要求尽可能活体取材,马上投入预冷固定液中固定,以利完好地保留细胞超微结构。(3)包括病原学诊疗,尤其是怀疑病毒、支原体、衣原体等微生物感染标本应充分使用电镜。(4)作为辅助伎俩应用电镜时应做到:

电子显微镜技术和在病理诊疗上的作用第22页①在光镜观察基础上有放矢地做电镜观察

②半薄切片选区定位要求准确③超微结构观察仍应依次行组织学和细胞学观察,依据需要采取不一样放大倍率观察

④树立电镜观察是为取得组织细胞超微结构病理信息观