原生质体定义

原生质Protoplasts是有组织的生活物质是细胞生命活动的物质基础全部的原生质有相像的基本组成成分和特性原生质体是由原生质特化而来细胞内由原生质组成的各种结构统称为原生质体它们彼此联系相互影响而构成一个有机整体担负着细胞的全部生命活动【1】。[1]R.V.Muralidhar;T.Panda.Fungalprotoplastfusion.BioprocessEngineering,2000,22:429-431原生质体技术的关键是对细胞壁进行消化以形成大量的原生质体并使原生质体能高频率的再生细胞壁回复到正常细胞状态当细胞壁去除后原生质体具有以下特征一是无细胞壁障碍可对膜和细胞器进行基础讨论同时可进行遗传操作二是具有全能性能在人工条件掌握下进行大量快速繁殖三是可诱导融合形成杂种细胞为体细胞杂交供应试验材料⑵，因此原生质体技术无论在理论上或实践上都日益受到重视[2]林学政，沈继红,李光友.海藻原生质体融合及杂交技术的讨论进展.海洋科^,2000,24(8):1-3人们曾探究使用研磨等机械方法和超声波等物理方法来制备原生质体效果都不抱负目前制备原生质体大都是采用酶解法脱去细胞壁原生质体技术作为基因工程的手段之，它可以直接作为外源DNA的导入、质粒转移、病毒传递等的受体以表达外源基因，具有无比的优越性。近年来，与人类健康有亲密关系的生理菌一乳杆菌在分子生物学领域的讨论相对滞后，在国内尤其如此。本讨论旨在通过对保加利亚乳杆菌原生质体的制备与回复的研讨，为乳杆菌的基因工程方面的讨论供应技术条件和试验基础。原生质体技术包括原生质体诱变、融合、转化等多项内容，在菌种特性改良和提高产量等方面取得了一系列成果⑶陈劲春，尉渤，潘乃燧.原生质体技术在工业微生物育种中的应用［JJ.工业微生物，1997,27(4):34—36.原生质体制备和再生是各项原生质体技术得以应用的基础和前提。各种微生物细胞壁的组成和结构不同，因而不同菌种原生质体制备和再生的条件也不相同⑷5】。［4］孙剑秋，周东坡.微生物原生质体技术口】.生物学通报,2002,37(7):9—11..5,周东坡，平文祥.微生物原生质体融合【M】.哈尔滨：黑龙江科学技术出版杜.1990.本试验讨论了影响纳豆菌原生质体制备和再生的诸多因素，并确定了最佳条件，为进一步选育优良菌种和纳豆菌生物学功能的开发奠定了基础。目前，针对纳豆菌的原生质体制备和再生，国内外尚未见有相关报道摘要目的：通过刈保加利亚乳杆菌的生质体的制备和回复的方法学研讨，为乳杆菌的基因操作和其相关讨论供应技术思路和试验条件.方法：用酶浓度分别为Ifg/nil.4g/I11L10Fg/nilMutanolysin(变溶菌素)对保加利亚乳杆菌进行处理，脱去细胞壁以研讨其原生质体形成与时间和酶浓度的关系；并选用较为相宜的酶浓度制备其原生质体，在自制的双层再生培育基上观看其原生质体在一般培育、COe培育、厌氧培育时的回复生长状况结果：保加利亚乳杆菌对Mu［anolysin较敏感，酶浓度为Ig/nil时只需40min大部分菌体形成原生质体.经Ip.g/mlMutanolysii3处理后制得的保加利亚乳杆菌原生质体倾人自制的双层再生培育基中，置于co,和厌氧环境条件下培育能很好的回复生长。结论：本文的讨论为乳杆菌的基因工程方面的讨论供应了卡日关的技术条件和试验基础。关键词：保加利亚乳杆菌；原生质体；制备；再生中图分类号：Q939文献标识码：AStudiesofprotoplastsformationandregenerationinLactobacillusbulgar&usZHANGLibyan.CHEIin.ZHAGDe—chun(GuangdongProzrin~'ia/People1SHospital,(;uangzkou510080,China)Abstract:Objective:Thetechniqueofthisarticlecouldprovideacorrespondingmethodologytogeneticengi—neerofLJLcillus.Methods:Fheprcx.tuctionofLzwt{〜acillusbulgaricusofprotoplastsWaSperfomledlyticen—zymescontainingI/xg/mls4/Ig/ml、10tig/mlMutanolysinrmpectively.Wealsoinvestigatedregenerationofpro—toplaStsofLobacillusbulKari~HSindifferentcultureenviromnentsResults:Theresultsobtainedinthestudyindicatedthatprotoplastsfommtionin?c(cillusbu:garicushavebeenSuccessfullyperformedbyusingMu一tanolysin.Moreoverztherateofregenerationofprotoplasts"washighwhenitwereculturedinaandanaerobicconditionsbydouble-layerregenerationreedium