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文档简介

实验八重组质粒的酶切鉴定一、实验目的学习和掌握重组质粒的少量酶切、电泳及分析插入DNA片段的大小

二、实验原理EcoRI&PstI

BamHI单切试剂限制酶:BamHI、EcoRI和PstI酶切buffer:10K、10HDNAmarker:-HindⅢ琼脂糖,1TAE,

上样buffer1.酶切反应步骤

ddH2O于EP管→10buffer→质粒DNA→限制酶→混匀,离心5s→37℃,50→65℃水浴10

四、实验步骤(1)单酶切反应BamHI(15U/l)组/4人;30℃,50

成分ddH2O10KBufferDNABamHITotal需量(l)7.52100.520(2)双酶切反应成分ddH2O10HBufferDNAEcoRIPstI需量(l)7.52100.250.25EcoRI&PstI(15U/l)组/4人;37℃,50

酶切失败的可能原因

不全切或基本未切缓冲体系不合适酶量过多样品杂质含量高DNA被降解痕量DNase注意事项①吸量要准

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